用重组大肠杆菌JM109(pKST11)转化苯生产顺-1,2-二羟基-3,5-环己二烯

顺-1,2-二羟基-3,5-环己二烯（简称DHCD）是航天业、电子工业、医药业以及精细化工业上重要的手性化合物。利用重组E. coli JM109 (pKST11),采用适时监测发酵过程中全细胞甲苯双加氧酶（Toluene dioxygenase,TDO）活性的方法,研究了发酵生产DHCD工艺中的重要影响因子IPTG以及底物苯的供给方式对DHCD产量的影响。研究结果表明：（1）发酵初期利用IPTG诱导TDO的表达,不利于细胞生长,在对数生长中期（6或8h）,采用0.5mmol/L IPTG即可诱导出TDO的最高表达。（2）发酵液中的苯对全细胞甲苯双加氧酶(TDO)的活性有抑制作用,而利用液体石蜡作为缓释剂进行两相法发酵则降低了苯的毒害,明显提高了DHCD的产量。当采用传统的通气供苯方法,DHCD的产量仅有75 g/L;批式添加液体石蜡与苯的混溶物使DHCD的产量提高到226 g/L,是通气供苯法的3倍;而采用流加的方式添加液体石蜡与苯的混溶物使DHCD的产量进一步提高到368 g/L,是通气供苯法的5倍。证明通过发酵工艺的优化可以解决苯的毒害与苯作为反应底物在水相中需要有一定浓度之间的矛盾,获得较好的转化结果。     

生防菌Ⅲ-61抗真菌活性产物的摇瓶发酵

对生防链霉菌Ⅲ-61产生抗真菌活性物质的摇瓶发酵工艺进行了研究。利用正交试验设计优化了发酵培养基组分,其最适配方为黄豆粉1．5％,蛋白胨0．3％,蔗糖1．0％,淀粉1．3％,磷酸二氢钾0．02％,硫酸镁0．025％,氯化钠0．5％,配咸水溶液,调pH至7～7．4,加碳酸钙1％。通过单因素试验,筛选获得了最优培养条件组合：液体种龄24h,接种量5％～10％,500mL摇瓶培养基装量为80mL,摇床转速240r／min,培养温度31℃,发酵周期96～120h。此优化的发酵培养基与发酵条件的组合昕得菌株Ⅲ-61发酵液对主要靶标黄瓜灰霉病菌的抑菌圈直径达49．5mm,较优化前提高了45．59％。     

水稻体细胞培养中胚性细胞出现与IAA的关系

水稻体细胞培养中胚性细胞出现与ＩＡＡ的关系陈以峰１周燮２汤日圣２张金渝２梅传生１（南京农业大学农学系南京２１００９５）２（江苏省农业科学院农业生物遗传生理研究所南京２１００１４）关键词水稻,胚性细胞,ＩＡＡ,２,４二氯苯氧乙酸,２,３,５三碘...     

三台核桃结实特性研究

选择标准株 70株 ,其中有草果核桃 ( cv.Zaogu)、大油笼核桃 ( cv.Dayoulong)、早熟核桃 ( cv.Zaoshu)、小油笼核桃 ( cv. Xiaoyoulong)、荚绵核桃 ( cv. Jiamian) 5个品种。据对不同品种、海拔、年龄的结实特性研究 ,结果表明 :草果核桃是优良的栽培品种 ,早熟核桃结实性状表现最差 ,果枝粗是影响座果率最重要的因素。     

精氨酸82和精氨酸83在光驱质子泵细菌视紫红质和古紫质-4中的功能对比研究

古紫质-4(Archaerhodopsin-4, aR4)是一种存在于嗜盐菌Halobacterium species XZ515细胞膜上含有类胡萝卜素发色团菌红素(Bacterioruberin)的光敏受体蛋白,与细菌视紫红质(Bacteriorhodopsin, bR)具有相似的三聚结构和光驱质子泵功能。尽管二者均为外向质子泵,但aR4表现为与bR不同的先摄取后释放的质子传输时序。位于bR胞外半通道的精氨酸82(Arginine 82, R82)充当着视黄醛键合区五边形氢键网络与质子释放簇(proton release cluster, PRC)之间的桥梁,不仅向胞外传递D85的质子化信息,同时调控PRC质子的释放和再质子化。R83作为aR4中的同源等位残基,其侧链取向与bR中的R82有所不同,而这一差异是否与其质子释放时序的不同有关目前尚未见报道。为此,本研究采用定点突变技术、原位紫外-可见光吸收光谱、闪光动力学光谱、酸碱滴定等技术手段,对比分析R83和R82在aR4和bR中的差异性作用。研究表明,R83和R82在aR4和bR中均起到质子受体与质子释放簇之间的“桥梁”作用,但是R...     

