新型戊型肝炎诊断试剂盒的研制及其应用

用ＨＥＶＯＲＦ３合成肽及ＯＲＦ２重组抗原研制成新型ＨＥＶＥＩＡ诊断试剂盒。与ＧｅｎｌａｂｓＨＥＶＥＩＡ检测比较,灵敏度和特异性均达１００％（６０／６０）。三批试剂精密性测定均＜１０％。该试剂盒置４℃８个月或３７℃４ｄ保持稳定。检测不同肝炎患者ＨＥＶ抗体,发现急性非甲非乙非丙肝炎中有６３．２％,甲肝有１３．４％,乙肝有８．３％,丙肝有６．６％,正常人群为２．９％。所研制的戊型肝炎诊断试剂盒,灵敏度高,特异性强,精密性好,稳定性合格。适用于戊型肝炎诊断及戊肝病毒感染的流行病学调查     

庚型肝炎病毒NS5区蛋白鼠单克隆抗体的制备

庚型病毒性肝炎是近年来世界上才确认的一种新型肝炎［１～３］。庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）呈世界性分布,经血液传播为主,也可母婴传播。ＨＧＶ容易形成持续性感染,类似ＨＩＶ和ＨＣＶ。据粗略估计,我国大约有１００万～１０００万ＨＧＶ携带者。因此,ＨＧＶ已成为继乙...     

肝细胞靶向性脂质体介导的硫代磷酸反义寡核苷酸在体内外抑制乙型肝炎病毒的研究

在体外细胞培养系统和裸鼠动物体内,观察了人肝细胞靶向性脂质体介导的部分硫代型和全部硫代型反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒的抑制作用。结果显示,针对HBVe基因翻译起始区的18聚体的硫代磷酸反义寡核苷酸在体内、外对HBV DNA、HBV mRNA及HBsAg、HBeAg均有不同程度的抑制作用。研究说明,反义寡核苷酸是抗HBV有效的基因治疗候选药物。     

丁型肝炎病毒核酶研究进展

丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）核酶是近年来发现的一种具有独特的假结结构的核酶,本文着重从其结构,功能以及两者之间的关系等方面进行综述。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白3在致病中的作用

本文就近几年有关丙型肝炎病毒非结构蛋白３基因（ＨＣＶｎｓ３）的研究进展分别从该基因的结构功能特点,编码产物（ＮＳ３）的免疫原性等方面作了综述,其中重点介绍了ＮＳ３蛋白与肝细胞癌（ＨＣＣ）发生的相关性研究,对目前有关ＨＣＶ研究体系,临床治疗中存在的问题,新进展也作了简要介绍。     

HBV pre-c-Fc融合蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其生物学活性研究

目的:在杆状病毒表达系统中表达融合蛋白乙型肝炎病毒前C蛋白-小鼠IgG Fc蛋白(HBV precore protein-mouse IgG Fc,HBV pre-c-Fc),并鉴定其免疫原性。方法:目的基因HBV prec-Fc连接到pFastBac1载体,获得的pFastBac1-HBV pre-c-Fc质粒转化DH10Bac感受态,通过Tn7转座子将目的基因转座到Bacmid中,得到Bacmid-HBV pre-c-Fc穿梭载体,脂质体包被后转染Sf9昆虫细胞获得P1代病毒,重复转染Sf9获得高滴度病毒。收集细胞上清超滤后通过Protein G亲和层析柱纯化得到目的蛋白HBV pre-c-Fc。纯化的蛋白大腿内侧肌肉注射免疫BALB/c小鼠并检测血清中乙型肝炎病毒核心蛋白抗体产生量。结果:HBV pre-c-Fc在昆虫细胞中成功表达,纯化后蛋白纯度达90%以上,蛋白产量约为3.03mg/L,纯化蛋白能有效刺激BALB/c小鼠产生特异抗体。结论:成功地在杆状病毒表达系统中表达了具有免疫原性的HBV pre-c-Fc蛋白,为生产乙肝治疗性疫苗奠定了基础。     

