与胎儿珠蛋白基因持续表达有关的(A_γδβ)°—地贫纯合子及杂合子的分子鉴别

我们分子鉴别了一个缺失型中国(A_γδβ)°-地贫家系。先证者为这一缺失的纯合子,具有中度贫血症状。家系的另五个成员均为这一缺失的杂合子,其胎儿血红蛋白(HbF)为16—21％,接近或达到HPFH杂合子的HbF水平,并且几乎不表现贫血症状。限制性内切酶图谱分析证明了β-珠蛋白基因簇内的DNA顺序缺失,缺失的5′端点位于Aγ基因IVSⅡ内,3′端点在β-珠蛋白基因下游区远端,距HPFH-2的3′缺失端点上游区约11kb。缺失的总长度约为80kb。本文讨论了这一缺失导致胎儿血红蛋白在成人中持续活跃表达的可能机制。     

用直接测定基因组DNA序列的方法检测β-地中海贫血基因突变

本文报道一种结合聚合酶链反应(PCR)技术直接测定基因组DNA中单考贝基因片段序列的方法,以及利用这种方法测定两例β-地贫纯合子的β珠蛋白基因序到结果。测定出基因点突变,一例为编码子17(A→T)突变纯合子,另一例为编码子69(G→A)突变纯合子。针对上述两个点突变合成寡核苷酸片段,末端标记~(82)P后为探针进行斑点杂交的结果与测序结果一致。     

一个α,β地中海贫血复合家系β珠蛋白基因的进一步研究

 前文~[1]曾报道广西一个α,β地中海贫血复合家系的血红蛋白组成及α珠蛋白基因分析结果,并讨论了各成员可能的β珠蛋白基因结构情况。本文利用先进的PCR即基因扩增技术,结合特异寡核苷酸探针斑点杂交及扩增后直接测定DNA序列的技术,进一步研究并彻底搞请了该家系各成员的β珠蛋白基因结构情况。结果显示:母亲及两个弟弟都是编码子41—42TTCT四个碱基缺失造成框架位移所致β地中海贫血的杂合子。父亲与先证者的β基因均属正常。前三个成员均为α地贫复合β地贫,其α与β珠蛋白链合成的不均衡状态得到改善,贫血症状也明显轻。     

表达β-珠蛋白基因的安全性慢病毒载体的优化

目的:慢病毒载体(lentiviral vector,LVV)是一种有效的基因治疗导入系统。拟用已研发的携带人的β-珠蛋白基因自删除慢病毒载体,优化其表达有效性和提高其病毒颗粒数。方法:比较三款不同的启动子预测软件的分析结果,分别构建三种不同长度启动子的表达β-珠蛋白基因(β-globin)的LVV,并对其Ⅱ号内含子进行部分删减;用经优化的LVV转导β-地中海贫血(β-地贫)的小鼠诱导性多能性干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)后,用此iPSC制备嵌合体小鼠模型;经RT-PCR、血涂片瑞氏吉姆萨染色等观察分析其功能性代偿的潜能。研究结果:经优化后的自删除慢病毒载体病毒对其病毒颗粒数的滴度影响不大(2.3×10~(11)LPs/ml),可在嵌合体小鼠模型体内检测到正常人β-珠蛋白基因的功能性表达。结论:优化了表达人β-珠蛋白基因的自删除LVV。     