鲈-蟹混养模式下不同饵料对大口黑鲈生长和肠道菌群的影响

为研究鲈-蟹混养模式下冰鲜鱼(HB)、配合饲料(HS)和混合投喂(HH)等3种饵料投喂对大口黑鲈(Micropterus salmoides)生长和肠道菌群影响,采用16S rRNA基因高通量测序技术,分析了不同饵料对大口黑鲈生长性能、肠道菌群结构和多样性的影响。结果表明,生长性能指标方面,配合饲料组试验鱼的末均重、体长和特定生长率均显著低于冰鲜鱼组和混合投喂组的(P<0.05),混合投喂组最后养成规格最大,生长速度也最快,但与冰鲜鱼组差异不显著(P>0.05)。多样性分析结果显示,配合饲料的投喂降低了大口黑鲈肠道菌群的丰富度和多样性。在肠道菌群结构方面,冰鲜鱼组的优势菌属主要为克雷伯氏菌属(Klebsiella)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、罗姆布茨菌属(Romboutsia)及发光杆菌属(Photobacterium),配合饲料组优势菌属为罗姆布茨菌(Romboutsia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、分枝杆菌属(Mycobacterium)及醋杆菌属(Cetobacterium),而混合投喂组优势菌属则是克雷伯氏菌属(Klebsiella)、分...     

苏云金芽孢杆菌S1478-1分离株的特性鉴定及cry1Ac同源基因克隆

本研究对从海南岛尖峰岭热带雨林自然保护区的土壤样品中分离出的Bt菌株S1478-1进行了特性鉴定,研究表明S1478-1分离株菌落形态和生长特征和Bt参照菌株HD73极其相似.16S rDNA序列分析表明,S1478-1分离株与其它B.thuringiensis、B.cereus和B.anthracis的16S rDNA序列相似性达到99%.分离株能产菱形伴胞晶体,SDS-PAGE蛋白电泳分析表明,菌株在生长后期,形成芽孢同时分泌130 kD大小的晶体蛋白.生物测定表明S1478-1分离株对小菜蛾具有很高的毒杀活性,LC50卯值高达5.159 ×108cfu/mL.初步显示S1478-1分离株可作为防治鳞翅目害虫的生物农药菌株.利用PCR-RFLP方法鉴定S1478-1分离株含有cry1Ac同源基因,以PCR粘性端克隆方法扩增全长基因,序列测定表明该基因ORF为3 537bp,编码1178个氨基酸,推定的编码蛋白分子量为133.3 kD,与其它cry1Ac基因序列最高达到99%同源,因此,该基因可作为杀虫工程菌及培育转基因抗虫作物的候选基因.     

血清VEGF、HPSE、HIF-1α与视网膜中央静脉阻塞患者雷珠单抗治疗后视力预后的关系

摘要 目的：研究血清血管内皮生长因子（VEGF）、乙酰肝素酶（HPSE）、低氧诱导因子1α（HIF-1α）与视网膜中央静脉阻塞（CRVO）患者雷珠单抗治疗后视力预后的关系。方法：选取2020年1月-2022年8月贵州医科大学附属医院眼科收治的145例CRVO患者,根据雷珠单抗治疗后视力预后状况分为预后良好组（n=104）和预后不良组（n=41）。比较预后良好组和预后不良组临床资料及血清VEGF、HPSE、HIF-1α水平。采用多因素Logistic回归模型分析CRVO患者雷珠单抗治疗后视力预后的影响因素,采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清VEGF、HPSE、HIF-1α对CRVO患者雷珠单抗治疗后视力预后的预测价值。结果：与预后良好组相比,预后不良组的年龄、缺血型CRVO占比、合并高血压占比、合并高脂血症占比、持续黄斑水肿占比及血清VEGF、HPSE、HIF-1α水平更高,同时CRVO病程更长,初诊最佳矫正视力更低（均P＜0.05）;多因素Logistic回归分析显示初诊最佳矫正视力低、持续黄斑水肿、缺血型CRVO及血清VEGF、HPSE、HIF-1α升高是CRVO患者雷珠单抗治疗后视力预后不良的危险因素（P＜0.05）;血清VEGF、HPSE、HIF-1α单独和联合预测CRVO患者雷珠单抗治疗后视力预后的曲线下面积（AUC）分别为0.726、0.777、0.836、0.891,联合预测的效能显著优于单项检测（P＜0.05）。结论：CRVO患者血清VEGF、HPSE、HIF-1α水平越高,雷珠单抗治疗后视力预后状况越差。三项指标联合预测CRVO患者雷珠单抗治疗后视力预后的价值较高,有望作为CRVO预后评估指标。     

