干细胞外泌体对内皮细胞增殖迁移和血管生成的影响

[目的]探究脂肪间充质干细胞来源的外泌体对人脐静脉内皮细胞的迁移和血管生成的影响。[方法]利用超速离心法提取脂肪间充质干细胞来源的外泌体;通过透射电子显微镜观察外泌体的形貌;通过免疫印迹法检测外泌体的标志蛋白;通过动态光散射法检测外泌体水合粒径;通过CCK-8法检测外泌体对HUVECs增殖的作用;通过划痕实验和Transwell实验检测外泌体对HUVECs迁移的影响;通过血管生成实验评估外泌体诱导HUVECs生成血管的能力。[结果]脂肪间充质干细胞外泌体的平均水合粒径约为151.9±12.3 nm,含有外泌体的标志蛋白CD63、TSG101。外泌体浓度为30μg/mL时,共孵育48 h后,EXO组HUVECs的增殖率高于NC组14%;划痕实验中NC组的平均迁移率约为0.45±0.05,EXO组约为0.63±0.05,EXO组的迁移率显著高于NC组约为0.18±0.07,而Transwel中48 h时NC组的单位面积平均转移细胞数约为167±24,EXO组约为728±49。4 h的成血管实验显示外泌体组管的NC组平均结点数约为495±52,EXO组约为658±76;NC组单位图像平均分支...     

人体β-珠蛋白基因5’旁侧调控元件与不同发育时期调控因子的相互作用

人β-珠蛋白基因主要在成年期的骨髓中表达,在胎儿肝,成年肝和K 562细胞中则处于关闭状态。凝胶电泳阻抑法分析发现,在人胎儿肝,成年肝及K 562细胞的核蛋白抽提物中存在着不同的与β-珠蛋白基因5'旁侧调控元件(-372到-194 bp)相结合的红系组织特异性的调控因子。竟争试验的结果表明,成年肝和K 562细胞中的调控因子与β-珠蛋白基因5'旁侧调控元件相互作用的方式具有一定的相似性,这两种细胞的调控因子既结合于负调控区(NCR 2)也结合于正调控区,说明两种细胞中β-珠蛋白基因的关闭机制可能是相似的。胎儿肝的核蛋白因子只结合于负调控区,推测在胎儿期存在独特的关闭机制。     

生长特性差别的胃癌MGC803细胞亚系间细胞骨架、细胞通讯与癌基因表达的比较研究

肿瘤细胞表型差异是临床药物敏感性、抗原性、转移性、潜伏性和进展速度等差异的主要原因。为了弄清恶性表型差别的表现、相关性及调节机理、我们从胃癌MGC 803系分离了单细胞亚系,各亚系按克隆过程的时间差别归纳分组,选快组M 17、中组M 6和慢组M 3进行比较。软琼脂生长实验表明三者的恶性程度有显著差别;M17恶性度最高,M3最低,M6居中。与其它表型联系比较,证明细胞生长速度、细胞微丝、微管骨架破坏及细胞通讯功能抑制都与锚着不依赖性生长的恶性特征有平行相关性。同时,M 17和M 3原癌基因表达有明显差别。     

同时表达麻疹病毒L4株HA和F蛋白及人白细胞介素2(IL2)的重组痘苗病毒疫苗株的构建

构建了同时表达麻疹病毒ＬＡ株ＨＡ和Ｆ基因及人白细胞介素２（ＩＬ２）的重组痘苗病毒疫苗株ＲＶＪＭＬＨＡＦＫＩＬ２。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ结果显示,ＨＡ、Ｆ和人ＩＬ２基因均在痘苗病毒中稳定有效表达,且产物与天然蛋白相近。ＨＡ分子有糖化的７９ｋＤ和非糖化的田ｋＤ两种形式;Ｆ分子以６０ｋＤ的前体Ｆ０、４３ｋＤ的Ｆ１和１８ｋＤ的Ｆ２三种形式存在。表达产物的血凝效价为１：８,血溶活性ＯＤ５４０的测定结果是Ｏ３７。该重组病毒免疫新西兰白兔及Ｃ５７小鼠,可以产生抗麻诊病毒ＨＡ和Ｆ蛋白的特异性ＥＬＩＳＡ（１：６４４～１６００）、血凝抑制（１：２５６～５１２）、血溶抑制（１：８０～１６０）和ＮＴ（１：６４０）抗体。接种兔及裸鼠后的毒力反应,明显低于只表达ＩＬ２的重组痘苗病毒疫苗株ＲＶＪ１２３,表现为兔皮肤红肿范围小,持续时间短,皮肤无坏死;裸鼠毒力的结果,表现出ＲＶＪＭＬＨＡＦＫＩＬ２病毒只存留于接种局部,而且滴度大大降低,未发现该病毒向其它脏器播散和增殖。麻疹重组痘苗病毒疫苗株的构建为该疫苗株的人体免疫观察奠定了基础。     

