基因工程菌里氏木霉染色体DNA的提取方法

研究基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma Teesei)染包体DNA的提取方法。采用冷冻研磨CTAB法、氯化苄SDS法和冷冻研磨SDS法三种提取DNA的力法。通过琼脂糖凝胶电泳埘提取的DNA进行检测。结果表明：冷冻研磨CTAB法更适合此类DNA的提取。对冷冻研磨CTAB法提取条件进行了优化。用该法提取的DNA上的外源基因t—PAcDNA部分片段进行PCR扩增,获得良好结果。用本实验冷冻研磨CTAB法提取的DNA完全适用于PCR和其它的分子生物学操作的要求。     

产真菌毒素真菌的PCR检测和定量技术

真菌毒素是丝状真菌产生的次级代谢物,脊椎动物通过自然途径即使吸入少量也会中毒。为了提高食品的安全性,使消费者免遭有害污染,就必须对可能产生这类有毒物质的真菌进行严格的检测,这种检测要贯穿于农产品生产以及粮食和饲料加工的各个重要环节。基于聚合酶链式反应的诊断技术已经应用于最严重的毒素产生菌（诸如镰刀霉菌、曲霉菌和青霉菌等）的检测和鉴定,     

外生菌根真菌与丝状真菌混合对红松凋落物降解效能的影响

实验以原始红松林中高频出现的丝状真菌(链格孢Alternarria sp.)和两种外生菌根真菌(细粉绒牛肝菌.Xerocomus Pulverulentus、大杯伞Clitocybe maxima)为供试菌株,以粉碎的新鲜红松凋落物为分解底物,发酵培养后测定底物的质量损失率,酶活性以及营养元素的变化情况。结果表明,AX处理(Alternaria sp.和X.Pulve Rrulentus混合菌株组合)在60天内质量损失率最高,为18.33%,而混合菌AC处理(Alternaria sp.和C.maxima混合菌株组合)由于产生拮抗作用质量损失较低,为13.27%;20天时,X处理(X.Pulverulentus)产生漆酶活性较高为0.093 U·mL^-1,C(C.maxima)和AX处理的酶活性的最高值分别为0.063 U·mL^-1和0.047 U·mL^-1,而A(Alternaria sp.)处理的纤维素酶活性为0.59 U·mL^-1,AC处理为0.57 U·mL^-1,AX为0.53 U·mL^-1,但是AX处理在50天时再次出现高峰,为0.48 U·mL^-1:AX处理底物的营养元素N含量减少幅度最为明显,减少百分率为12.21%,同时,P元素的减少幅度也最大,减少百分率25.82%。研究结果进一步揭示了森林生态系统中不同功能真菌类群对林木有机凋落物降解过程中的作用机制,及真菌类群间的相互作用关系。     

丝状真菌高效表达异源蛋白研究进展

丝状真菌是具有高效分泌蛋白质潜力的真核表达系统, 能对蛋白质进行翻译后修饰, 如蛋白质糖基化等; 并且比植物、昆虫和哺乳动物细胞具有更快的生长速率。近年来, 随着真菌分子遗传技术和菌种改良策略的进步, 尤其是真菌基因组学的发展, 利用丝状真菌生产异源蛋白越来越受到关注。综述了丝状真菌作为细胞工厂生产异源蛋白的最新探索与进展, 其中包括功能基因组学在蛋白表达与分泌研究中的应用, 同时探讨了异源蛋白表达和生产的改进策略。     

贵州小孢子菌——小孢子菌属一新种

从我国贵州省的土壤中分离到1株小孢子菌,菌株GZUIFR-EB2001M在小孢子属系统发育树中独立为一亚分支,明显区别于其他供试种,为该属一新种,命名为贵州小孢子菌。形态学与近似种的主要鉴别特征为:无球拍状菌丝;大分生孢子光滑或粗糙,梭形,细长;小孢子棒状至柱状。     

丝状真菌遗传转化系统的最新研究进展

随着大量丝状真菌基因组序列的公布,丝状真菌基因功能研究已然成为现今分子生物学的热点领域。真菌的遗传转化是研究基因功能的重要手段,研究者不断优化和开发出新的、高效的遗传转化方法,以满足更多真菌物种研究的需要。本综述总结了丝状真菌的遗传转化体系的最新研究进展,如遗传转化方法、选择标记的类型和转化系统的应用。     

纤维二糖水解酶N-糖基化对其在草酸青霉中的分泌和酶活影响*

目的:纤维素酶水解天然纤维素产生易被微生物利用的葡萄糖是进行生物炼制的关键。丝状真菌分泌的纤维素酶大多数是经过糖基化修饰的,研究丝状真菌纤维二糖水解酶(Cel7A)的催化功能域N-糖基化修饰对其分泌及酶活的影响,有助于优化纤维素酶的表达。方法:利用定点突变将草酸青霉和深绿木霉Cel7A催化功能域的N-糖基化位点去除,构建突变体PoCel7A^*和TaCel7A^*。以草酸青霉为宿主构建分泌表达PoCel7A^*、TaCel7A和TaCel7A^*的重组菌,检测N-糖基化去除对Cel7A分泌和酶活力的影响。结果:PoCel7A催化功能域的N-糖基化去除对其蛋白分泌和酶活力无影响。TaCel7A催化功能域的N-糖基化去除不影响其蛋白分泌;但突变体的pNPCase、FPase和Avicelase酶活力分别下降了21.2%,15.2%和17.6%。去除Cel7A催化功能域N-糖基化,加强了细胞内UPR响应。外源蛋白TaCel7A和TaCel7A^*的表达也加强了胞内UPR响应。结论:不仅可以为丝状真菌Cel7A的酶工程改造提供理性设计思路,而且为进一步了解糖基化在纤维素酶降解纤维素过程中的作用及机理奠定一定基础。     

木质纤维素酶基因资源挖掘及真菌酶系改造

简述了木质纤维素酶基因资源挖掘的策略和方法及其在丝状真菌酶系改造中的应用。从候选基因的获取(木质纤维素酶基因资源的挖掘和高效利用)、外源基因的表达、酶系的复配和重构等方面综述了丝状真菌酶系改造的最新进展,并提出了丝状真菌酶系改造中亟须解决的关键问题。     

丝状真菌中纤维素酶与半纤维素酶的合成调控简

综述了丝状真菌合成纤维素酶和半纤维素酶的相关调控研究进展。对最近研究文章分析发现：细胞外信号分子（C源、光信号）,转录因子以及染色质重建等对丝状真菌合成调控纤维素酶及半纤维素酶有重要影响。同时解析丝状真菌合成纤维素酶和半纤维素酶调控网络,以期为利用基因工程改造纤维素酶和半纤维素酶生产工业菌株提供理论指导。     

木质纤维素酶基因资源挖掘及真菌酶系改造简

简述了木质纤维素酶基因资源挖掘的策略和方法及其在丝状真菌酶系改造中的应用。从候选基因的获取（木质纤维素酶基因资源的挖掘和高效利用）、外源基因的表达、酶系的复配和重构等方面综述了丝状真菌酶系改造的最新进展,并提出了丝状真菌酶系改造中亟须解决的关键问题。