虎纹捕鸟蛛毒素HWTX—Ⅱ的^1H—NMR信号归属和二级结构分析

虎纹捕鸟蛛毒素HWTX-Ⅱ是从虎纹捕鸟蛛Selenocosmia huwena的毒液中分离出的一种新型杀虫肽。应用2D－NMR技术研究该毒素分子的溶液结构特点,通过分析水及重水DQF－COSY、COSY、TOCSY和NOESY等^1H－NMR谱,识别出HWTX-Ⅱ全部37个氨基酸残基自旋体系;通过NOESY谱中的dαN、dαδ、dβN和dNN联系完成了序列专一的谱峰归属,确认了所有主链质子和除了Lys侧链εNH2质子外的所有侧链质子的化学位移,为完全解析HWTX-Ⅱ的溶液三维象奠定了基础,并且通过核磁数据分析,确定HWTX-Ⅱ的二级结构特点是含有较多的伸展构象,尤其是C端有一个典型的双股反平行的β折叠（Trp27-Cys29和Cys34-Lys36),分子中缺乏螺旋结构,这些二级结构特点与已探明结构的其他蜘蛛毒素的基本相同。     

基因体外诱变的一种新方法--脱氧核苷三磷酸替代法

在PCR的过程中,采用5-溴脱氧尿苷三磷酸(BrdUTP)部分取代脱氧胸苷三磷酸(dTTP)的方法,对克隆的野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因进行了体外诱变.结果表明,BrdUTP浓度越高,诱变越强;浓度越低,诱变越弱.当BrdUTP浓度为dTTP的0.1%时,可以得到最多的正诱变结果.用LBSP鉴别培养基初筛,然后用Yoo改良法测定酶活,仅一轮诱变就获得了其表达产物α-淀粉酶的酶活分别降低了5倍和提高了20倍的两个突变基因.再以后者为PCR模板进行第二轮诱变,从而筛选到了α-淀粉酶的酶活提高40倍的突变体.此诱变方法克服了用碱基类似物在体内诱变由于核酸复制酶等的校正作用而造成诱变无效的难题,并为基因的体外诱变找到了一条新途径.     

饲料蛋白水平对宝石鲈生长和体组成影响研究

选择体重一致、健康无病、初始体重104.13±0.46g宝石鲈105尾,随机分为5组,每组3重复,分别喂以蛋白水平为23.64%、28.45%、33.50%、3.04%和41.62%的等能颗粒饲料(以白鱼粉为蛋白源),在15口水泥池中控温养殖8周,研究饲料蛋白水平对宝石鲈生长和体组成的影响.饲养试验结果表明:饲料蛋白水平为33.50%时,宝石鲈的增重率最大,与饲料蛋白水平23.64%组相比差异极显著(P0.05).试验不同组间鱼体肥满度、肝体指数、蛋白质净利用率和饵料系数没有显著差异(P>0.05).通过增重率的折线法分析结果表明,宝石鲈获得最佳增重率的饲料蛋白需要量为33.94%.饲料蛋白水平对鱼体组成和肌肉成分研究表明,饲料蛋白水平为33.50%时鱼体蛋白含量最高,与蛋白水平23.64%组相比,差异极显著(P0.05).       

盐生杜氏藻甘油-3-磷酸脱氢酶的分离纯化及其特性的研究

利用ＰＥＧ分级,ＤＥＡＥ离子交换层析,ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ拟亲和层析,ＭｏｎｏＱ离子交换层析等手段,分离纯化盐生杜氏藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌａｓａｌｉｎａ（Ｄｕｎａｌ）Ｔｅｏｄ．）甘油三磷酸（Ｇ３Ｐ）脱氢酶（ＥＣ１．１．１．８）,得到比活为１２．６Ｕ／ｍｇ的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。４％～２０％非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为２７０ｋＤ,ＳＤＳＰＡＧＥ表明该酶只有一种分子量约为６５ｋＤ的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶催化磷酸二羟丙酮（ＤＨＡＰ）还原的最适ｐＨ值为７．５,催化Ｇ３Ｐ脱氢的最适ｐＨ值为１０。该酶对４个底物还原型辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ）,二磷酸吡啶核苷酸（ＤＨＡＰ）,辅酶Ⅰ（ＮＡＤ）,Ｇ３Ｐ的表观Ｋｍ值分别为６３μｍｏｌ／Ｌ,２７２μｍｏｌ／Ｌ,１．５３ｍｍｏｌ／Ｌ,６．５２ｍｍｏｌ／Ｌ。该酶在保存过程中易失活。ＮＡＤＨ能降低酶失活的速度,而ＮＡＤ则不然。低浓度ＮａＣｌ对酶略有保护作用,但高浓度ＮａＣｌ加快酶的失活,且浓度越高效应越明显。     

金樱子多糖的分离纯化及组成分析

对金樱子多糖的分离纯化方法作了探讨,筛选出较佳的工艺条件,通过紫外分光光度法,红外光谱以及气相色谱法分别对金樱子多糖纯品LP2的纯度,分子构型,单糖组成进行了分析;并通过了DEAE-纤维素（氯型）柱层析得一葡聚糖。     

