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142.
骨质疏松以及动脉钙化均是危害极大的临床常见病变,骨保护素 (OPG) 可能是联系两者的分子之一. 构建替换型载体pXpPNT-OPG,利用同源重组,将编码前3个蛋白质结构域的小鼠Opg基因组第二外显子序列剔除掉. 通过胚胎干细胞 (ES) 基因打靶获得了正确重组的ES细胞克隆,ES细胞显微注射后获得嵌合体小鼠,交配传代获得杂合子和纯合子小鼠. RT-PCR和蛋白质印迹实验结果显示,纯合子小鼠没有Opg基因的表达. 纯合子小鼠骨量丢失明显,骨生物力学指标明显下降,发生严重的骨质疏松,此外,还有50%以上的纯合子小鼠在早期出现动脉中层钙化. 小鼠破骨功能亢进,与此同时,成熟成骨细胞数量增加,矿化功能强于野生型. Opg基因缺失小鼠骨中钙和磷大量流失,而血清中水平没有变化,这提示钙磷代谢异常不是OPG缺失导致动脉钙化的原因. 对建立的Opg基因敲除小鼠模型进一步深入的研究,将有助于说明动脉钙化和骨质疏松症相互联系的分子机制,为防治骨质疏松症和动脉钙化的并发提供理论基础支持. 相似文献
143.
144.
以复制子为p15A的质粒pACU184为基础 ,构建了 3种表达硫氧还蛋白 (TrxA)或 和二硫键异构酶 (DsbC)的表达质粒 .经IPTG诱导 ,克隆的DsbC和TrxA都以可溶的形式高表达 .分别将构建的 3种表达质粒与复制子为colE1并克隆有人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体 低分子量尿激酶融合基因 (C6 UK)的表达质粒共转化大肠杆菌XL1 blue ,在 30℃用IPTG诱导表达 .SDS PAGE显示 ,共表达TrxA或DsbC都能导致C6 UK融合蛋白的部分可溶性表达 ,而且同时共表达TrxA和DsbC 2种分子时 ,C6 UK完全以可溶形式表达 ,但表达量降低 .分别用溶圈法和ELISA检测了各种共表达时可溶表达产物的生物活性 .结果显示 ,只有共表达DsbC时才能检测到明显的C6 UK融合蛋白的双功能 相似文献
145.
建立了重组hepcidin的分离纯化方法,并鉴定其抗菌活性。经金属螯合初步纯化的重组蛋白在cysteine/cystine氧化还原体系中氧化形成二硫键,用变性条件下的凝胶过滤除去多聚体,稀释复性后用于肠激酶酶切反应,得到重组hepcidin。融合蛋白His-hepcidin经氧化、复性后的总收率为50%,纯度大于95%。酶切后所得重组hepcidin经抑菌圈试验检验,对枯草芽孢杆菌具有抗菌活性。LC-ESI-MS与园二色光谱检测显示重组hepcidin与天然hepcidin相对分子质量相同、二级结构相似。 相似文献
146.
【背景】华根霉脂肪酶的工业应用前景广泛,但是受到酶热稳定性较差的限制。【目的】对华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶r27RCL分子结构进行理性设计,以提高该酶热稳定性。【方法】以Disulfide by design软件筛选r27RCL分子表面能够形成二硫键的突变位点,共得到7对二硫键突变。利用全质粒PCR进行定点突变,并在毕赤酵母中表达获得突变酶。【结果】最佳突变酶m9/10 (S85C-Q145C)与野生型酶r27RCL相比,60°C下的半衰期分别提高了4.5倍,T_m值提高了4.2°C,而催化活性保持不变。蛋白质晶体结构模拟显示,位于β2折叠上的85C和位于α4螺旋上的145C可形成二硫键,从而提高酶的热稳定性。【结论】酶分子中引入新增二硫键可以显著提升酶的热稳定性。 相似文献
147.
植物叶片中过氧化氢含量测定方法的改进 总被引:28,自引:0,他引:28
Ti(Ⅳ)-H2O2比色法因背景物质干扰而测得的植物叶片内H2O2含量偏高,5%三氯乙酸抽提,活性炭脱色,Ti(Ⅳ)-4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚(PAR)比色法测得的H2O2含量偏低.萃取法有效地脱去丙酮提液中的色素,且H2O2的回收率在95%以上.用过氧化氢酶(CAT)处理作空白对照,利用H2O2与Ti(Ⅳ)-PAR的显色反应,建立了一种简便、快速、准确的植物叶片内的H2O2含量测定方法,H2O2的最低检测浓度为0.25 μmol·L-1.用该方法测得多种植物叶片中H2O2的含量在0.1~0.8 μmol·g-1. 相似文献
148.
O-超家族芋螺毒素研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
O-超家族芋螺毒素是芋螺毒素中较复杂的超家族之一,它包括δ、μO-、ω-、κ-等若干成员,通常由24-33个氨基酸组成,具有相同的三对二硫键骨架,形成ICK模体,能特异性作用于电压门控离子通道。本文主要对该芋螺毒素生物化学及分子遗传学特征、生理学和药理学特征、结构与性能的关系及应用研究与前景等进行综述。 相似文献
149.
对胰蛋白酶所特有的二硫键[129,232]进行了定位改造,将Cys突变为Ser,以观察其对胰蛋白酶稳定性及活性的影响。采用蛋白质工程的方法,构建了三个突变体C129S、C232S和C129S/C232S.在E.coliX-90菌体中进行表达,表达产物用含胰蛋白酶特异性底物TAME的活性胶检测活性,发现C232S丧失胰蛋白酶活性,而C129S和C129S/C232S保留了胰蛋白酶活性。在盐酸胍作用下比较双突变体和野生型胰蛋白酶活性,发现突变体C129S/C232S的稳定性有所降低。结果表明二硫键Cys129-Cys232对于胰蛋白酶的活性是非必需的,可能在稳定蛋白质的结构上发挥着重要作用。 相似文献
150.
人蛋白二硫键异构酶的纯化及其抗血清制备吴秉毅,冯桂湘,吕静,张帆,冯永清,王福琴(第一军医大学珠江医院广州510280)关键词蛋白二硫键异构酶,分离与纯化,抗血清制备二硫键在维持蛋白质的空间结构、生物学活性中起重要作用。二硫键的形成是蛋白质翻译后修饰... 相似文献