乳腺癌患者化疗后乙肝病毒再激活及拉米夫定预防性应用的临床研究

目的:探讨化疗引起的乳腺癌患者肝功能损害与乙肝病毒(HBV)感染的相关性及抗病毒治疗在预防化疗引起的HBV再激活中的作用。方法:2006年3月-2010年10月在武汉市第三医院接受化疗的病理确诊为乳腺癌患者(包括术后辅助化疗)为研究对象,比较HBs Ag阴性138例和HBs Ag阳性50例患者化疗后肝功能损害的发生情况,并分析在HBs Ag阳性患者中,预防性使用(21例)与未预防性使用(27例)抗病毒药物拉米夫定后乙肝病毒再激活率的差异。结果:化疗后出现肝功能损害的乳腺癌患者中,HBs Ag阳性患者(31.25%)与HBs Ag阴性患者(16.67%)所占比例的差异有统计学意义(P<0.001)。化疗前预防性使用拉米夫定(4.62%)与未预防性使用(25.93%)拉米夫定,患者出现HBV再激活率的差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论:乳腺癌患者化疗后,HBs Ag阳性患者较HBs Ag阴性患者更易出现肝功能损害,预防性使用核苷类似物抗病毒药物拉米夫定,可明显降低乳腺癌合并乙肝患者化疗后HBV再激活肝炎的发生。     

戊型肝炎病毒疫苗的研发和评价

由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)导致的疾病日渐引起人们的关注。中国目前已经上市的HEV疫苗为万泰沧海生物技术公司(INNOVAX)研发的大肠杆菌表达的I型中国分离株ORF2 p239重组疫苗HEV 239(Hecolin),它能形成病毒样颗粒从而产生更好的免疫原性。该疫苗在HEV高危人群和高流行地区的使用将对戊型肝炎的流行起到积极的防控作用。回顾了HEV疫苗研究的历史过程,并探讨了目前HEV疫苗评价方法面临的问题及研究思路。     

α-Actinin影响丙型肝炎病毒非结构蛋白与脂筏的关联及复制

本文旨在探讨α-actinin参与丙型肝炎病毒(HCV)复制的机制。将α-actinin转染Huh7.5细胞,用JFH1感染,发现过表达α-actinin可显著增加HCVRNA水平及非结构蛋白表达,感染性HCV颗粒也同时增多。膜漂浮实验显示,α-actinin可与HCV非结构蛋白NS5A共定位于脂筏。抑制内源性α-actinin表达,可使复制子细胞内NS5A表达减少,且对非离子去污剂敏感而从脂筏脱落。免疫荧光实验显示,NS5A与内质网标志分子calnexin核周共定位消失。以上结果提示,α-actinin可通过影响非结构蛋白与脂筏的关联而参与HCV RNA的合成,为临床治疗及研制新型抗HCV药物提供理论依据和实验基础。     

重组丙型肝炎病毒核心蛋白的原核表达、纯化和抗体制备

本文旨在获得纯化丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(HCV-C)及抗HCV-C多克隆抗体,为深入研究HCV-C与肝细胞相互作用的分子机制奠定基础。首先以HCV1b亚型HC-J4-91全基因组质粒为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增HCV-C基因,构建重组质粒pQE31-HCV-C。融合蛋白经原核表达、纯化后,免疫BALB/c小鼠,制备抗HCV-C多克隆抗体。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,蛋白免疫印迹(Westernblot)和间接免疫荧光染色鉴定抗体特异性。结果显示,表达HCV-C的原核表达质粒pQE31-HCV-C构建正确,获得相对分子质量约22000的纯化融合蛋白。ELISA检测重组蛋白免疫小鼠的抗血清效价达1:12800。结果显示,自制的抗HCV-C多克隆抗体能特异性识别HCV-C。本研究获得了纯度较好、原核表达的HCV-C,并成功制备了抗HCV-C多克隆抗体,为深入研究HCV-C的致病机制提供了有实用价值的研究工具。