龙虾肌甘油醛-3-磷酸脱氢酶及其衍生物与NAD~+的结合

平衡柱层析法测得每分子龙虾肌羧甲基化甘油醛-3磷酸脱氢酶能结合3.9分子NAD~+,而每分子光照酶则只能结合2分子NAD~+。 由蛋白荧光淬灭法得到,在25℃、pH7.0的磷酸盐缓冲液中,全酶、羧甲基酶及光照酶与NAD~+结合时均呈负协同性。     

微生物木糖发酵产乙醇的代谢工程

利用木质纤维素发酵生产乙醇具有广泛的应用前景。而自然界中缺少有效转化木糖为乙醇的微生物是充分利用纤维素水解产物、提高乙醇产率、降低生产成本的关键因素。多年来研究者利用分子生物学技术对微生物菌株进行了代谢工程改造,使其能更有效地利用木糖生产乙醇。以下主要对运动发酵单胞菌、大肠杆菌和酵母等候选产乙醇微生物的木糖代谢工程研究进展进行了概述。     

球毛壳菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因克隆及特性分析

用粗糙脉孢菌(Neurospora crassa,XP_327967)和菜豆炭疽病菌(Colletotrichum lindemuthianu,P35143)的甘油醛_3_磷酸脱氢酶基因(Glyceraldehyde 3_phosphatedehydrogenase,GAPDH)氨基酸序列对球毛壳菌(Chaetomium globosum)菌丝ESTs序列本地数据库进行tBlastn检索,获得了球毛壳菌GAPDH全长cDNA序列。该序列长1240bp,开放阅读框1014bp,编码337个氨基酸组成的多肽,蛋白分子量为36.1kD。用PCR方法克隆了该基因的DNA序列,序列长为1556bp,由2个内含子和3个外显子组成。BlastP同源性分析表明该基因与鹅掌柄孢壳(Podosporaanserine)同源性最高为95%;与米曲霉(Aspergillusoryzae)同源性最低为87%。GAPDH酵母转化子生物功能分析表明转化子对Na2CO3和高温有高的耐受性,证明GAPDH为抗胁迫基因。该基因的cDNA序列、DNA序列及推测的氨基酸序列在GenBank登录(登录号分别为AY522719,AY593253,AAS01412)。     

海边月见草叶提取物乙醇洗脱级分的抗氧化作用

海边月见草(Oenothera drummondii Hook.)叶提取物经X-5大孔树脂吸附及体积分数10%、30%、50%和70%乙醇溶液梯度洗脱获得4个级分,研究了这4个级分对DPPH、·OH和O2-的清除作用及其在卵黄脂蛋白过氧化体系中的抗氧化作用。4个洗脱级分均表现出较强的清除DPPH和·OH的能力,清除率随各级分浓度的升高而提高,其中,30%乙醇洗脱级分的清除作用最强,对DPPH和·OH的50%抑制浓度(IC50)分别为0.069和0.741g·L-1。浓度达1.0g·L-1,4个洗脱级分对O2.均有一定的清除能力,且对卵黄脂蛋白过氧化作用的抑制率均在50%以上。结果表明,海边月见草叶提取物的不同浓度乙醇洗脱级分具有较强的清除自由基的能力,并有一定的抗卵黄脂蛋白过氧化的作用,但总体效果较槲皮素略差。     

利用抑制消减杂交分离受褐飞虱取食下调的水稻基因

为了分离受褐飞虱取食抑制的水稻基因,采用抑制消减杂交的方法,以正常生长的水稻幼苗为目标群体,以褐飞虱胁迫32 h的水稻幼苗作为对照群体,构建了含200个重组质粒的SSH cDNA文库.随机挑选50个重组质粒进行反向Northern差异筛选后,再经Northern杂交验证,得到2个受褐飞虱取食抑制的基因:一个是Lhca,编码水稻光系统Ⅰ天线蛋白;另一个基因(bpHd002)与肌苷-5'-单磷酸脱氢酶基因有同源性.以BpHd002为探针筛选水稻幼苗cDNA文库分离出该基因的全长cDNA(BpHd002A).其长度为1 285bp,含有一由519 bp组成的完整的阅读框,编码的蛋白质具有两个CBS结构域.     

