蜂胶黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后IL-1β、IL-6和TNF-α含量的影响

目的探讨蜂胶黄酮对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO）,研究蜂胶黄酮对脑缺血再灌注脑梗死体积和行为学评分的影响,对脑组织内IL-1β、IL-6和TNF-α含量的影响。结果蜂胶黄酮能够减少MCAO脑梗死体积和行为学评分,降低脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量（P〈0．05）。结论蜂胶黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,其作用机制与降低脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α含量有关。     

人胰高糖素样肽-1及其突变体在大肠杆菌BL21中的表达与生物活性研究

以人胰高糖素样肽-1（human glucagons-like peptide-1,GLP-1））为研究对象,以克隆载体pPblu2SKP/（GLP-1A2G）2基因为模板,利用PCR扩增获得GLP-1与其突变体GLP-1A2G的编码基因,并将其插入原核表达质粒pGEX-4T-1中,利用氯化钙法将其转入表达宿主大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中诱导表达,经IPTG诱导后,收集菌体。菌体经超声破碎后,裂解液用GST亲和层析纯化得到融合蛋白,经凝血酶酶解,用Superdex G-75凝胶层析,得到GLP-1及其突变体GLP-1A2G的样品,经SDS-PAGE电泳测定,样品纯度〉90%。小鼠糖耐量试验表明,相对于空白对照组而言,GLP-1及其突变体GLP-1A2G可以明显地控制血糖的水平,两者的生物活性并无明显差异。由于突变体GLP-1A2G较GLP-1可以更加有效的抵制DPPⅣ的降解,提示突变体GLP-1A2G较GLP-1在白蛋白融合或PEG修饰等方面具有更大的优势。     

假单胞菌DLL-E4尿黑酸降解基因的克隆与功能的初步分析

通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变子中筛选到1株在LB培养基上积累红褐色物质的突变株M18,该突变株不能以L-苯丙氨酸(L-Phenylalanine, Phe)为唯一碳源生长。SEFA-PCR扩增转座子侧翼序列发现其与已报道的尿黑酸1,2-双加氧酶基因hmgA的同源性为92%。将hmgA定向克隆至表达载体pET-29a中,转化至Escherichia coli BL21,经IPTG诱导后可表达分子量约为48kD的蛋白;诱导后转化子粗酶液对尿黑酸有很好的降解效果。将hmgA连入自杀性载体pEX19Gm,通过同源重组整合至M18染色体中,使其恢复了DLL-E4利用Phe的能力,证实了HmgA是尿黑酸苯环裂解酶。     

肾叶天胡荽精油的超临界CO2萃取、成分分析及杀虫活性初探

采用正交实验设计,对肾叶天胡荽（Hydrocotyle wigordi Maxim．）精油超临界CO2萃取条件进行了优化,并用GC—MS分析技术对精油的化学成分进行了鉴定,初步探讨了肾叶天胡荽精油对小菜蛾2龄幼虫的触杀活性。结果表明,肾叶天胡荽精油超临界CO2萃取的最佳条件为萃取压力35MPa、萃取温度50℃、解析压力5MPa、解析温度40℃、萃取时间75min、CO2流量34—36L·h^-1,精油得率最高可达5．32％。从精油中共鉴定出19种成分,总相对含量达到89．266％,主要成分为邻苯二甲酸二辛酯（64．302％）。用超临界CO2萃取技术提取的肾叶天胡荽精油对小菜蛾2龄幼虫有一定的触杀作用,20g·L^-1精油对小菜蛾2龄幼虫的24h校正死亡率高达90．00％。     

ET-1神经分布异常与高血压鼠脑动脉神经源性调节的关系

目的探讨ET-1（Endothelin-1,ET-1）能神经纤维分布与高血压鼠脑血管的神经源性调节的关系,探讨ET-1神经是否参与高血压时期脑血流的调节。方法应用免疫组织化学技术观察自发性高血压鼠和Wistar正常血压鼠脑底动脉（包括大脑前动脉、大脑中动脉、大脑后动脉和基底动脉）ET-1能神经纤维的分布密度和走行方式。结果自发性高血压鼠和Wistar正常血压鼠脑底动脉均可见棕褐色的ET-1能免疫反应阳性纤维,似细线状,攀附于血管壁上,自发性高血压鼠脑底动脉各主要分支ET-1能免疫反应阳性纤维密度较Wistar正常血压鼠明显增加,纤维走行大多呈网状。结论实验结果提示自发性高血压鼠脑底动脉增加的ET-1能免疫反应阳性纤维可能与脑血管的神经源性调节有关;高密度的ET-1能神经纤维可能涉及高血压时期脑血流的调节。     

5′-磷酸腺苷对小鼠脾细胞氧化应激损伤的保护作用

目的研究5′-磷酸腺苷（5′-AMP）体外抗氧化和对体外氧化损伤脾细胞的损伤修复能力。方法用化学比色法测定5′-AMP体外清除二苯代苦味酰基自由基（DPPH自由基）的能力;建立过氧化氢（H2O2）氧化损伤体外培养小鼠脾细胞模型,用MTT法检测5′-AMP修复受损伤脾细胞的作用,并分析其对细胞抗氧化体系及抗氧化能力的影响。结果5′-AMP具有剂量依赖性的体外抗氧化和清除活性氧能力,添加0.5mmol/L、1mmol/L、5mmol/L和10mmol/L5′-AMP均能显著修复H2O2诱导的脾细胞氧化损伤（P〈0.05）,总抗氧化能力和抗氧化酶类活力（P〈0.01）,5′-AMP添加量大于1mmol/L时,可显著降低丙二醛（MDA）含量（P〈0.01）。其细胞培养液的氧自由基（ROS）水平逐渐降低,5′-AMP添加量为10mmol/L时,ROS水平接近对照组水平。结论5′-磷酸腺苷能显著修复氧化损伤,具有显著的抗氧化作用。     

