人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白在HeLa细胞中的表达及亚细胞定位

目的构建增强绿色荧光蛋白（EGFP）-人乳头瘤病毒16型变异株E7（HPV16-HBE7）重组质粒pEGFP-HBE7,研究HPV16-HBE7蛋白亚细胞定位,为进一步了解其生物学功能奠定基础。方法采用分子克隆技术,将HPV16-HBE7基因克隆在pEGFP—Cl表达载体上,用脂质体法导入宫颈癌细胞中;Western印迹检测HBE7蛋白的表达;同时借助免疫荧光技术和EGFP-融合蛋白技术,采用激光共聚焦显微镜观察HBE7蛋白的亚细胞定位。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定,其目的片段大小、插入位点和核苷酸序列完全正确;结果表明,转染细胞HBE7蛋白的相对表达量其胞浆明显多于胞核;各个时间段HBE7蛋白均以胞浆分布为主,绿色荧光密集点状分布于细胞浆内,而野生株E7（WE7）蛋白分布在核内。结论人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白主要分布在细胞浆内,以胞浆为主的分布可能和HBE7基因发生突变后丢失核定位信号有关。     

2015-2018年重庆万州区女性HPV的感染状况、基因亚型及年龄分布研究

摘要 目的：研究2015-2018年重庆万州区女性人乳头瘤病毒（HPV）的感染状况、基因亚型及年龄分布。方法：选取2015年1月-2018年12月期间重庆万州区进行两癌筛查以及前来我院就诊的女性,共计1203例,采用PCR－反向点杂交法检测HPV感染情况,分析各个年龄段HPV的感染状况、各个年龄段HPV感染基因亚型以及各个年龄段HPV单一感染和多重感染情况。结果：接受HPV检测的1203例女性中共有457例出现HPV感染,感染率为37.99%,其中<30岁35例,感染率为36.84%;30~39岁117例,感染率为37.74%;40~49岁120例,感染率为35.82%;50~59岁127例,感染率为37.46%;≥60岁57例,感染率为45.97%,各个年龄段之间的HPV的感染率比较差异有统计学意义（P<0.05）,457例患者中共有635个HPV感染基因,其中高危型感染基因共568个,占感染基因的89.45%,低危型感染基因共67个,占感染基因的10.55%。单一感染人数共333人,占总感染人数的72.87%,其中高危单一感染共301人,占总感染人数65.86%,低危单一感染共32人,占总感染人数7.00%。多重感染人数共124人,占总人数的27.13%。结论：2015-2018年重庆万州区女性HPV感染率为37.99%,其中≥60岁年龄段的女性HPV感染率最高,高危感染和单一感染为主要的感染类型。     

常用功率密度CO2激光治疗尖锐湿疣时烟尘中HPV DNA的检测

目的 :了解临床常用功率密度的 CO2 激光治疗尖锐湿疣术中烟尘是否含有 HPVDNA。方法 :选择皮损较多的尖锐湿疣 ,病程在 6个月以内的患者作为研究对象 ,分别用 5 W、1 0 W、1 5 W对应功率密度下的 CO2 激光汽化在体疣体组织 ,离光斑 5 cm或 5 0 cm处用吸尘器抽吸烟尘于 PBS中 ,经固定后观察烟尘的细胞形态学 ,并用 HPV通用型引物作 PCR检测烟尘是否含有 HPV-DNA。结果 :三种功率密度的烟尘主要由炭化颗粒组成 ,其中含有少量破碎的上皮细胞及形态完整和不完整的单个表皮细胞或细胞团 ;PCR检测 CO2 激光在 5 W、1 0 W、1 5 W对应功率密度下治疗时的烟尘 ,HPV DNA阳性数分别为 :1 /1 3、3 /9、3 /1 5例。结论 :CO2激光常用功率密度治疗尖锐湿疣时 ,烟尘中有 HPV DNA存在 ,为防其对人体造成的危害 ,需要及时抽排烟尘。     

