腾冲嗜热杆菌热稳定海藻糖磷酸化酶的基因表达与酶的分子生物学性质研究

分离克隆了腾冲嗜热杆菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)海藻糖磷酸化酶(TreP)的编码基因(treP), 该酶可催化以葡萄糖和α-1-磷酸葡萄糖为底物的海藻糖合成反应及其逆向的分解反应. 反向mRNA点杂交实验表明, 腾冲嗜热杆菌中treP基因在高盐胁迫条件下表达量增加, 而在海藻糖诱导条件下表达量降低. 将该基因导入不含TreP的大肠杆菌中进行诱导表达, SDS-PAGE表明, 异源表达的TreP分子量约为90 kD, 与预期值相同. 通过葡萄糖氧化酶法测定分解产物葡萄糖的产率表明: TreP催化海藻糖分解反应的最适温度是70℃, 最适pH值为7.0; 通过HPLC检测合成产物海藻糖的产率表明: TreP催化合成反应的最适温度为70℃, 最适pH值为6.0. 在最适反应条件下, 50 μg的TreP粗酶可催化25 mmol/L α-1-磷酸葡萄糖与葡萄糖在30 min合成11.6 mmol/L海藻糖; 而同量的酶在同样时间内仅能将250 mmol/L海藻糖分解生成1.5 mmol/L葡萄糖. 以上体内胁迫和诱导表达分析及体外酶学性质分析均证明该酶的主要功能是催化海藻糖的合成反应. 热稳定性实验表明, 该酶性质比较稳定, 在50℃下温育7 h还能保持77%以上的活性, 是一个有潜在工业用途的新的热稳定海藻糖合成酶.     

花卉聚焦野性之美

佛坪国家级自然保护区在自然地理划分上属于暖温带,但由于其西北面高峻庞大的秦岭主脊阻挡了北方寒冷气流的南侵,而其北高南低的地形与东南方的太平洋暖湿气流相迎,形成了这里冬无严寒,夏无酷暑的温暖潮湿气候;该区位于秦岭深山区,海拔高度980-2904米.境内山峦重叠、沟谷纵横,相对于整个秦岭山     

应用寡核苷酸微阵列检测肺癌样品中的P53和K-ras基因点突变

对影响寡核苷酸微阵列检测点突变的敏感性和特异性的各种因素,如杂交液,杂交温度,标记引物浓度及其比例等,进行了研究,采用不对称PCR扩增有利于敏感性提高,多重不对称PCR不影响杂交的特异性,且敏感性有所增加,对30例肺癌标本进行寡核苷酸微阵列检测,发现12例标本发生了P53基因来点突变,K-ras突变有5例,与测序结果相比,P53基因突变符合率达到80％,由于检测样本较少且检测位点不完全,因而未得到K－ras和P53基因突变与肿瘤的种类,病期及吸烟之间的明显相关性。     

RQA在肌电分析中的应用

介绍了递归图的生成方法和定量递归分析（RQA）中递归点的百发数,确定性线段的百分数,线段分布香农熵等分析量的意义。应用RQA分析肱二头肌及肱桡肌在不同负重下的肌电信号,发现肽二头肌肌电信号的递归点百分数的比肱肌高,有较强的周期性嵌入。与同一信号所作的FFT谱分析相比较,RQA法有较同的区分灵敏性,是肌电分析的一种新方法,它在其他复杂的生理信号处理中也有十分广阔的应用前景。     

一个母系遗传非综合征耳聋大家系mtDNA序列分析

通过分析本家系mtDNA序列,探讨淮阴一非综合征耳聋大家系患病的分子遗传学机制.采用聚合酶链反应(PCR)扩增mtDNA与非综合征耳聋相关位点nt1555、nt7445的区域和人类种群研究的D-loop区、PCR-异源双链分析、PCR-RFLP、PCR产物克隆序列测定等技术对该家系进行了系统的研究.发现该家系中全部母系亲属有mtDNAA1555G突变,而家系中非母系个体、对照组(100例正常个体)的mtDNA1555位点均为A.该家系mtDNA7445位点无突变;该家系属于II型线粒体;发现家系D-loop区存在未见报道的碱基插入.提示mtDNAA1555G位点突变可能是导致该家系患者致聋的主要因素之一.遗传背景可能对家系疾病的表型存在一定程度的影响。 Abstract:We find an extensive nonsyndromic sensorineural deafness family in Huaiyin,and investigate the possible molecular genetic mechanism of matrilineal nonsyndromic sensorineural deafness.We use PCR,combined with PCR-heteroduplex analysis,PCR-RFLP and sequencing techniques to examine part of 12S rRNA,tRNAser(UCN),and D-loop region of this pedigree.1)We found an A to G transition at position 1555(A1555G) of the mitochondrial 12S rRNA from all the patients and four matrilineal.2)An new nucleotide insertion was indentified in D-Loop region.3)According to the polymorphism of D-loop,this pedigree belong to mitochondrial type II.The study showed that the A1555G mutation may be one of major factors in progressive inherited deafness of this family and genetic background should be investigated in the future.     

