全文获取类型
收费全文 | 1301篇 |
免费 | 44篇 |
国内免费 | 268篇 |
专业分类
1613篇 |
出版年
2024年 | 3篇 |
2023年 | 9篇 |
2022年 | 21篇 |
2021年 | 22篇 |
2020年 | 16篇 |
2019年 | 22篇 |
2018年 | 18篇 |
2017年 | 28篇 |
2016年 | 21篇 |
2015年 | 31篇 |
2014年 | 48篇 |
2013年 | 32篇 |
2012年 | 56篇 |
2011年 | 53篇 |
2010年 | 43篇 |
2009年 | 56篇 |
2008年 | 57篇 |
2007年 | 65篇 |
2006年 | 70篇 |
2005年 | 83篇 |
2004年 | 87篇 |
2003年 | 83篇 |
2002年 | 58篇 |
2001年 | 72篇 |
2000年 | 62篇 |
1999年 | 51篇 |
1998年 | 43篇 |
1997年 | 47篇 |
1996年 | 53篇 |
1995年 | 48篇 |
1994年 | 50篇 |
1993年 | 46篇 |
1992年 | 27篇 |
1991年 | 20篇 |
1990年 | 25篇 |
1989年 | 18篇 |
1988年 | 13篇 |
1987年 | 13篇 |
1986年 | 8篇 |
1985年 | 16篇 |
1984年 | 3篇 |
1983年 | 4篇 |
1982年 | 4篇 |
1981年 | 1篇 |
1966年 | 3篇 |
1963年 | 3篇 |
1957年 | 1篇 |
排序方式: 共有1613条查询结果,搜索用时 0 毫秒
21.
应用PCR方法扩增出HCVE2基因编码417a.a-750a.a的DNA片段,克隆到原核表达载体pQE30 LacZ启动子下游,转化JM109菌株。在JM109菌株中诱导表达出N端含6个组氨酸的E2融合蛋白,用Ni-NTA-Superflow亲和层析柱纯化作为抗原免疫实验兔和BALB/c鼠。定期取兔血,采用间接ELISA方法检测兔子体内针对E2的抗体水平和维持规律。结果显示,距初次免疫14d兔子体内已有抗体产生,直至免疫第55d抗体水平持续上升,之后抗体水平保持稳定,抗体滴度达到1:3200。六周后,取鼠脾脏制各淋巴细胞,定向刺激扩增后与经过重组真核表达质粒pCE2转染的P815细胞作用,利用LDH释放试验检测作用效果。在E:T=200:1的情况下,杀伤率超过30%。这些结果表明工程菌株表达的HCVE2蛋白具有良好的免疫原性,可以诱发免疫实验动物机体产生较高滴度的抗体及特异性CTL应答。由此我们认为E2蛋白是发展HCV预防工程蛋白疫苗的合适候选者。 相似文献
22.
犬传染性肝炎病毒在体外细胞质内的发生 总被引:1,自引:0,他引:1
通过对犬传染性肝炎病毒(ICHV)在犬肾传代细胞内形态发生及其抗原定位的电镜和免疫胶体金电镜研究,发现ICHV除了在宿主细胞核内发生外,还有一条细胞质内的发生途径。在细胞质内病毒核壳体的装配是以均质致密包涵体和副晶格包涵体为“基地”,这与人们熟知的细胞核内形态发生方式相似。免疫胶体金标记显示,细胞质包涵体中含有大量的ICHV抗原成分,显核壳体在细胞质内装配病毒的结构蛋白来源。此外,在感染的细胞质内还观察到与核内相同的病毒核心样结构。 相似文献
23.
24.
沈月雷 《国外医学:分子生物学分册》1994,16(6):249-253
本以乙型肝炎病毒,人免疫缺陷病毒和脊髓灰质炎病毒为例着重论述了转基因小鼠在病毒学研究中的应用,综述了近几年来以转基因小鼠为工具的病毒学研究成果。 相似文献
25.
参照GenBank中的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14株序列设计了一对特异性引物,用PCR方法从SA14-14扩增E基因全长,然后克隆到pMD18-T载体中,转化宿主菌DH5a,提取阳性克隆质粒进行双酶切鉴定,将目的片段定向克隆到pET32a( )中,转化入BL21(DE3),经IPTG诱导可表达分子量约73ka的蛋白,Western blotting试验呈阳性,表明E基因得到表达。以纯化的表达产物为核心抗原,猪抗JEV血清为一抗,HRP标记羊抗猪IgG抗体为二抗建立间接ELISA方法,并初步检测了一些血清样品,结果提示表达的蛋白具有很好的应用开发价值。 相似文献
26.
27.
应用HCVC (pC)和HCVCE1E2 (pCE1E2 )重组体转染真核细胞并且通过肌注免疫BALB/C小鼠 ,对其体液免疫和细胞免疫进行检测。所用的 pC和 pCE1E2 均可在真核细胞内表达出特异性HCVC蛋白 ;肌注DNA免疫后均可诱导出BALB/C小鼠的体液和细胞免疫反应 ,抗体反应的A值 :pC组为 0 .358± 0 .0 96 ,pCE1E2 组为 0 .4 15± 0 .12 7;CTL活力 pC组为 18.6 5%± 5.72 % ,pCE1E2 组为 2 0 .0 7%± 11.11% ;通过免疫鼠荷瘤检测体内CTL反应 ,可观察到免疫组鼠发瘤时间滞后 ,发瘤部位减少和存活时间延长。在开发和研制HCV疫苗的过程中 ,DNA免疫是在快速构建、评价和筛选免疫原方面的有效办法。 相似文献
28.
通过逆转录-聚合酶链反应从我国河南省2例重叠感染HCV或HBV/HDV的献血啼中,分离到HBVNS5区的部分cDNA,对其进行序列分析比较,结果表明,河南株HGVNS5工核苷酸与两中国HGV主同源性高于国外代表株(88.5-90.6%),但由核苷酸推导的氨基酸的同源性都无明显的地区性区别。HGVNS5区氨基酸序列较保守,缺乏明显高变区,中国4株HGV在7384位发生了由C→T的变异,从而导致一个人 相似文献
29.
本研究旨在寻找戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)衣壳蛋白ORF2的相互作用蛋白,探讨其在HEV感染中的作用。采用酵母双杂交方法从人肝细胞文库中筛选与HEV ORF2相互作用的蛋白,结果显示CD63与HEV ORF2相互作用。Pull-down实验提示原核表达的ORF2与CD63结合较弱,而免疫共沉淀实验提示真核表达的ORF2能与CD63结合。流式细胞术检测结果显示,HEV易感细胞PLC/PRF/5细胞膜表面的CD63表达水平普遍低于HEV非易感细胞。过表达CD63抑制PLC/PRF/5细胞的HEV感染,而小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰CD63表达则促进HEV感染。结果提示,CD63能与HEV ORF2相互作用,可能抑制HEV感染肝细胞。 相似文献
30.