灰茶尺蛾核型多角体病毒某些生化特性的研究

灰茶尺蛾核型多角体病毒某些生化特性的研究李彦章,石正丽,陈棣华（中国科学院武汉病毒研究所,武汉４３００７１）关键词灰茶尺蛾,核型多角体病毒,结构多肽,限制性内切酶图谱灰茶尺蛾核型多角体病毒（Ｅｃｔｒｏｐｉｓｇｒｉｓｅｓｃｅｎｓｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈ...     

检测特异性抗体分泌细胞(ASCs)的固相酶联免疫斑(ELISPOT)技术的建立

ＥＬＩＳＰＯＴ技术是目前国外评价疫苗免疫原性和免疫应答机理研究中最常使用的方法。本文用自制的ＮＣ膜２４孔板为固相支持物,建立了检测小鼠脾细胞中特异性ＡＳＣｓ的ＥＬＩＳＰＯＴ技术,在检测方法的特异性、结果的稳定性上均取得了满意的效果。并对该方法的某些实验条件进行了摸索。     

双裂解法提取血清HBV DNA技术的建立

为进行ＰＣＲ实验建立了一种两步裂解血清ＨＢＶ提取其ＤＮＡ的方法。该法首先用ＳＤＳ及蛋白酶消化裂解病毒,随后再进行碱裂解,操作较酚提取法大为简化,而ＰＣＲ实验进行的两法的灵敏性比较,说明双裂解法至少不低于酚法。     

等位酶分析的遗传学基础（续）

在等位酶分析中,对酶谱的正确解释是获取遗传学资料的基础,酶谱作为酶基因的表现型,是由该种酶蛋白质的四级结构情况（亚基的数目）、在亚细胞分室中的分布（位点的数目）以及所分析样品的倍性和基因型的情况所决定的。术语“酶型”被建议用来记录和描述各种情况下酶谱的不同。在进行分子系统学研究中,如果直接把酶谱上带的数目的多少作为遗传多样性大小的指标,或把带的多少及迁移率的大小作为数量性状进行聚类和分枝分析将会得出非常错误的结论。     

硅藻土在青霉素G酰化酶提纯中的应用

国产硅藻土经氢氧化铵处理后可用于从发酰液中直接取青霉素Ｇ酰化酶,平均吸附量为９０Ｕ／ｇ。吸附的酶可用２２％硫酸铵－０．３ｍｏｌ／ＬＰＢＳ（ｐＨ８．０）溶液洗脱。平均比１８Ｕ／１８Ｕｍｇ蛋白（ＮＩＰＡＢ法）。硅藻土可反复使用。苯乙酰胺－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ树脂可对酶作进一步的纯化。     

人骨骼肌α辅肌动蛋白（α－actinin）的提取及其抗血清的制备和鉴定

本文提取人骨骼肌α辅肌动蛋白（α－ａｃｔｉｎｉｎ）是综合了文献报导有关提取兔肌α－ａｃｔｉｎｉｎ的和提取鸡胗α－ａｃｔｉｎｉｎ的方法,稍加修改而确定的。用Ｈａｓｓｅｌｂａｃｈ－Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ缓冲液提取骨骼肌中的肌球蛋白后,将残余物经硼酸－缓冲液提取、匀浆及高速离心去掉肌动蛋白和肌原纤维的其它成份,上清加硫酸铵至３０％,３５％饱合度所得的沉淀用２２０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－乙酸溶解、透析、离心后经ＤＥ－５２柱层析可得电泳纯。α－ａｃｔｉｎｉｎ。将人骨骼肌α－ａｃｔｉｎｉｎ纯化制品免疫了三只大耳白纯种家兔,两个多月后,三只兔子都产生免抗人骨骼肌α－ａｃｔｉｎｉｎ的特异抗血清,用双向免疫扩散法和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定,产生的抗体效价较高,用双扩散法测定效价为１：３２,用ＥＬＩＳＡ测定,用比率法判断结果,效价最高者为１：１００,０００左右,经免疫电镜观察结果证实,上述抗血清可以满足进一步实验要求。     

菜心溶菌酶的提纯及酶学性质

菜心（ＢｒａｓｓｉｃａｃａｍｐｅｓｔｒｉｓＬ．ｓｓｐ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒ．ｕｔｉｌｉｓ）叶子高速捣碎后,滤液经酸碱处理,硫酸铵分步沉淀,凝胶柱层析等步骤分离纯化溶菌酶,酶比活力达３４１４．６Ｕ／ｍｇ,纯化倍数为１９７．４。菜心溶菌酶在较宽的温度或ｐＨ值范围均有活性,最适温度为６０℃,最适ｐＨ值为５．８,底物Ｋｍ值为８７μｇ／ｍＬ。该酶对热和酸碱的稳定性较高,巯基和酪氨酸残基不是该酶活性中心的必需基团。     

肝细胞的异质性：葡萄糖和酮体在大鼠肝脏的代谢

用大鼠肝脏门静脉或肝静脉周围的肝细胞来研究葡萄糖和酮体生成的区域分布。肝细胞通过毛地黄皂苷－胶原酶灌流技术分离。门静脉周围肝细胞的γ谷氨酰转肽酶的活性比肝静脉周围肝细胞高２．４倍;而谷氨酰胺合成酶的活性则相反,肝静脉周围肝细胞高出５６倍。门静脉周围肝细胞的内源性葡萄糖合成比肝静脉周围肝细胞高１．５７倍。给予刺激葡萄糖异生的底物,门静脉周围肝细胞的葡萄糖合成则增加１．７－２．１倍。肝静脉周围肝细胞的内源性酮体生成比门静脉周围肝细胞高１．３倍。给予能明显刺激酮体生成的辛酸盐,肝静脉周围肝细胞的酮体生成仅略为增加。我们的结果证实,在基础和刺激的条件下,葡萄糖的异生在门静脉周围肝细胞中优先,而酮体生成仅在肝静脉周围肝细胞占微弱的优势。     

大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因的cDNA克隆及序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ方法快速克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）的ｃＤＮＡ,将此包括编码全长ＮＳＥ４３３个氨基醚的ＤＮＡ片段重组入ｐＵＣ质粒,并用ＰＣＲ方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Ｗｉｓｔａｒ大鼠与Ｆｏｒｓｓ－Ｐｅｔｔｅｒ报导的ＳＤ大鼠ＮＳＥ基因顺序,有两外单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变。同时还对ＲＮＡ的提取及长片段ＤＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ扩增进行了方法学的探讨。