植物中草酸积累与光呼吸惭醇酸代谢的关系

对几种Ｃ３和Ｃ４植物中草酸含量及相应的乙醇酸氧化酶活性测定结果表明,叶片光呼吸强度及其着急酶活性大小与草酸积累量没有相关性;植物根中均能积累草酸,但未测出乙醇酸氧化酶活性。烟草根、叶中的草酸含量在不同生长时期差异明显,且二者呈显著正相关（ｙ＝２．５６５ｌｎｘ＋２．１３７,ｒ＝０．７４９,Ｐ〈０．００１）,说明振中到可能来自叶片。氧化乙醇酸的瓣活性与氧化乙醛酸的酶的活性呈极显著线性正相关（ｙ＝０．２     

克雷伯杆菌甘油脱氢酶基因的克隆表达与纯化

以克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)基因组DNA为模板, 运用PCR扩增得到编码甘油脱氢酶(GDH)的基因(gldA), 并克隆到pMD-18T载体上, 构建克隆载体pMD-gldA。经测序正确后, 将gldA亚克隆至表达载体pET-32a(+)上构建表达质粒pET-32gldA。在乳糖诱导下, 携带pET-32gldA的E. coli BL21 (DE3)高效表达分子量约为54 kD的可溶性蛋白。表达产物带有His6-tag标记, 选用Ni柱对表达产物进行纯化, 纯化后酶液的比活为188 u/mg, 纯化倍数和回收率分别为3倍和67.5%。     

CN101298620 天然纤维素原料经离子液体分级处理一步发酵制备乙醇的方法

本发明涉及利用天然纤维素原料经离子液体分级处理一步发酵制备乙醇的方法。其中将天然纤维素原料依次用离子液体A和B处理分别除去半纤维素、木质素后,再以得到的纤维素为底物一步发酵制备乙醇,所述的离子液体A为酸性或碱性离子液体,所述的离子液体B为卤化咪唑类离子液体。     

发展生物乙醇以替代传统能源

尽管燃料乙醇的使用有一定局限性，但国外应用的实战证明，多途径发展生物乙醇也显示其生命力。在发展生物乙醇过程中必须扬其优，克其弊，以利燃料乙醇的发展。所谓生物乙醇指的是通过微生物发酵途径，以各种不同的生物质（主要是含糖类）为原料发酵生产乙醇（酒精），尽管有其传统的生产优势，现代生物技术微生物技术的应用则有全新的内含，生产菌种的选育，经过改造或重组建构，或酶活力提高以及各生产工艺改造等等。为扩大乙醇生产，提高其效率和产率是整个乙醇生产的基础和重要环节。     

乙醇溶液对木瓜蛋白酶催化活性的影响

研究了乙醇溶液对木瓜蛋白酶水解酪蛋白的催化活性及构象的影响。结果表明,木瓜蛋白酶在一定浓度乙醇溶液中水解酪蛋白的活性有显著上升。动力学测定表明木瓜蛋白酶在乙醇溶液中米氏常数（Km）下降。差示光谱显示,在乙醇溶液中木瓜蛋白酶的二级结构发生了变化。荧光发射光谱表明,木瓜蛋白酶在乙醇溶液中发射峰位几乎没移动,但发射强度明显增高。     

花生油酸脱氢酶基因在酿酒酵母中的高效表达

将克隆的油酸脱氢酶基因(AF900663)亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES6/CT,从大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒pYES/HO-A,用醋酸锂方法转化到酿酒酵母缺陷型菌株INVScI中,经半乳糖诱导后,收集菌体,用气相色谱质谱(GC-MS)仪分析转化酵母的脂肪酸色谱的结果表明,HO-A所编码的酶具有油酸脱氢酶活性,能将酵母内源性油酸转化为亚油酸,油酸脱氢酶的表达量为15.6%,高于已有的报道。     