人抗E．Coli J5噬菌体抗体制备的初步研究

以E．Coli J5株对合人Ig基因的噬菌体抗体库进行淘筛富集,免疫印迹筛选,以及ELISA检测,结果获得4株能与E．Coli J5株结合的阳性克隆,且阳性克隆结合抗原的活性可分别被E．Coli J5株、E．Coli Rc-LPS和抗E．Coli J5株核心糖脂域MAb抑制．PCR检测表明,4株阳性克隆均分别带有约660bp大小的重链和轻链基因片段．SDS－PAGE与蛋白质印迹的结果显示,经IPTG诱导的阳性克隆能表达分子量约为50000大小的蛋白,提示该4株阳性克隆能够表达具有一定抗原结合活性的人源Fab片段．     

人乳头瘤病毒研究的新进展

人乳头瘤病毒研究的新进展于修平,卞继峰（山东医科大学微生物学教研室,济南２５００１２）ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＨｕｍａｎＰａｐｉｌｌｏｍａＶｉｒｕｓｅｓ￥ＹｕＸｉｕｐｉｎｇ;ＢｉａｎＪｉｆｅｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌ...     

人外周血树突状细胞的形态学研究

血树突状细胞是一种重要的免疫辅助细胞,可以从外周血分离获得。本研究对自人外周血分离的树突状细胞进行了免疫细胞化学、透射电镜和扫描电镜观察。结果表明,血树突状细胞呈Ｓ—１００蛋白阳性反应,ｌｙｓｏｚｙｍｅ阴性反应。细胞形态不规则,有长短、粗细不等的突起,核不规则且多扭曲。体外培养时,血树突状细胞可互相接触,或数个聚集成群或与淋巴细胞形成花环。实验中发现Ｓ—１００蛋白阳性的血树突状细胞有两种不同的形态类型。文中除对血树突状细胞的生理功能进行了讨论外,还提出了这两类细胞很可能是外周血树突状细胞的前体细胞和成熟的树突状细胞。     

PCM多道生理遥测仪

本文介绍心电,脑电,肌电等多生理参数的多道遥测系统的组成,工作原理和使用情况。本机采用ＰＣＭ－ΔＰＳＫ－ＦＭ调制方式,设有主,副次三种交换子。     

人胸腺素α原cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用２０ｕｇ／ｍｌ植物血球凝集素（ＰＨＡ）和５００Ｕ／ｍｌ重组人白细胞介素２（ＩＬ－２）联合刺激人胎儿胸腺细胞,从中提取总ＲＮＡ,经反转录ＰＣＲ获得了人胸腺素α原ｃＤＮＡ;将之克隆入ｐＵＣ１９中,序列测定表明与已报道序列一致,进一步将之亚克隆入原核表达载体ｐＢＶ２２０,转化大肠杆菌ＤＨ５ａ．观察到在不改变氨基酸编码的前提下,增加胸腺素ａ原上游引物中Ａ、Ｔ含量,可以明显提高胸腺素α原的表达量,同时,不同培养基对它的表达也有影响。胸腺素α原在大肠杆菌中以可溶形式表达,不需复性。初步活性测定显示,它可明显刺激人外周血淋巴细胞Ｅ－玫瑰花结形成率。重组人胸腺素α原在大肠杆菌中表达,为其临床应用及基础研究奠定了基础。