基因导流杂交法于低密度基因芯片平台上检测乙肝病毒

运用基因导流杂交法在低密度基因芯片平台上检测乙肝病毒DNA（HBV DNA）。设计特异性引物,对HBV基因组DNA中的编码HBV多聚酶蛋白的一段序列进行PCR扩增;根据被扩增片段,设计保守的特异性探针,并将该探针固定在杂交膜上,制备低密度基因芯片：使用导流杂交法将上述扩增产物和低密度基因芯片进行杂交,根据显色反应判断被检测样本有无HBV DNA。基因导流杂交法在低密度基因芯片平台上可以方便、快速、准确地检测乙肝病毒。     

正常人肝细胞cDNA文库的构建及应用分析

目的利用Gubler-Hoffman法构建了正常人肝细胞的cDNA文库以筛选肝细胞内部与乙肝病毒感染相关的基因。方法首先采用TRIzol法提取正常人肝细胞总RNA,纯化mRNA。逆转录合成单链cDNA,然后合成双链cDNA。用Spin Column回收0.4kb以上片段,然后与Vector pAP3neo进行连接,利用电刺激转化法导入E.coliDH10B,利用PCR法检测文库的重组效率。结果扩增后的文库重组率为93.3%。结论已经成功地构建了正常人肝组织的cDNA文库,该文库可用于筛选与乙肝相关的基因及用于基因芯片的制作。     

武汉地区儿童乙肝病毒基因亚型感染的调查研究

１０４名武汉地区儿童乙肝病毒基因亚型感染调查结果显示：男性亚型Ⅰ感染率高于女性,而女性亚型Ⅱ感染明显高于男性。血清学标志物,俗称两对半,为大三阳时,病毒亚型Ⅰ感染远高于亚型Ⅱ（ｐ＜０．０１）。而小三阳中亚型Ⅱ感染率远高于亚型Ⅰ（ｐ＜０．０５）。说明乙肝病毒亚型易感性可能存在性别差异,不同ＨＢＶ亚型感染与特定血清学模式形成有关。不同乙肝基因亚型的Ｓ基因,Ｃ基因、Ｐ基因、Ｘ基因等碱基序列差异和其相互作用,可能是形成血清两对半模式多样性的物质基础。     

家蚕BmN铁微载体培养及HBeAg的高效表达

选择微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３对家蚕ＢｍＮ（从Ｓｉｌｉｗｏｒｍ Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ获得的细胞系）细胞进行高密度培养,并获得成功。观察了家蚕ＢｍＮ细胞在微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３上的贴壁分布,研究了不同接种浓度与微载体浓度时细胞的生长情况,并筛选出最佳的技术参数。在１０００ｍＬ滚瓶中用微载体Ｇｙｔｏｄｅｘ３培养家蚕细胞,在合适的培养条件下（细胞接种浓度３．６×１０＾５细胞／ｍＬ、微载体浓度５ｇ／Ｌ）,５     

HBV相关肝癌组织中微生物宏蛋白质组特征分析

越来越多的证据表明微生物菌群和肝脏疾病有着密切联系,但是HBV相关肝细胞癌(hepatitis B virus(HBV)-related hepatocellular carcinoma,HCC)人群肝脏组织内的微生物菌群种类和数量仍不清楚.本研究对来自165个HCC人群的肝癌组织和对应癌旁组织的质谱数据进行宏蛋白质组...     

辅抑制子SMRT特异地抑制孤儿核受体hB1F／hLRH-1的转录活性

孤儿核受体hB1F (NR5A2 ,也称之为LRH 1、FTF或CPF)在胆汁酸合成代谢相关基因、乙型肝炎病毒基因和一些肝特异性基因的表达调控中起着非常重要的作用。为了认识hB1F转录激活的分子机制 ,对核受体辅抑制子SMRT在其中的作用进行了研究。利用与GAL4 DBD融合的hB1F所进行的报告基因分析发现 ,SMRT能够以剂量依赖的方式显著地抑制hB1F的反式激活能力 ,但对融合蛋白质的表达没有影响。而且 ,SMRT也能够明显地抑制hB1F响应的乙肝病毒增强子II 核心启动子的活性 ,对增强子II的点突变分析表明这种抑制作用主要是由hB1F介导的。共转染实验显示 ,SMRT在多种细胞中都表现出抑制作用。有意思的是 ,哺乳动物细胞的双杂交与体外的GST下拉 (pull down)分析都表明hB1F与SMRT之间不存在直接的相互作用。实验数据首次证实 ,辅抑制子SMRT可能通过间接的方式特异地抑制孤儿核受体hB1F的转录活性。     