外源性肺表面活性物质替代治疗对烟雾吸入所致肺组织细胞损害的影响

目的：探讨使用外源性肺表面活性物质（ＰＳ）治疗能否减轻烟雾吸入所致肺组织细胞损害。方法：Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为５组：Ⅰ组,正常对照;Ⅱ组,烟雾吸入;Ⅲ组,烟雾＋ＰＳ＋机械通气（ＭＶ）;Ⅳ组,烟雾＋盐水＋ＭＶ;Ⅴ组,烟雾＋ＭＶ,伤后５ｍｉｎ经气管导管注入ＰＳ（１００ｍｇ／ｋｇ）或等量盐水,ＭＶ４ｈ,观察２４ｈ,检测动脉血气、肺水量、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中白细胞分类计数及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）和碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活性、胎盘型碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）含量、肺泡壁纤维成分含量及病理检查等。结果：Ⅱ组伤后发生呼吸衰竭、肺水肿及肺部急性炎症反应,ＢＡＬＦ中ＬＤＨ、ＡＫＰ、ＡＣＥ和ＰＬＡＰ水平均明显升高,肺泡壁纤维成分含量显著减少。Ⅲ组血气较Ⅱ组明显改善,但ＢＡＬＦ中各酶水平、肺泡壁纤维成分含量及肺部炎症、水肿等无显著减轻。Ⅳ、Ⅴ组治疗无效。结论：烟雾吸入伤早期外源性ＰＳ治疗能一定程度改善呼吸功能,但对肺组织细胞损害无明显保护作用,不能减轻继发性炎症反应和急性肺水肿     

生物能源国际相关专利分析

生物能源包括生物乙醇（玉米乙醇和纤维素乙醇）、生物柴油、生物制氢、生物发电、沼气等。随着石油资源的日益枯竭和环境污染的日益严重,作为一种清洁可再生的新能源,生物能源的研究和开发引起了全球各界的广泛重视。因此,各国政府颁布相关政策、加大投资力度,以积极支持生物能源的发展。     

346例海南黎族新生儿G6PD基因突变分析

为了解海南黎族新生儿G6PD基因突变的流行情况以及为本地区该民族G6PD缺乏症的防治提供参考,本研究对滤纸干血斑进行了G6PD基因突变检测,即用多色探针荧光PCR熔解曲线法对中国人群常见的16种基因突变进行检测。结果表明:在海南黎族667例新生儿样本中检出G6PD基因突变样本346例,总突变率51.9%(346/667),以保亭县黎族的突变率(61.5%)最高,其次是白沙县57.0%、琼中县54.5%。本研究共检出11种G6PD基因突变和3种复合突变,以c.1376 GT、c.1388 GA和c.95 AG这3种基因突变型为主,分别占61.85%、23.41%和4.34%,同时发现1例c.86 CT突变。这说明海南黎族存在G6PD缺乏症的高发人群。海南黎族人群中最常见的G6PD基因突变型是G6PD基因c.1376 GT、c.1388 GA和c.95 AG突变。G6PD基因突变的研究有利于G6PD缺乏症高发地区对新生儿溶血、黄疸、蚕豆病的确诊与防治,并能为此类病情的治疗提供参考数据。     

重铬酸钾-DNS比色法测定发酵液中乙醇含量

发酵液中往往含有一些还原性物质,如葡萄糖等,用经典的重铬酸钾氧化比色法来测定发酵液中乙醇含量时,往往出现结果偏大的现象.为了测定发酵液中乙醇含量,在经典重铬酸钾氧化比色法基础上,使用DNS氧化比色法测定葡萄糖含量,修正乙醇含量的测定结果.统计分析发现,经改良的重铬酸钾-DNS比色法测定含葡萄糖的乙醇标准溶液时相对误差均值为0.95%,远小于传统的重铬酸钾氧化比色法的相对误差均值18.07%,在精密度相似情况下提高了准确度,更适宜用于测定含葡萄糖等还原性成分的发酵液中乙醇含量.     

典型产纤维小体梭菌的遗传改造及其在纤维素乙醇中的应用研究进展简

以解纤维梭菌（ Clostridium cellulolyticum）和热纤梭菌（ Clostridium thermocellum）为代表的产纤维小体梭菌可以直接完成从木质纤维素原料到乙醇的生物转化,是用于通过整合生物加工技术生产纤维素乙醇的优良候选菌株。然而,这些产纤维小体梭菌的纤维素降解效率及乙醇产量尚不能满足工业化生产的要求,其遗传改造技术的不成熟严重制约了通过定向代谢工程改造提高生产性能的进程。针对这些典型的产纤维小体菌株,各国科学家近年来在基于二类内含子的嗜中温及嗜高温遗传改造平台建立方面取得了较大突破,并通过靶向代谢工程改造,显著提高纤维素乙醇的产量。笔者对这些前期研究工作以及国内外相关研究成果进行系统的总结,并对构建的遗传改造工具的应用前景进行展望。