绝经后妇女阴道微生态改变与人乳头瘤病毒感染的相关性

目的 探讨绝经后妇女阴道微生态改变与人乳头瘤病毒(HPV)感染的相关性。 方法 选取2018年3月至2019年3月就诊于周口市中心医院妇科门诊绝经后妇女873例为研究对象,根据感染的HPV DNA基因分型结果分组,检测研究对象阴道分泌物的清洁度、病原体及阴道微生态相关指标,对阴道微生态改变和HPV感染相关性进行统计分析。 结果 873例调查对象中有137例(15.7%)HPV感染者。HPV感染组和未感染组相比较,清洁度(χ2=20.2,P2=17.8,P2=14.0,P2=15.5,P2=8.7,P=0.003)差异有统计学意义,菌群多样性、H2O2阳性率差异无统计学意义(均P>0.05)。多因素回归分析显示清洁度、菌群密集度、pH值异常和白细胞酯酶阳性率异常与HPV感染明显相关(均P结论 绝经后HPV感染患者存在阴道微生态失调,且HPV感染与清洁度、菌群密集度、pH值异常和白细胞酯酶阳性率异常有关。     

人乳铁蛋白基因克隆及细胞表达研究

通过PCR法直接克隆了2.366kb的人乳铁蛋白基因cDNA序列及800bp的山羊β乳球蛋白基因5′ 端调控序列,并连接到表达载体pLNCX中。利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因cDNA的重组质粒pLNCXHLF,并导入到小鼠乳腺癌细胞株MA∕782中,G418及PCR筛选获得阳性单克隆细胞,增殖后,转染细胞利用海藻酸钠固定化包埋培养,经激素诱导,培养液上清通过Western印记检测证明,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白,分子质量为34kDa;ELISA法测出,每升培养基(含105个细胞)重组蛋白最高表达量为65mg;抗菌实验表明,所获得的重组人乳铁蛋白具有抑制大肠杆菌生长的作用,而且比人乳铁蛋白标准品作用更强。 Abstract:In this paper,we directly cloned 2.366Kb cDNA sequence of human lactoferrin gene and 800bp 5′flank regulatory sequence of β/lactoglobulin gene from goat by PCR,then connected them with the expression vector pLNCX.The recombinant plasmid pLNCXHLF containing human lactoferrin gene cDNA was transfected into mice mammary tumor cell line MA/782 after liposome transinfection.Positive single clone cells were selected with G418 and by PCR.After proliferating,the transfected cells immobilized and cultured in soldium alginate were induced by hormone.The result of Western blotting analysis on cultured cell supernatant shows that transfected cells can express the exogenic gene and secrete hLF protein,whose MW is 34 KD.The highest amount detected by ELISA reached 65mg/l medium/105 cells.The result of antibacterial experiment indicates that the recombinant hLF protein has the effect of inhibiting E.coli proliferation;moreover,its activity is superior to the commercial available hLF′s.     

人乳头瘤病毒16型晚期蛋白质基因L1的克隆及表达

人乳头瘤病毒16型(HPV16)含有两个晚期开放读码框(L_1ORF和L_2ORF),L_1ORF编码主要衣壳蛋白,我们用质粒pHPV16、p16L_2BX_5和pATH,采用基因重组技术,制备了含有HPV16个长L_1ORF序列的基因克隆p16L_1BN(5071—253),它能在大肠杆菌中有效表达,产生分子量约90KD的含有E. coli trpE的融合蛋白。Western blot检测,该蛋白可被抗牛乳头瘤病毒的抗体识别,这说明克隆p16L_1BN能有效表达,基因产物具有乳头瘤病毒型的共同抗原的性质。     