木兰科植物上的两个拟茎点霉新种

本文报道了木兰科植物上的两个拟茎点霉Phomopsis新种:木兰叶拟茎点霉 Phomopsis magnoliae和白兰生拟茎点霉Phomopsis micheliicola。新种附有拉丁文、英文描述和显微结构图。模式标本保存于华南农业大学真菌标本室(HMA)。     

量子点的生命科学中的应用

近年来,最子点（半导体纳米微晶体）的研究引起国内外研究者的广泛兴趣,其研究内容涉及物理、化学、材料等多材料,已成为一门新兴的交叉学科。虽然量子点在生物学中的应用才刚刚起步,但是已经取得了意义的进展,成为人们极为注意的一个热点。现就量子点的光学特性、制备方法以及在生物学中的研究进展和应用前景作一简要综述。     

不同地区HPV16E7基因的克隆及序列差异分析

采用PCR扩增、pGEM-T载体克隆和核苷酸序列分析的方法对一 例武汉地区及两例五峰县高发区宫颈癌患者体内HPV16型的E7基因编码区进行序列分析并与 野生型(德国标准株)及已发表的HPV16湖北株(HPVHB)进行了比较.结果发现武汉地区HPV16 型E7基因仅第54位出现一个同义突变,而高发区HPV16型E7基因存在差异,第77位氨基酸由 精氨酸(Arg)变为半胱氨酸(Cys),第96位由谷氨酰氨酸(Gln)变为精氨酸(Arg),E7蛋白的二级 结构及亲、疏水性也相应改变,与野生型有较大差异.     

二点叶螨对甲氰菊酯、氧乐果和四螨嗪抗药性的选育、衰退和恢复

以兰州吐鲁沟公园的二点叶螨Tetranychusurticae为敏感品系 ,分别用氧乐果、甲氰菊酯、四螨嗪喷雾处理 15次 ,其抗性水平分别为 38 5、 479 8和 6 7 3倍。将抗性品系分别与敏感品系进行杂交和回交的结果表明 :抗氧乐果品系的显性系数DRS (R♀×S♂ )为 0 470 0、DSR (S♀×R♂ )为 0 4749;抗甲氰菊酯品系的DRS (R♀×S♂ )为 0 5 15 5 ,DSR 为0 5 2 37;抗四螨嗪品系的DRS为 0 3134 ,DSR 为 0 2 46 6。表明二点叶螨对这 3种药剂的抗性均是由单个不完全显性基因所控制。在连续 10个月不接触药剂的情况下 ,3个抗性品系的抗药性都有下降 ,抗氧乐果品系的抗性下降最快 ,只有敏感品系的抗性倍数的 3 6倍 ;抗甲氰菊酯种群的抗性下降较慢 ,为敏感品系的 95 9倍。再经甲氰菊酯、氧乐果、四螨嗪分别连续15次喷雾处理后 ,3个抗性种群的抗性水平又再度回升 ,抗甲氰菊酯品系回升较快 ,抗性为敏感品系的 5 2 3 5倍 ,抗四螨嗪品系次之 ,抗氧乐果的品系抗性恢复最慢。     

华丽蛇毒素RGD序列上游点突变对结构和功能的影响分析

解联蛋白（disintegrin)是一类存在于蛇毒中的血小板凝集抑制因子。研究表明,Arg-GLT-Asp(RGD)序列与解联蛋白的生物学活性有密切关系。紧靠RGD序列两翼的氨基酸残基有调节解联蛋白抑制ADP-诱导血淖板凝集作用,RGD序列侧翼的第45位氨基酸残基位于该类蛋白内部形成的小槽内,这个小槽在RGD袢形成发夹结构方面起重要作用,在此基础上,本文进一步分析了RGD袢形成发夹结构方面起重要作用,在此基础上,本文进一步分析了RGD袢上游区域氨基酸残基在调节解联蛋白功能中的作用。具体方法是：用基因点突变技术将华丽蛇毒素的K^41K^42K^43R^44T^45I^46突变腹蛇毒素的S^41K^42A43G44T45I46和S^41K42A43G44I46。然后分析突变蛋白的结构。性质和功能变化。结果表明,前一种突变K^41K42A^43R^44T45I46→S^41K^42A^43G^44T^45I^46显著地降低了华丽蛇毒素对血小板凝集和抑制活性,后一种突变S^41K^42A^43G^44T^45I^46→S^41K^42A^43G^44I^46有效地恢复了华丽蛇毒素抑制血小板凝集的作用。同时,这两种突变也改变了含点突变基因的pGEX-3X质粒在受体细胞（E.coli)内的表达。例如,重组于pGEX-3X质粒的野生型腹蛇毒基因和华丽蛇毒素基因以可溶性形式表达,而重组于相同载体的点突变基因表达的目的蛋白是不溶性的,为此,本文又通过构建表达难溶蛋白载体的方法获得了突变基因的可溶性表达产物。本文首次证实了RGD上游的39-45位氨基酸残基与解联蛋白的结构和功能有密切关系。