第8届国际疫苗年会简介

第8届国际疫苗年会于2005年5月8～11日在美国巴尔地摩（Baltimore）召开,共有来自35个国家500多名代表参加。会议针对至今尚无疫苗保护的病毒性疾病,如人乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒和对正在研究中的疫苗进行了报道。本次会议的报告和讨论议题主要涉及疫苗的基础免疫研究、产品开发、临床试验和规则制定等方面。会议讨论了疫苗研究的最新科技进展和在疫苗开发、生产、有效接种等方面所面临的新机遇和挑战。     

靶向HPV16-E6的siRNA对宫颈癌CaSki细胞的抑制作用

以RNA干扰技术为手段,HPV编码的癌蛋白E6为靶标．探讨靶向HPV16-E6的siRNA对宫颈癌细胞生物学行为的影响,并试图阐明该实验的临床意义．构建靶向HPV16-E6的siRNA表达载体,应用体外转染试剂转染HPV16-E6阳性的宫颈癌CaSki细胞．以RT—PCR检测CaSki细胞中E6蛋白的mRNA的表达．借助细胞色素c测定来分析细胞凋亡相关分子的表达和活性．从而研究靶向HPV16-E6的siRNA诱导细胞凋亡的分子机制．RT．PCR检测结果表明,将靶向HPV16-E6的siRNA的表达载体瞬时转染到HPV16-E6阳性的CaSki细胞后,其所舍E6蛋白质和mRNA的表达下调;Westernblotting栓出抑凋亡蛋白Bcl．2的表达亦告下调;细胞色素C释放实验结果显示,HPV16-E6siRNA能够诱导细胞色素c从线粒体释放到细胞浆中。从而诱导细胞凋亡．靶向HPV16-E6的siRNA能够有效抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡．靶向HPV16-E6的siRNA为研究重要致瘤蛋白HPV16-E的功能开辟了新途径,给HPV16-E6阳性肿瘤的靶向基因治疗提供新的实验依据．并探索了HPV感染及宫颈癌的新基因疗法．     

以Candin为佐剂的人乳头瘤病毒多肽治疗疫苗诱导小鼠的体液免疫应答

目的 研究以Candin为佐剂的人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）多肽治疗疫苗诱导小鼠产生的体液免疫应答。方法 分别采用PBS（对照）、佐剂Candin（150 μL/只）、HPV16 E7多肽[3个E7多肽片段,50 μg/(段·只)]和包含佐剂Candin与HPV16 E7多肽的疫苗对C57BL/6小鼠进行免疫接种实验,在第21天和第42天各加强1次免疫,剂量同第1次免疫。第3次免疫后2周,颈脱位处死小鼠,取血清。以ELISA法检测血清总IgG、IgG1和IgG2a抗体浓度。结果 经多肽（P=0.001,P<0.001）和疫苗（P=0.001,P=0.008）免疫的小鼠总IgG抗体、IgG1抗体水平均较对照组高,差异有统计学意义。与对照组相比,疫苗（P=0.008）可明显提高小鼠血清中IgG2a抗体水平。结论 包含佐剂Candin及HPV16 E7多肽的疫苗能诱导小鼠产生明显的体液免疫应答。     

人乳头瘤病毒特异性T细胞系细胞冻存后细胞的存活率及功能

研究人乳头瘤病毒特异性T细胞系细胞冻存后细胞的存活率及功能。应用包含10%二甲基亚砜、90%小牛血清的冻存液冻存6个T细胞系(5个CD4 T细胞系,1个CD8 T细胞系)细胞,液氮中冻存32~54个月后复苏,台盼蓝染色法检测复苏后T细胞系细胞的存活率,用酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)检测复苏后T细胞系细胞的功能。结果显示,6个T细胞系细胞液氮冻存解冻后细胞的存活率为24.7%~93.5%,过夜培养后细胞的存活率为2.5%~72.2%。CD8 T细胞系细胞的存活率高于CD4 T细胞系细胞。6个复苏后的T细胞系细胞在PHA诱导后均能分泌IFN-γ。人乳头瘤病毒特异性T细胞系细胞冻存复苏后能够保持较好的存活率和功能。     

大肠杆菌表达的病毒样颗粒疫苗

重组病毒样颗粒是病毒衣壳蛋白外源表达的重要形式,形态结构与天然病毒高度相似,位于纳米尺度的大小易于被免疫系统识别,可激发机体产生保护性免疫反应,且不含有病毒基因,因此,是一种理想的疫苗形式,也是基于结构进行疫苗设计的重要结构载体。目前已上市的乙型肝炎疫苗、人乳头瘤病毒疫苗和戊型肝炎疫苗等基因工程疫苗均采用病毒样颗粒形式。大肠杆菌表达系统被广泛用于基因工程药物的生产,具有安全性好、生产周期短、易于放大生产等优点,在病毒样颗粒疫苗应用上具有良好前景。本文综述了利用大肠杆菌研制戊型肝炎疫苗和人乳头瘤病毒疫苗的进展,特别是这些病毒样颗粒疫苗的表达及组装、表位结构特征和临床试验结果。     

CRISPR/Cas系统在病毒感染性疾病治疗中的应用进展

CRISPR/Cas(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associate)系统作为当下炙手可热的基因编辑技术,近几年在各方面取得了诸多进展,本文就CRISPR主要类型Cas蛋白的作用方式,CRISPR/Cas技术在病毒感染性疾病中的应用,作用机制,当下治疗方法进行讨论,着重对人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）、单纯疱疹病毒I型（Herpes simplex virus-1,HSV-1）、EB病毒（Epstein-barr virus,EBV）、乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）、人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）、人类嗜神经多瘤病毒JC(Polyoma JC virus,JCV)、非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）进行综述。     

