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951.
目的:介绍一种简便、有效的定点突变技术。方法:根据突变位点附近的DNA序列推导出氨基酸序列,再以此氨基酸序列进行逆翻译,这样在不改变氨基酸序列的前提下可以得到数目巨大的隐性突变体(silent mutants),这些突变体中包含大量的限制性内切酶位点,选择合适的酶切位点设计引物用PCR技术扩增两侧DNA片段,然后以相应酶切融合这两个片段即可完成定点突变。结果:用该方法成功地在人工合成的含有缺失的可溶性组织因子基因的472位插入C,T两个碱基,校正了阅读框架,获得了预期的目的基因。结论:该方法简便、有效, 避免了多轮PCR和合成长引物导致突变的可能性,这种改进的PCR 定点诱变技术我们称之为“设计限制酶辅助突变”(Designed Restriction Enzyme Assisted Mutagenesis, DREAM)。此技术简单方便, 诱变的成功率高, 适于实验室常规应用。 相似文献
952.
表皮生长因子受体调控的人鼻咽癌细胞系CNE2分泌蛋白质的筛选 总被引:3,自引:0,他引:3
为筛选表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)调控的鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)细胞的分泌蛋白质,揭示EGFR在NPC发病中的作用机制,采用无血清培养法培养NPC细胞系CNE2,并用转化生长因子(transforminggrowthfactor-α,TGF-α)刺激CNE2细胞24h作为实验组,对照组CNE2细胞不用TGF-α刺激.超滤法脱盐并浓缩两组细胞的培养上清制备分泌蛋白,采用双向凝胶电泳技术(two-dimensionalelectrophoresis,2-DE)分离两组细胞的分泌蛋白,PDquest图像分析软件识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白.建立了实验组和对照组CNE2细胞分泌蛋白的2-DE图谱,图像分析识别了22个差异蛋白质点,质谱鉴定了8个非冗余蛋白质,其功能涉及肿瘤细胞侵袭转移、细胞凋亡和增殖,为进一步揭示EGFR在NPC发病中的作用及其机制奠定了基础. 相似文献
953.
维持基因组稳定是生物生存的基础。碱基切除修复(base excision repair,BER)是修复损伤DNA、维持基因组稳定的主要方式之一。碱基切除修复对结核分枝杆菌等胞内致病菌尤其重要。fpg编码碱基切除修复的关键酶。本文通过比较分枝杆菌的基因组,发现结核菌较其他非致病分枝杆菌具有更多的碱基切除修复基因。这提示碱基切除修复可能对结核菌在宿主体内存活和致病至关重要。这条途径也许是新结核病药物研发的重要靶标。 相似文献
954.
【背景】外来人侵植物紫茎泽兰自然演化出耐高温种群,其适应机制与各种生理代谢有关。【方法】本文从超微细胞化学水平,对紫茎泽兰抗高温种群、敏感种群ATP酶活性定位,明确其在高温适应性中的作用,试图阐明该草的生态适应机制。【结果】正常情况下,紫茎泽兰ATP酶主要定位于细胞壁及细胞间隙周围的细胞壁表面;经40℃高温处理后,在不同的处理时间下,抗性、敏感种群之间ATP酶的活性表现出明显差异,其中以处理12h时差异最大,具体表现为抗高温种群的ATP酶活性明显高于敏感种群,ATP酶的定位点除细胞壁外,在细胞膜上也呈现大量的分布,而敏感种群在处理12h时的酶活性明显降低,只在细胞壁上有零星的分布。处理24h时,敏感种群叶片已完全萎蔫,细胞结构毁坏,细胞膜破损;而抗高温种群叶片仍然完好,细胞膜上仍有ATP酶分布。【结论与意义】经40℃高温处理后,紫茎泽兰抗高温种群ATP酶活性明显高于敏感种群,初步认为紫茎泽兰对高温的适应性与ATP酶活性相关。本研究为进一步阐明与紫茎泽兰适应性相关的入侵机理提供了资料。 相似文献
955.