野菊花60%乙醇提取物的酚类成分组成及其清除自由基和防霉变能力分析

对野菊[Dendranthema indicum (L. ) Des Moul. ]花的60%乙醇提取物中酚类成分的组成与含量进行了分析,并研究了该提取物对· O2-、· OH和DPPH自由基的清除能力以及防牛奶霉变的能力.结果表明,野菊花60%乙醇提取物主要含有黄酮类成分和一定量的酚酸类成分;酚酸类成分中绿原酸和咖啡酸的含量分别为20.74 mg·g-1和1 420.57 μg·g-1;总黄酮含量为490.50 mg·g-1,其中槲皮素、木犀草素、芹菜素、刺槐素和蒙花苷的含量分别为31.05、22.67、23.09、30.71和107.23 mg·g-1,分别占总黄酮含量的6.33%、4.62%、4.71%、6.26%和21.86%.该提取物对· O2-、· OH和DPPH自由基均有一定的清除能力,在实验设置的浓度范围内,对3种自由基的清除率与该提取物浓度基本呈正相关关系,回归方程分别为y=0.273x+38.540、y=1.208x+2.761和y=2.032x+45.330,IC50分别为41.98 μg·mL-1、39.11 mg·mL-1和2.30 mg·mL-1,其中对DPPH自由基的清除能力最强,且其IC50略高于VC.在牛奶中添加一定量的野菊花60%乙醇提取物(质量体积分数0.012 5%～0.2%),牛奶中的各级霉斑数量、病情指数以及霉菌孢子数均低于空白处理组,且该提取物的这种防霉变能力与其浓度呈一定的正相关关系;其中0.2%的野菊花60%乙醇提取物的防霉变能力高于质量体积分数0.01%山梨酸钾.实验结果显示,野菊花60%乙醇提取物具有较高的抗氧化能力和显著的防霉变能力,可作为食品防腐剂进行开发利用.     

全合成3α-羟类固醇脱氢酶基因密码子优化及酶性质研究

以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78提高到0.87,GC含量由原来的63.17降低到56.46,大幅度减少了GC簇及寡聚A和T局域的存在,提高3α—hsd的可表达性。全合成基因定向克隆到pET28a载体中,并转化至大肠杆菌B121(DE3)中表达。采用乳糖诱导后,SDS—PAGE检测在约27 kD处有一高效表达的蛋白条带。采用Ni螯合柱分离纯化3α-HSD,获得了较高纯度及较高的产率。酶学性质初步分析表明,全基因合成表达的3α-HSD的性质与原始的3α-HSD基本相同。     

光滑球拟酵母中α-酮戊二酸脱氢酶系生理作用解析

[目的]研究α-酮戊二酸脱氢酶系在光滑球拟酵母碳代谢流、能量代谢和氨基酸代谢中的生理作用.[方法]通过敲除光滑球拟酵母中编码α-酮戊二酸脱氢酶系中E1酶的基因kgd1,构建α-酮戊二酸脱氢酶活性缺失菌株T.glabrata kgd1::kan,并考察KGDH缺失引起TCA循环关键酶活性,碳代谢流量以及胞内氨基酸和能荷水平等方面的变化.[结果]光滑球拟酵母中α-酮戊二酸脱氢酶活性的缺失导致:(1)细胞启动乙醛酸途径,通过形成TCA-乙醛酸循环实现TCA循环的正常代谢;(2)胞内NADH/NAD+水平下降33.7%,ATP/ADP水平下降31.8%,而与NADH代谢相关的丙酮酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的活性分别提高58.1%、33.3%和32.5%;(3)胞内丙酮酸含量下降50.1%,而胞内琥珀酸、苹果酸和α-酮戊二酸含量则分别增加了172.7%、66.1%和41.1%;(4)丙酮酸族氨基酸含量下降29.3%,而胞内谷氨酸族氨基酸和天冬氨酸族氨基酸含量则提高了34.7%和26.8%.[结论]上述研究结果表明,α-酮戊二酸脱氢酶系在微生物细胞中心碳代谢、能量代谢和氨基酸代谢中发挥着重要作用.     

酿酒酵母人造纤维小体的研究进展简

纤维素乙醇的统合生物加工过程（consolidated bioprocessing,CBP）是将（半）纤维素酶生产、纤维素水解和乙醇发酵过程组合,通过一种微生物完成的生物加工过程。 CBP有利于降低生物转化过程的成本,受到研究者的普遍关注。酿酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）作为传统的乙醇生产菌株,是极具潜力的CBP底盘细胞。纤维小体是某些厌氧微生物细胞表面由纤维素酶系与支架蛋白组成的大分子复合物,它能高效降解木质纤维,在酿酒酵母表面展示纤维小体已成为构建CBP细胞的研究热点。笔者综述了人造纤维小体在酿酒酵母细胞表面展示组装的研究进展,重点阐述了纤维小体各元件的设计和改造,并针对酿酒酵母分泌途径的改造,提出提高人造纤维小体分泌组装的可能性策略。