切割HPV-6bE1和HPV-11E1通用核酶Rz 1282的体外活性鉴定

利用计算机分析 HPV- 6b E1和 HPV- 1 1 E1 m RNA的同源序列 ,设计出通用于两者的锤头状核酶—— Rz1 2 82 (HPV- 6b基因 1 2 82位 ) ,通过体外转录建立了体外大量制备 Rz1 2 82的方法 .体外的切割实验表明 ,Rz1 2 82可在体外准确和有效地切割 HPV- 6b/1 1 E1靶 RNA,形成 2 68nt/52nt和 2 31 nt/52 nt大小的切割产物 .对于 HPV- 6b,Km和 kcat值分别为 1 3.8nmol/L和 0 .0 7min-1;对于 HPV- 1 1 ,Km 和 kcat值分别为 2 3.0 nmol/L和 0 .2 4 min-1.结果表明 ,体外制备的 Rz1 2 82具有较好的特异催化切割活性 ,并通用于 HPV- 6b及 HPV- 1 1 .它有望发展成为在细胞内有效抑制HPV- 6b/1 1 DNA复制的核酸药物 .     

大连地区2934例女性子宫颈人乳头瘤病毒感染情况及宫颈癌防治策略探讨CSCD

目的 了解大连地区女性子宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染情况,探讨适合本地的宫颈癌防治策略。方法 回顾性分析2019年5月至2020年12月于我院进行子宫颈脱落细胞HPV检测的成年(25~64岁)女性2 934例,采用基因芯片法检测17种高危型HPV(hr-HPV)和9种低危型HPV(lr-HPV),对检测结果进行统计分析。结果 (1)HPV总体感染率为15.58%(457/2 934),其中hr-HPV感染率为13.33%(391/2 934),lrHPV感染率为3.92%(115/2 934)。感染率排名前3位的hr-HPV亚型依次为HPV16、58、52,感染率前3位的lr-HPV亚型依次为HPV54、40、55。(2)单一亚型感染率为11.83%(347/2 934),以单一高危亚型感染为主(285/347);多重感染率为3.75%(110/2 934),以纯高危亚型感染为主(57/110)。(3)35~44岁女性HPV总体感染率和hr-HPV感染率均最低,分别为14.15%和12.46%;34岁以下和45岁以上女性HPV总感染率和hr-HPV感染率均有所升高。(4)2价和4价HPV疫苗对本研究中hr-HPV感染女性的覆盖率均为25.83%(101/391);9价疫苗对hr-HPV感染女性的覆盖率为63.68%(249/391)。结论本研究女性子宫颈HPV感染率处于全国平均水平或以下,型别分布特点与国内人群基本相符。疫苗覆盖率低和疫苗获取困难造成一级预防效力有限,二级预防仍是宫颈癌防治的工作重点。     

伴高危型HPV感染的LSIL患者HPV清除与 阴道微生态间的关系

目的探讨阴道微生态对伴有高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的低级别鳞状上皮内病变(LSIL)患者HPV清除速度有无影响。方法选取阴道镜下宫颈活检病理诊断为LSIL或CIN1,且均合并HR-HPV感染的患者351例,随访1～2年,观察入组时的阴道微生态状态与随访6个月及12个月时的HPV清除情况。结果对于有随访结果的334例,至随访6个月时,细菌性阴道病(BV)组HPV转阴率为20.29%,低于阴道微生态正常组(32.35%,P0.01),其余外阴阴道假丝酵母菌组、滴虫性阴道炎组及其他微生态失衡组与阴道微生态正常组间比较差异无统计学意义。至随访12个月时,各微生态失衡组与微生态正常组间HPV转阴率差异均无统计学意义。结论 BV感染可能在短期内影响LSIL患者HPV清除速度。     

肛门生殖器区肿瘤组织中HPV的快速检测和分型

迄今已发现的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）型已超过７７型,其中至少有３０个型与泌尿生殖道肿瘤有关。所以ＨＰＶ的检测与分型对于泌尿生殖道肿瘤的病因和预后将是非常重要的。ＨＰＶ有很大的异质性,故用常规的诊断技术来测定未知标本中的ＨＰＶ基因型有一定困难。为此,我们应用了反向点杂交法（ＲＯＢ）来检测ＨＰＶ分型。即用７种序列特异性寡核苷酸探针分别对应７型ＨＰＶ（ＨＰＶ６Ｂ、１１、１６、１８、３１、３３、３５）,这些