体外肿瘤微血管生成模型的建立

本研究以体外微血管培养模型为基础,用鼠尾胶原包埋大鼠动脉环,并将包埋的动脉环转移到种有人肺癌A549细胞单层的培养皿中,用MCDB 131无血清培养液对动脉环和肿瘤细胞进行共培养,从而建立肿瘤微血管体外生成模型。大鼠动脉环于培养后第3天从血管壁长出微血管芽,第6至10天长成微血管丛,两周后新生微血管开始萎缩;没有肿瘤细胞刺激的条件下,大鼠动脉环新生微血管数量明显减少。结果表明人肺癌A549细胞能够促进血管生成。体外大鼠动脉环肿瘤微血管培养模型操作简单、灵敏度高,适合研究肿瘤血管新生及其机制。     

黄芪甲苷在大鼠体内的药代动力学和组织分布研究

建立了固相萃取-HPLC-MS测定大鼠血浆中黄芪甲苷含量的方法,并对其在大鼠体内的药代动力学和组织分布进行了研究。分别以1,2,4 mg/kg的剂量对大鼠静脉给药,给药后2,10,20,30,60 min和1.5,2,3,4,6,8 h采集血样,同时以2 mg/kg的剂量对大鼠静脉给药,给药后20,60,240 min采集各组织,测定血浆样品和组织样品中的黄芪甲苷浓度。血药浓度-时间曲线按二室模型拟合最佳,t1/2(α)分别为12.36,7.05,15.98 min,t1/2(β)分别为69.14,73.28,95.24 min,AUC分别为277.36,415.36,623.15μg.min/mL,AUC与剂量的线性方程为y=113.64x 173.47(r=0.997),表明黄芪甲苷在大鼠体内呈线性消除。组织分布研究表明黄芪甲苷在体内分布较广。     

中国裸燕麦β-葡聚糖含量的鉴定研究

对来源于中国13个省（区）1010份和国外引进的4份裸燕麦品种（系）进行了β-葡聚糖含量的鉴定研究。结果表明,中国裸燕麦β-葡聚糖含量为2．0％～7．5％,其中含量〈3．00％的占6．61％,3．00％～4．99％的占86．4％。5．00％～5．99％的占5．72％,≥6．00％的占1．18％。按品种类型划分,地方品种的含量低于育成品种（系）。按来源地划分,河北、山西、内蒙古的含量较高,云南、贵州、四川的含量较低,而陕西的含量最低。同年不同地点或相同地点不同年份种植的相同品种（系）,含量有一定的变化（0．27％～0．83％）。在鉴定中筛选出一批高β-葡聚糖品种（系）。本研究不仅为燕麦高β-葡聚糖育种提供了理论依据和物质基础,而且为降脂燕麦保健片的生产提供了优良品种。     

葡萄糖和木糖双底物生物转化生产2,3-丁二醇和氢气的代谢计量分析

以Klebsiella pneumoniae利用葡萄糖和木糖双底物生物转化生产2,3-丁二醇和氢气过程为研究对象,对其进行代谢计量分析。分析结果显示:2,3-丁二醇和氢气相对于底物葡萄糖和木糖的质量收率依赖于还原能力NADH2氧化磷酸化的分率(δ)。当δ=27时,即在总还原能力NADH2中有27mol NADH2被氧化磷酸化,剩余部分用来产生氢气,呼吸商为14时,2,3-丁二醇和氢气的最优质量收率分别为50%和0.8%;而当δ=1,即还原能力NADH2全部被氧化磷酸化、不产生氢气,呼吸商为4时,2,3-丁二醇的质量收率为37.5%;2,3-丁二醇和氢气的质量收率与底物中葡萄糖和木糖的比值无关。而氢气的摩尔收率与底物中葡萄糖和木糖的比值相关,当底物全部是葡萄糖或木糖时,其最优摩尔收率分别为71%和60%。该分析结果为葡萄糖和木糖双底物生物转化生产2,3-丁二醇过程的实验研究奠定了理论基础。     

24-表油菜素内酯对低氧胁迫下黄瓜根系抗氧化系统及无氧呼吸酶活性的影响

用营养液水培,研究了根际低氧胁迫下24-表油菜素内酯(EBR)对2个抗低氧能力不同的黄瓜品种根系中抗氧化系统及无氧呼吸酶活性的影响。结果表明,在低氧胁迫下,EBR处理显著提高了低氧胁迫下2品种黄瓜幼苗根系SOD、POD及ADH活性,降低了O2-·、H2O2和MDA含量、LDH活性及‘中农八号’根系PDC活性,而对‘绿霸春四号’根系PDC及2个品种CAT活性无明显影响,表明外源EBR处理通过促进低氧胁迫下根系中抗氧化酶和ADH活性的提高,降低LDH活性及ROS含量,增强植株抗低氧胁迫的能力。     