Quox—1基因同源序列在人胚早期发育中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
以Quox-1基因的特异性片段b2为探针与人基因DNA作Southern杂交,结果显示,人基因组中存在Quox-1基因的同源序列。结果表明其表达有明显的时间和空间特异性。胚龄30天以前,Quox-1基因的同源序列在人胚包神经管等许多部位表达,30天以后表达部位局限于脊索、心肌细胞、生机节、消化道上皮及周皮等处。 相似文献
956.
醋酸铜诱导家兔排卵前LH峰过程中下丘脑β—阿片受体密度的变化 总被引:1,自引:0,他引:1
下丘脑β-内啡肽活动减弱是排卵前GnRH/LH峰形成的重要因素,为了解下丘脑μ-阿片受体是否参与了这一过程,本文利用放射受体自显影结合计算机图像处理,观察醋酸铜诱导家兔排卵前LH峰过程中下丘脑μ-受体密度变化。给新西兰雌兔注射1%醋酸铜0.9ml或生理盐水(对照组),于注射后不同时间处死,观察下丘脑内侧基底核及视前内侧区的μ-受体密度变化,结果表明:醋酸铜组给药后1hMPO部位μ-受体密度明显增加 相似文献
957.
血栓溶解酶产生菌及其培养条件的研究 总被引:11,自引:1,他引:11
通过对根霉12号发酵液的分析及发酵条件的研究,发现其发酵液中含有能溶解血栓的物质,但不能分解血细胞。它在麸皮胰蛋白胨培养基(pH5.1)上30℃振荡培养48~60h,pH值达到7.4左右时产生血栓溶解酶的活力最高。 相似文献
958.
铝对大白鼠海马所致损害的实验研究 总被引:5,自引:0,他引:5
为探讨铝对海马的损害,用30只健康大白鼠,体重200~300克,分为A组(正常对照)10只,B组(低铝组饲料中加500mg/kgAlCl3)10只,C组(高铝组饲料中加2500mg/kg/AlCl3)10只。分别饲养12个月后,分组断头取脑海马,按组织化学及酶组织化学常规做“铝定性”反应,琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、硫胺素焦磷酸酶(TPPase)、镁激活三磷酸腺苷酶(Mg2+-ATPase)、胆碱酯酶(ChE)测定。按电镜常规做超微结构的观察。结果提示:C组,海马SDH、Mg2+-ATPase、ChE活性明显减弱(由强阳性()下降为阳性(+),铝反应增强(在海马的神经细胞内强阳性();同时海马神经元内线粒体嵴断裂、肿胀、空泡样变,神经纤维髓鞘变性(如不规则卷曲、松散)。说明铝对海马的功能与结构均有损害 相似文献
959.
用ElISA研究稻田节肢类捕食者对稻飞虱的捕食作用 总被引:14,自引:4,他引:14
应用酶联免疫吸附试验(ELlSA)来研究捕食作用能较准确地评价捕食性天敌对害虫的控制作用。ELlSA检测表明,不同种类的捕食性天敌对稻飞虱的捕食作用有较大差别,其中以优势种食虫沟瘤蛛和拟水狼蛛的捕食作用最大,阳性反应率与稻飞虱的种群密度有一定的相关关系,但在稻飞虱密度较低的情况下也表现出较高的阳性反应率。 相似文献
960.
兔脊髓α受体对血量扩张引起肾交感神经活动抑制和促钠排泄的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
在窦主动脉去神经麻醉兔观察阻断脊髓α受体对血量扩张引起肾交感神经活动(RSNA)抑制和促钠排泄反应的影响。兔脊髓蛛网膜下腔注射a肾上腺素能受体阻断剂酚妥拉明与人工脑脊液后,血量扩张引起RSNA抑制分别为(-25.4±5.4)%与(-42.5±5.2)%(P<0.05);兔脊髓蛛网膜下腔注射α1受体阻断剂哌唑嗪与人工脑脊液后血量扩张引起RSNA抑制分别为(-29.3±6.1)%与(-42.5±5.2)%(P<005)。结果表明,阻断脊髓α受体或α1受体均可减弱血量扩张引起RSNA抑制。脊髓注射哌唑嗪后血量扩张引起促钠排泄与利尿反应也显著减弱(P<005)。 相似文献