金葡菌α-毒素对Balb/c小鼠成纤维细胞水通道蛋白1(AQP1)表达的影响

目的观察金黄色葡萄球菌α-毒素（α-Toxin）对Balb／c 3T3小鼠成纤维细胞水通道蛋白1（AQP1）表达的影响。方法体外培养Balb／c 3T3成纤维细胞,将其分为对照组（Oh）和实验组（4h、6h及4h’）,实验组给予α-Toxin（浓度30μg／m1）,作用4h、6h及4h洗脱毒素后继续孵育到6h（即4h＇）,对照组给生理盐水,应用光学显微镜观察细胞形态的变化,免疫组化及Western-blot方法检测0h、4h、6h及4h’AQP1的表达情况。结果金葡菌钎Toxin作用于小鼠Balb／c 3T3成纤维细胞先出现细胞体积变大,胞核内颗粒增多,然后细胞破裂,坏死增加;免疫组化和Western blot显示：AQP1表达随着时间的增加而增加,4h＇及6h组增加更为明显。结论金葡菌α-Toxin作用于Balb／c小鼠成纤维细胞后,AQP1表达大量增加,去除毒素后,AQP1增加幅度显著下降,提示α-Toxin诱导的AQP1高表达具有一定的可逆性。     

脂连素对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的观察脂连素对刀豆蛋白A（ConA）所致小鼠急性肝损伤的干预作用,并对其机制进行初步探讨。方法雄性BALB／C小鼠17只,随机分为3组：ConA组6只：尾静脉注射ConA。脂连素组5只：在静脉注射ConA前腹腔内注射脂连素。对照组6只：尾静脉注射生理盐水。注射ConA后8小时留取血清检测各组ALT和TNF-α水平,肝组织进行HE染色,并检测NF-κB活性及肝细胞凋亡率。结果HE染色可见ConA组肝细胞水肿、变性,肝组织内淋巴细胞浸润、淤血等,脂连素组上述病理变化减轻（P〈0．01）。脂连素组ALT和TNF-α水平、NF-κB活性、肝细胞凋亡率均低于ConA组（P〈0．01或P〈0．05）。结论脂连素具有抗炎作用,其机制可能与减少TNF-α的产生、抑制肝组织NF-κB活性及抗肝细胞凋亡有关。     

中国穿山甲消化道5-羟色胺免疫活性细胞的定位

目的研究中国穿山甲消化道5-羟色胺（5-HT）免疫活性细胞的分布和形态。方法应用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶免疫组织化学方法（S-P法）。结果中国穿山甲消化道5-HT细胞在胃幽门部密度最高,食道、胃贲门部和胃体中未见分布。肠道5-HT细胞密度从十二指肠、空肠到回肠依次减少,至大肠又显著升高（P〈0．01）。5-HT细胞形态多样,主要有圆形、椭圆形和锥形,肠上皮中锥形5-HT细胞通过顶部较长的胞突通向肠腔,基部较宽的胞体与固有层相接触。结论中国穿山甲消化道5-HT细胞的分布和形态同其它动物有相似之处,也有其自身特点。中国穿山甲消化道中5-HT细胞的分布与其食性是相适应的。     

强直性脊柱炎滑膜组织破骨细胞表型、TNF-α及MMP-3的表达及对软骨破坏作用的研究

目的检测破骨细胞表型、基质金属蛋白酶-3及肿瘤坏死因子-α在强直性脊柱炎患者滑膜组织的表达,滑膜单核巨噬细胞与软骨共培养,了解其在强直性脊柱炎软骨破坏中的作用,探讨强直性脊柱炎软骨破坏机制。方法采用酶组织化学技术检测滑膜组织内破骨细胞表型表达,原位杂交技术检测强直性脊柱炎患者滑膜组织内肿瘤坏死因子-α、基质金属蛋白酶-3的表达,Leica Qwin高清晰图像分析系统测定阳性细胞数,强直性脊柱炎滑膜单核巨噬细胞培养并与正常软骨共培养,HE染色及扫描电镜观察软骨的破坏程度。结果破骨表型细胞在滑膜组织内阳性表达,阳性细胞计数与对照组有显著差异（P〈0．01）;肿瘤坏死因子-α、基质金属蛋白酶-3在强直性脊柱炎患者滑膜细胞内有棕黄色颗粒沉着,阳性细胞计数与对照组有显著差异（P〈0．01）;滑膜细胞与正常软骨共培养,HE染色见软骨表面粗糙,有小凹陷,扫描电镜可见软骨表面不定形物质成斑片状,胶原纤维暴露,有断裂,抗肿瘤坏死因子-α可以减轻软骨的破坏程度。结论破骨表型细胞、肿瘤坏死因子-α及基质金属蛋白酶-3是软骨破坏的重要因素,破骨表型细胞通过表达基质金属蛋白酶-3分解软骨基质,进而发挥软骨的破坏作用,抗肿瘤坏死因子-α可以抑制破骨表型细胞对软骨的破坏。