头颈部肿瘤基因组中HPV16DNA的同源序列

利用头颈部肿癌临床活检新鲜组织和石蜡包埋组织的两种处理标本,分别采用核酸分子杂交和聚合酶链反应(PCR)两种技术,分析了头颈部肿瘤组织基因组中人乳头瘤病毒16型的同源序列,并研究HPV16的感染同头颈部肿瘤发生发展的关系。结果表明:1.喉鳞状细胞癌DNA中有HPV16 DNA同源序列,检测频率在20.0％以上。2.PCR扩增石蜡包埋肿瘤组织DNA中HPV16的URR(病毒基因上游调控区)中的序列,电泳分析扩增产物在喉乳头状瘤、喉癌、鼻腔内翻性乳头瘤和口腔癌中检测率分别是11.1％、20.0％、42.9％和27.3％。3.研究表明HPV16 DNA阳性率与喉癌原发部位,分化程度和临床分期之间可能有一定的相关性。人乳头瘤病毒可能是头颈部肿瘤的病毒病因之     

妊娠期女性HPV感染及阴道微生态失衡对妊娠结局及新生儿的影响

探讨妊娠期女性人乳头瘤病毒（HPV）感染及阴道微生态失衡对妊娠结局及新生儿结局的影响,为该类患者的治疗提供参考。

选取2020年6月至2023年6月于我院产检的102例HPV阳性妊娠妇女（HPV阳性组）以及同期产检的78例HPV阴性妊娠妇女（HPV阴性组）为研究对象,于怀孕28～34周时,收集阴道分泌物评价阴道微生态状况;另根据微生态评价结果将HPV阳性组对象分为微生态正常组（n=26）和微生态失调组（n=76）;比较HPV阳性组与HPV阴性组对象阴道微生态情况、妊娠结局及新生儿结局,比较微生态正常组与微生态失调组对象妊娠结局及新生儿结局。

HPV阳性组和HPV阴性组对象滴虫性阴道炎（TV）和外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）发生率、阴道清洁度比较差异均无统计学意义（χ²=1.520、0.678、0.111,均P＞0.05）,而阴道pH、细菌性阴道病（BV）发生率、阴道菌群密集度、阴道菌群多样性以及微生态失调发生率比较差异均有统计学意义（χ²=10.106、8.247、4.337、5.236、13.865,均P＜0.05）。HPV阳性组对象早产、宫内感染、产褥感染及产后出血发生率显著高于HPV阴性组（χ²=5.710、10.721、6.799、4.294,均P＜0.05）,而两组对象剖宫产率及胎膜早破发生率比较差异无统计学意义（χ²=1.067、0.666,均P＞0.05）。HPV阳性组新生儿感染发生率显著高于HPV阴性组（χ²=9.001,P＜0.05）,两组胎儿窘迫、新生儿窒息和胎儿宫内生长受限（FGR）发生率比较差异均无统计学意义（χ²=2.503、1.547、0.560,均P＞0.05）。微生态失调组对象早产发生率显著高于微生态正常组（χ²=4.130,P＜0.05）,而两组胎膜早破、宫内感染、产褥感染及产后出血发生率比较差异均无统计学意义（χ²=1.401、0.578、0.141、1.368,均P＞0.05）。微生态失调组与微生态正常组胎儿窘迫、新生儿窒息、FGR和新生儿感染发生率比较差异均无统计学意义（χ²=0.261、0.698、1.057、0.242,均P＞0.05）。

妊娠期HPV感染能引发阴道微生态失调,增加不良母婴结局发生风险。

     

鞭毛蛋白FliC突变体／HPV18L2N融合蛋白的表达与纯化

目的：人乳头瘤病毒（HPV）的持续性感染导致女性宫颈癌的发生。HPV的次要衣壳蛋白L2可以诱发交叉中和多种型别HPV的中和抗体,但是单独免疫L2诱发的抗体滴度较低。鼠伤寒沙门氏茵鞭毛蛋白FliC是一种有效的佐剂。删除FliC超变区域的突变体可与外源抗原融合表达并且显著增强外源抗原特异性抗体的产生。本研究旨在构建鞭毛蛋白FliC超变区删除突变体与HPV18L2N（aa．13—154）的融合基因,通过大肠杆菌原核表达系统表达F1ic突变体与HPV18L2N的融合蛋白并纯化,为研究鞭毛蛋白的佐剂活性及新型HPV18L2疫苗奠定基础。方法：以鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白编码基因fliC为模板,通过重叠PCR法构建删除fliCD3区域（fliCAD3）、D3＋CD2a区域（fliCAD3CD2a）、D3＋D2区域（fliCAD2D3）的突变体,同时将HPV18L2N基因插入置换突变体的超变区删除区域。含有重组基因的表达载体在大肠杆菌中诱导表达,经SDS—PAGE及Westernblot鉴定分析。表达的融合蛋白经Ni—Sepharose亲和层祈纯化及Q-Sepharose离子交换层析去除内毒素。纯化后的融合蛋白经Native—PAGE鉴定分析,通过鲎试剂凝胶法测量蛋白溶液中的内毒素含量。结果：构建了pET22b．fliCAD3／18L2N、pET22b—nic△D3cD2a／18L2N、pET22b—fliCAD2D3／18L2N重组载体。重组载体在大肠杆菌以包涵体形式高效表达,且主要以单体形式存在。结论：通过原核表达及层析法纯化,成功获得了无热源、高纯度的鞭毛蛋白FliC突变体与HPV18L2N的融合蛋白,为增强HPVL2免疫原性提供了一种新的途径,为进一步研制HPV18L2疫苗奠定了基础。