乙肝病毒感染与抗中性粒细胞胞浆抗体相关性分析

目的 探讨乙肝患者病毒复制活动情况与血清抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的相关性.方法 回顾性分析浙江大学医学院附属第一医院近三年来慢乙肝患者临床资料,排除并发自身免疫性肝病、酒精性肝病、药物性肝病等其他肝病和并发其他病毒感染,完善ANCA检测,共有21例患者纳入.根据乙肝患者入院后检测HBV DNA的拷贝水平,将患者分为HBV复制活动组和合HBV复制非活动组,根据ANCA检出情况又可分为ANCA阳性组和阴性组.采用实时荧光定量PCR检测HBVDNA拷贝水平,间接免疫荧光方法检测血清ANCA水平.结果 21例患者中,HBV复制活动组(11例)中pANCA阳性患者6例(55.5％),而HBV复制非活动组(10例)中pANCA阳性患者0例(0％)(x2=5.198,P=0.023).pANCA阳性组(6例)中HBV复制活动患者6例(100％),而pANCA阴性组(15例)中HBV复制活动患者5例(33.3％)(x2=5.198,P=0.023).而两组患者中肝硬化患者、原发性肝癌患者和ABO血型检测差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乙肝病毒活动可能引起血管损害,同时乙型肝炎病毒引起的血管损害并不一定增加肝硬化和肝癌的发生.     

乙肝病毒表面抗原Pre-S1的N端片段溶液构象研究

利用二维核磁方法对乙肝病毒表面抗原Pre S1N端 2 0～ 47肽段进行溶液构象研究 ,并用距离几何方法搭建分子结构 ,最后用分子动力学模拟方法对结构进行优化 .分析结果发现该肽段存在 4个 β turn ,位置与免疫学定义的抗原抗体结合位点相符 .     

太原地区乙肝患者HBV基因分型与细胞免疫功能研究

了解太原地区乙肝病毒基因型分布情况,研究不同基因型乙肝病毒致病性与细胞免疫功能关系。选择慢性乙肝、乙肝肝硬化及乙肝病毒相关肝癌等乙肝病毒感染患者,采用PCR技术检测患者血清HBV-DNA和HBV基因型,用流式细胞仪直接免疫荧光法(FCM)检测患者外周血T淋巴细胞亚群百分率,分析不同病毒基因型与乙肝病程关系以及不同基因型病毒感染患者细胞免疫功能状态。检测136例乙肝病毒感染患者,其中B基因型感染38例,占总数27.9%;C基因型感染93例,占总数70.6%;B/C混合型感染3例,占总数2.2%;D基因型感染2例,占总数1.5%。B型与C型乙肝病毒感染患者的HBsAg水平无区别,B型患者血清HBeAg(+)%高于C型乙肝病毒感染者,慢性无症状乙肝携带者、慢性乙肝、乙肝肝硬化和乙肝病毒相关的原发性肝细胞癌各组中乙肝病毒基因型的分布无差异,但乙肝肝硬化患者与慢性无症状乙肝携带者、慢性乙肝患者的基因型有差异(P<0.01),C基因型感染者HBV-DNA水平、HBeAg阳性率、CD4+细胞和CD4+/CD8+T淋巴细胞比值低于B基因型感染者。太原地区临床乙肝病毒感染患者以C基因型为主,C基因型感染者比B基因型的肝脏功能损害严重,可能与细胞免疫功能降低HBV-DNA水平和HBeAg阳性率高有关。