人胰岛素原C肽的合成及专一性抗体制备

利用固相多肽合成中的Boc途径合成了人胰岛素原C肽 ,经TSK柱层析一步纯化 ,产物达HPLC及毛细管电泳均一 ,蛋白质序列分析和质谱分析符合理论值 ,总回收率高达 41 %。为了提高寡肽抗体的专一性 ,我们将丙烯酰化的C肽经催化聚合形成了以聚丙酰为骨架 ,C肽为侧链的聚合体 ,分子量约为 2 5kD。免疫新西兰大白兔 1月 ,获得专一性抗体。用酶联免疫吸附法测得抗血清滴度达 2 .5× 1 0 4 ,与BSA无交叉反应。聚丙酰C肽抗原是制备C肽抗体的一种新的尝试 ,而且也可能成为新的多肽工程疫苗之一 ,为其他传染性疾病多肽疫苗的研究提供新的途径     

黄土高原的一个VA菌根真菌新种：三红盾巨孢囊霉

在黄土高原中条山区发现一个盾巨孢囊霉属新种,其孢子无色透明,但球茎状连孢菌丝、芽盾及发芽菌丝均呈明显的红棕色,故命名为三红盾巨孢囊霉Scutellosporatrirubiginopa X．L. Pan & G. Y．Zhang 近似种 S. gilmorei Walker ＆ Sanders(1986)和S scutata Walker ＆ Diederichs(1989),在许多方面均不同于此新种。标本藏于山西省农科院棉花研究所。     

一种新的人泛肽交联酶的cDNA的克隆

ｐ５３可以同细胞内的许多种蛋白质形成复合物从而参与细胞周期调节、基因表达调控、细胞分化、细胞程序化死亡和抑制肿瘤的发生等各项生理过程。为了筛选与ｐ５３作用的蛋白质因子,利用酵母双杂交（ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ）系统,筛选了ＨｅＬａ细胞的ｃＤＮＡ文库。在１．５×１０６个转化子中筛选到６个阳性克隆。经ＤＮＡ全序列分析,结果表明５个阳性克隆中的ｃＤＮＡ序列编码产物均由１５８个氨基酸构成,分子量为１７ｋＤ的人泛肽交联酶。同源性比较表明,该泛肽交联酶与人的ＵＢＣ９（９７％）、线虫的ＵＢＣ（７６％）、裂殖酵母的ＨＵＳ５（６６％）、拟南芥菜的ＵＢＣ（６６％）和啤酒酵母的ＵＢＣ９（５６％）有较高的同源性。进行了１６种正常人组织和７种肿瘤细胞株的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析,结果显示：它在心脏、胎盘、胸腺、睾丸、卵巢、结肠和外周血白细胞中的表达较在肝脏、骨骼肌、肾脏、胰腺、脾脏、前列腺和小肠中为高,而在脑和肺中则检测不到表达。它在宫颈癌细胞株、乳腺癌细胞株、淋巴瘤细胞株和畸胎瘤细胞株中的表达较高,而在肺癌细胞株、肝癌细胞株和神经胶质瘤细胞株中则无明显表达。     

基于生物信息学分析从Streptomyces albofaciens JCM 4342中发现2,3-二羟基苯甲酸酯-L-丝氨酸脱水三聚体和二聚体天然产物

[背景] 铁是细菌生长的基本元素,而三价铁在自然水环境中几乎无法溶解。细菌已经进化出产生各种铁载体的能力,以促进铁的吸收。对于链霉菌,其特有的铁载体是去铁胺,同时它们也可以产生其他结构的铁载体,如ceolichelin、白霉素、肠杆菌素（enterobactin）和griseobactin。[目的] 揭示链霉菌中铁载体生物合成基因簇（Biosynthetic Gene Clusters,BGCs）的分布特点和基因簇特征,并探索其所合成铁载体的化合物结构。[方法] 利用生物信息学工具系统地分析308个具有全基因组序列信息的链霉菌中的铁载体生物合成基因簇,并用色谱和波谱方法分离和表征肠杆菌素相关天然产物。[结果] 发现Streptomyces albofaciens JCM 4342和其他少数菌株同时含有一个缺少2,3-二羟基苯甲酸（2,3-DHB）生物合成基因的孤立的肠杆菌素生物合成基因簇和另外一个推测可合成griseobactin的基因簇。从S.albofaciens JCM 4342发酵液中鉴定出4个肠杆菌素衍生的天然产物,包括链状2,3-二羟基苯甲酸酯-l-丝氨酸（2,3-DHBS）的三聚体和二聚体以及它们的脱水产物。[结论] 2个基因簇间存在一种特别的协同生物合成机制。推测是griseobactin基因簇负责合成2,3-DHB,而孤立的肠杆菌素基因簇编码的生物合成酶可夺取该底物,进而完成上述4种肠杆菌素衍生天然产物的生物合成。     

泰泽氏病原体抗原表位相关肽的初步筛选与鉴定

目的获得泰泽氏病原体抗原表位相关肽,用于实验动物血清中该病原体感染相关抗体的检测。方法选用泰泽氏病原体的四种单克隆抗体(M2、M3、M4、M5)作为配基,从噬菌体表面展示的随机7肽文库中筛选单抗识别的抗原表位,获得特异性噬菌体克隆;并采用ELISA、Western blot方法对其进行分析鉴定,获得阳性噬菌体克隆。结果获得阳性噬菌体克隆5个,其展示的融合蛋白能被泰泽氏病原体的免疫血清识别,ELISA检测A值的P/N为8.0～17.1;Western blot分析显示单一特异性条带,相对分子质量约为38×103。结论本研究获得的5个阳性克隆所表达的融合蛋白,为泰泽氏病原体抗原表位相关肽,可作为该病原体隐性感染血清学检测的候选抗原。