丝氨酸内肽酶在黄瓜叶片衰老中的作用

采用丝氨酸内肽酶抑制剂和植物生长调节剂处理离体黄瓜叶片,研究了黄瓜叶片暗诱导衰老过程中丝氨酸内肽酶的作用。结果表明,6-BA50μmol／L与丝氨酸内肽酶抑制剂AEBSF能抑制叶片内肽酶活性的升高,延缓蛋白质降解,而ABA50μmol/L则促进了内肽酶活性的升高：其作用效果与AEBSF相反。活性电泳结果显示,黄瓜叶片中检测到6条内肽酶同工酶,其中4条（CEP2、3、4、6）为丝氨酸类型内肽酶,而ABA使丝氨酸内肽酶CEP2、3、4、6的活性明显增强,提示了丝氨酸类型内肽酶在黄瓜叶片衰老过程中具有重要作用。     

一种抗菌肽和aFGF融合蛋白的构建和表达

利用PCR技术扩增出带有凝血酶Xa因子切割位点的天蚕素蜂毒素杂合肽和aFGF的融合基因,插入大肠杆菌表达载体pET-3c中,构建出表达质粒pET-aF-CM,并转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,氨苄青霉素抗性筛选重组转化子。IPTG诱导4h后,以包涵体形式表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的17%。将包涵体溶解后透析复性,并利用肝素亲和层析纯化,得到电泳纯的融合蛋白。Western blot分析表明,该蛋白能与aFGF抗体产生免疫反应。MTT法检测显示,融合蛋白具有促3T3Bal/b细胞分裂活性,其比活为1.471×106IU/mg。利用凝血酶Xa因子裂解融合蛋白,可以获得抗菌肽和含凝血酶Xa因子裂解序列的aFGF蛋白。分子筛回收含杂合抗菌肽,抑菌活性检测表明其对大肠杆菌K12D31具有明显抑菌活性。微量稀释法检测结果表明,回收的抗菌肽对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌K12D31、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌的MIC分别达6.25μg/ml、10μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml、0.625μg/ml和5μg/ml。     

我国成功研制表达凝血八因子新的重组质粒

石家庄牛满江实验室科研人员经过艰苦攻关,近日成功研究出表达凝血八因子的一种新的重组质粒,这为生产治疗血友病的药物“基因重组人的凝血八因子”奠定了基础。国家专利局已经受理了该项目的发明专利申请。     

Caspase-3反义寡核苷酸对γ-射线诱导的HL-60细胞中caspase-3表达与细胞凋亡的抑制作用

γ-射线可诱导人髓性白血病细胞株HL-60细胞凋亡,但其机制尚未完全明了。为了观察caspase-3在这种细胞凋亡模型中的作用,本研究设计合成针对caspase-3mRNA5′-非编码区和编码起始区的反义寡核苷酸(ASODNs),即ASODN-1和ASODN-2,以脂质体介导法将不同浓度ASODN-1和ASODN-2转染进入HL-60细胞,γ-射线照射。应用TUNEL法观察凋亡细胞形态学变化及检测凋亡细胞百分率,免疫细胞化学、Westernblotting和RT-PCR技术分别检测caspase-3及其mRNA在引入ASODNs前后的表达水平,并以错配寡核苷酸(MODN)转染及未转染细胞作为对照组。TUNEL法检测发现,当ASODN-1和ASODN-2转染终浓度≥3μmol/L时,γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡率降低,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01)。免疫细胞化学结果显示,与两对照组相比,转染ASODNs后各组caspase-3阳性细胞率显著下降,阳性细胞染色减弱,其平均灰度值显著增高(P<0.01)。Westernblotting检测显示,转染ASODNs组细胞caspase-3蛋白酶原表达降低,其中ASODN-1组显著低于ASODN-2组。RT-PCR结果显示两对照组细胞caspase-3mRNA均有明显表达,转染ASODNs后caspase-3mRNA表达丰度降低。另外,ASODN-1抑制细胞凋亡和caspase-3表达的作用显著强于ASODN-2(分别为P<0.05和P<0.01)。实验结果表明,caspase-3mRNAASODNs能够抑制γ-射线照射诱导的HL-60细胞凋亡,下调caspase-3蛋白和caspase-3mRNA的表达水平,其抑制作用在一定范围内呈剂量依赖性。     

血小板反应素1在STZ诱导大鼠糖尿病性视网膜病变的表达研究

探讨TSP1表达在糖尿病视网膜病变中的作用和机制,为治疗和预防糖尿病视网膜病变提供新的实验和理论依据。用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病模型8周后,采用免疫组织化学、RT-PCR及实时荧光定量PCR法,分析TSP1在早期链尿佐菌素诱导的糖尿病SD大鼠视网膜中的表达。结果显示在早期糖尿病大鼠的视网膜表面血管、神经节细胞层、内外核层中均有明显的TSP1表达,糖尿病视网膜组TSP1 mRNA表达要高于对照组,其中实时荧光定量PCR CT值的结果显示糖尿病组TSP1 mRNA表达量较对照组要高约3．48倍,二组间差别有显著性意义(P<0．01),提示TSP1在视网膜组织中的表达与糖尿病视网膜病变的发生密不可分,TSP1表达的增加可能在糖尿病视网膜病变的发生和发展中起重要作用。