乳酸脱氢酶与酯酶同工酶同板染色法

介绍一种在同一块凝胶板上染乳酸脱氢酶(LDH)与酯酶(EST)的染色方法. 该同板染色法利用两种同工酶显色反应互不干扰和颜色不同的特点, 先染LDH, 后染EST, 可以在同一块胶板上得到两种同工酶清晰的酶带, 每一种酶的酶带与单板染色的酶带完全一样. 这种染色法, 能节省同工酶分析所需的试剂、时间和经费, 也便于样品的鉴定与比较, 是一种经济有效的方法. 此方法, 同样适用于苹果酸脱氢酶(MDH)与酯酶等同工酶的同板染色.     

卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白（ZnT-7-like）的基因克隆、 抗体制备及差异表达

【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白 7相似蛋白（zinc transporter 7-like, ZnT-7-like）基因, 制备ZnT-7-like多克隆抗体, 了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因, 进行生物信息学分析, 为避开跨膜结构的干扰, 选择克隆其部分序列（273 bp）作为多肽免疫序列。将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1, 转入大肠杆菌Escherichia coli BL21 （DE3）中诱导表达获得融合蛋白, 然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体, 分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性, 最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western blot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量。【结果】克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因, 大小为1 065 bp。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达; 制备的多克隆抗体效价高达1∶64 000, 且具有很高的特异性。ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异, 表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄（P<0.01）, 12日龄表达量最低, 其他日龄间表达量两两差异显著(P<0.05)或极显著（P<0.01）; ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致。【结论】成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因, 制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体, 并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量。这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础。     

超富集植物蜈蚣草中砷化学形态的EXAFS研究

采用同步辐射扩展X射线吸收精细结构(SREXAFS)技术研究了超富集植物蜈蚣草(PterisvittataL.)中As的化学形态及其在转运过程中的变化。结果表明,蜈蚣草中的As主要以As(Ⅲ)与O配位的形态存在。As(V)被植物吸收后,很快转化为As(Ⅲ),其转化过程主要发生在根部。As(Ⅲ)向地上部转运的过程中价态基本不变。在植物的根部和部分叶柄中存在少量与As-GSH相似的As-S结合方式,但是在As含量最高的羽叶中基本上未发现这种结合方式。与需要提取和分离过程的化学方法相比,采用EXAFS方法研究植物中的砷形态不需经过预分离或化学预处理就可以直接测定植物样品中元素的化学形态,因此可以避免样品预处理过程对As形态的干扰,并获得可靠的砷化学形态方面的信息。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型免疫逃避机制——ICP47抑制抗原加工相关转运蛋白

病毒侵入宿主后的感染过程除导致相应的病理学结果外,还能引发机体非特异性、特异性抗病毒免疫反应清除病原体。在特异性免疫反应中,机体能否对“异已”抗原进行有效识别,在很大程度上是通过抗原呈递细胞实现的。抗原呈递细胞APC(包括树突状细胞DC、巨噬细胞、B细胞等)能捕捉、     

基于转录组测序数据对Weissella confusa XU1中低聚木糖代谢系统的分析（英文）

【目的】近年来由于在发酵方面的良好特性,低聚木糖的益生作用越来越得到公众的关注。研究发现相比于葡萄糖和木糖WeissellaconfusaXU1在以低聚木糖为唯一碳源时生长情况最好。本文将对WeissellaconfusaXU1中低聚木糖的代谢机制进行研究。【方法】本研究分别以葡萄糖、木糖和低聚木糖作为唯一碳源对Weissella confusa XU1进行转录组测序并进行比较分析。【结果】通过转录组分析发现以低聚木糖为唯一碳源的处理中部分编码MFS转运蛋白和糖基水解酶的基因转录水平显著上升,WeissellaconfusaXU1中的糖酵解过程和磷酸戊糖途径也得到显著增强。【结论】本研究根据转录组数据分析得出Weissella confusa XU1中的低聚木糖代谢机制。本研究首次在革兰氏阳性菌中发现MFS转运蛋白参与到低聚木糖转运的过程,为提高微生物对木聚糖利用效率进行分子改造提供了改造方向,该机制为低聚木糖代谢的研究和Weissella的工业化应用提供了新的思路。     

动物细胞无血清培养基及其应用

动物细胞无血清培养基及其应用陈昭烈,肖成祖（军事医学科学院生物工程研究所北京１０００７１）动物细胞无血清培养是当今生物科学领域中的重要研究课题之一。由于无血清培基可以是完全采用已知分子结构和构型组分的低蛋白或无蛋白培基。因而它不仅为研究和阐明细胞生长、增殖和分化的调节机制提供了有力的工具,而且为现代生物技术,尤其是细胞工程的应用准备了更好的条件。     