基于NF-κB/HIF-1α信号通路探讨慢性脑低灌注与神经炎症的相关性研究

摘要 目的：探究NF-κB/HIF-1α信号通路在慢性脑低灌注引起神经炎症过程中的作用及机制。方法：采用单侧颈总动脉永久性结扎（Unilateral Common Carotid Artery Occlusion,UCCAO）方法建立慢性脑低灌注小鼠模型,随机分为3大组,每组50只,分别为正常对照组,假手术组和UCCAO组,每大组按1 d、3 d、7 d、14 d、21 d分为5小组。采用Morris水迷宫评定学习记忆能力。采用RT-PCR法检测小鼠脑组织HIF-1α mRNA和NF-κB p65 mRNA相对表达水平。采用ElISA 方法检测小鼠脑组织炎症指标TNF-α、IL-1β。结果：与假手术组比较,UCCAO组学习记忆明显下降（P<0.01）。与假手术组比较,UCCAO组小鼠脑组织HIF-1α mRNA和NF-κB p65 mRNA相对表达水平明显增加（P<0.01）,HIF-1α mRNA和NF-κB p65 mRNA相对表达水平均于术后3 d开始明显增加,7 d出现高峰,且21 d后相对表达水平仍然明显增加（P<0.01）。与假手术组比较,UCCAO组小鼠脑组织匀浆液中TNF-α和IL-1β的含量明显增加（P<0.01）。结论：1.慢性持续性脑低灌注可导致小鼠出现进行性认知功能障碍。2.CCH后缺血缺氧既可以激活HIF-1α信号通路,又是NF-κB信号转导途径的刺激因子,这两条信号通路存在着诸多交叉,NF-κB活化对HIF-1α调控和炎症反应的形成正反馈。     

血根碱通过NF-κB信号通路调控牙周膜干细胞成骨分化

摘要 目的：探究血根碱（SAN）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）处理的人牙周膜干细胞（hPDLSCs）成骨分化的影响及机制。方法：将hPDLSCs分为6组：Control组、TNF-α组、0.1SAN组、1SAN组、10SAN组和100SAN组,所有hPDLSCs均用成骨诱导培养液培养。除Control组外,其他组细胞培养液中均添加10 ng/mL的TNF-α。0.1SAN组、1SAN组、10SAN组和100SAN组细胞培养液中分别添加0、0.1、1、10和100 μmol/L的血根碱。各组hPDLSCs均在37℃、5% CO₂条件下培养21 d。通过可见光比色法检测碱性磷酸酶（ALP）活性。通过茜素红染色观察钙化结节形成,并统计OD_{562 nm} （代表钙化结节形成量）。通过qRT-PCR检测Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）、osterix（OSX）、牙骨质附着蛋白（CAP）、Smad4转录水平。通过Western blot检测核因子-κB（NF-κB）p65磷酸化水平。结果：与Control组比较,TNF-α组细胞的相对ALP活性降低和钙化结节形成量以及RUNX2、OCN、OSX、CAP和Smad4的mRNA相对表达量降低（P<0.05）,p-NF-κB p65/NF-κB p65升高（P<0.05）。与TNF-α组比较,1SAN组、10SAN组和100SAN组的相对ALP活性和钙化结节形成量以及RUNX2、OCN、OSX、CAP和Smad4的mRNA相对表达量升高（P<0.05）,p-NF-κB p65/NF-κB p65降低（P<0.05）。结论：血根碱可促进TNF-α处理的hPDLSCs的成骨分化,其机制可能与抑制NF-κB的激活有关,血根碱可能是促进炎性微环境中hPDLSCs成骨分化的候选药物。