切断两侧内脏神经对绵羊低血糖期间血浆儿茶酚胺激素、葡萄糖和乳酸浓度的影响

在9只装置永久性血管瘘的绵羊(其中5只切断两侧内脏神经,4只对照)共进行了13次实验。静脉注射胰岛素(1—2U/kg)引起低血糖,分析低血糖期间血浆儿茶酚胺激素(Catecho-Iamines,CAs)、葡萄糖和乳酸浓度的变化,同时观察动物的行为反应。 结果表明:绵羊外周血浆中CAs的浓度(ng/ml)是:去甲肾上腺素(Noradrcnaline,NA)0.330±0.069,肾上腺素(Adrenaline,AD)0.452±0.051,多巴胺(Dopamine,DA)0.694±0.114,三者含量比例约为2:3:5;切断两侧内脏神经后 NA、AD、DA和三者的比例分别是0.377±0.202、0.209±0.063、0.106±0.044 和5:3:2;表现AD和DA浓度明显降低,三者含量比例发生了显著变化。 静脉注射胰岛素使绵羊血糖浓度急剧降低。切断两侧内脏神经不仅降低绵羊血糖浓度的基本水平,而且降低绵羊对低血糖的抵抗力,使低血糖痉挛的发生率增加。 在低血糖期间绵羊CAs的释放量增加,切断两侧内脏神经使这种释放反应的敏感性降低,激素释放量减少。     

肝细胞靶向pH敏脂质体的制备及性质分析

为了制备具有肝细胞特异靶向性和pH敏感性的脂质体,设计并合成了四种带有半乳糖残基的导向分子,与具有pH敏感性的DC-chol/DOPE混合制备脂质体,通过质粒转染实验、受体竞争抑制实验和红细胞溶血等实验选出最佳转染活性的十八醇-半乳糖甙(18-gal)脂质体,并证明其具有肝细胞特异受体介导的靶向性和pH敏感性,且细胞毒性较小,可以作为一种潜在的肝细胞靶向转运系统得到进一步发展.     

单羧酸转运体在肿瘤中的功能

单羧酸转运体 (Monocarboxylte Transporters,MCTs)属于溶质运载蛋白家族（Solute carrier family,SLC）SLC16A亚家族成员.目前已发现该家族有14个成员;研究表明,MCTs具有偶联转运细胞新陈代谢中产生的单羧酸与质子的功能. MCTs在肿瘤组织中表达普遍增高,肿瘤细胞是以糖酵解代谢方式获取能量,该过程中产生的大量乳酸被MCTs运出胞外,以保护细胞免因酸中毒诱发细胞凋亡;细胞外乳酸也能被肿瘤细胞摄取和利用.由于肿瘤组织的血管不发达,使肿瘤细胞内外的乳酸堆积,导致肿瘤细胞存活在缺氧和酸性微环境中,MCTs对此种环境中肿瘤细胞的存活与转移发挥重要作用.因此,研究肿瘤细胞和正常组织中MCTs的差异性表达及其机制,以及MCTs活性的调控机制,对于认识肿瘤细胞在缺氧和酸性微环境中存活与转移规律具有重要意义,并为肿瘤的治疗提供新的分子靶标.本文将对肿瘤中MCTs的功能研究的最新进展进行综述. 同时,结合我们的研究,提出了一些见解.     

掺入大肠杆菌膜中的磷脂酰胆碱(PC)影响青霉素b-内酰胺酶的分泌

[目的]为了研究磷脂酰胆碱(PC)在原核生物细胞中的生物学作用,探讨PC对细菌膜系统的功能的影响.[方法]使用ptac 85质粒作载体,将螺旋菌pcs基因导入E.coli Top10细胞构建了E.coli Fop10 pcs 菌株,并在特定的条件下培养细菌,使细菌膜磷脂中合成30%左右的磷脂酰胆碱.然后再使用抗生素抗性分析、β-内酰胺酶的酶活测定以及Western blot杂交技术,分析质粒编码的β-内酰胺酶从细胞质到细胞问质的分泌情况.[结果]抗生素抗性分析发现,高浓度的氨苄青霉素抑制E.coliTop10 pcs 细菌的生长的氨苄青霉素剂量低于对照组,其半致死剂量IC50在700～800μg/mL之间.酶活检测显示E.coli Top10 pcs 细菌周质内β-内酰胺酶的酶活性只有对照菌株的1,5,Western blot进一步分析发现周质内β-内酰胺酶的含量也为对照菌株的1/5.由此可见,周质内低含量的β-内酰胺酶是导致E.coli Top10pcs 细菌氨苄青霉素抗性降低的原因.[结论]掺入细菌膜磷脂双分子层的PC影响p.内酰胺酶通过Sec转运途径从细胞质分泌到细菌周质空间内,提示细菌磷脂酰胆碱可能在调节蛋白转运和分泌方面起着重要的作用.