粒系集落刺激因子联合促红细胞生成素治疗慢粒白血病伴贫血的疗效及对营养状况的影响

目的：探讨粒系集落刺激因子联合促红细胞生成素治疗慢性粒细胞白血病（以下简称慢粒白血病）伴贫血的疗效及对营养状况的影响。方法：选取我院在2019年3月—2020年6月确诊并治疗的慢粒白血病伴贫血患者82例,依据治疗方式分成两组,对照组应用促红细胞生成素（rHuEPO）,研究组联合应用粒系集落刺激因子（G-CSF）。观察比较两组的疗效;两组治疗前、治疗后不同时间节点下的营养状况量化评分水平差异;两组治疗前、治疗后的相关实验室指标：红细胞（RBC）计数、红细胞比容（Hct）及血红蛋白（HGB）水平变化差异。结果：研究组缓解比率水平高于对照组（P＜0.05）,提示研究组疗效更高。研究组治疗后不同时间节点下的营养状况量化评分水平均比对照组更高（P均＜0.05）。治疗后研究组相关实验室指标：RBC、Hct及HGB水平均比对照组更高（P均＜0.05）。结论：给予慢粒白血病患者联合使用G-CSF及rHuEPO治疗,可显著提高患者的临床疗效,提高RBC、Hct、HGB水平,改善患者的营养状况。     

利用单基因组扩增法对马传染性贫血病毒疫苗株异质性的分析

前期研究发现,马传染性贫血病毒（Equine infectious anemia virus EIAV）中国弱毒疫苗株并非单一病毒,而是由多种准种（quasispecies）组成的种群。阐明该疫苗株的具体构成,对于确定优势疫苗株和分析其在体内的进化具有重要意义。本研究比较了传统RNA病毒测序法（即bulk PCR）和单基因组扩增法（Single-genome Amplification, SGA）在扩增EIAV疫苗株囊膜表面蛋白gp90基因 V3~V5区序列上的差异。结果发现,利用SGA法和bulk PCR法获得的序列在组内差异率分别为1.84%和1.88%。进一步序列比较发现,SGA法扩增的序列中除了含有与bulk PCR法中同源性较高的序列外,还存在bulk PCR法未检出的含强毒株LN40特异性位点,以及单个氨基酸缺失的序列。上述序列的存在为该疫苗株“多克隆构成”假说提供了佐证。此外,在对抽样偏差分析中发现,由于疫苗株中各种病毒准种在量上的差异,使得传统bulk PCR法不能有效的扩增组成比例较低的病毒准种,而导致测得的序列组成不能完全代表实际情况。SGA法通过对单基因组分的扩增和测序,可避免bulk PCR法的以上缺陷,在分析以准种形式存在的RNA病毒序列方面具有独特的优势。     

地中海贫血的基因诊断

问:我在南方某市妇幼保健院做地中海贫血基因诊断检查,结果如下:α地中海贫血-1杂合子,基因型:--SEA/αα。(1)医生说是患有α型地中海贫血,     

再障患者血清IL-2、TNF-α、IFN-γ和外周血T淋巴细胞亚群变化研究

目的:研究再生障碍性贫血(AA)患者患病过程中血清IL-2、IL-8、TNF-α、IFN-γ和外周血T淋巴细胞亚群变化与疾病严重程度相关性。方法:选取我院经酶联免疫吸附法(ELISA)筛选的AA患者40例,其中急性患者(AAA)20例,慢性患者(CAA)20例,随机抽取20例健康人,对比监测60例目标病例的血清IL-2、IL-8、TNF-α、IFN-γ和外周血T淋巴细胞亚群变化。结果:AA组患者中AAA的各项细胞因子CD3+、CD4+、CD4+/CD8+检测结果较CAA患者波动较大。AA患者的血清IL-2、IL-8、TNF-α、IFN-γ含量明显高于健康人员平均值。AA患者的CD4+、CD4+/CD8+低于含量明显低于健康人员平均值,CD3+变化差异无统计学意义,AA组CD8+显著高于对照组,差异有统计学意义,P<0.05。结论:再障患者发病过程中同时存在细胞免疫功能障碍和体液免疫机制异常两种情况,且变化规律与疾病轻重缓急程度正相关。     

The correlation between iron homeostasis and telomere maintenance

Eukaryotic organisms require iron to sustain genome stability, cell proliferation and development. Chromosomes contain telomeres to ensure complete replications and avoid fusions. Numerous evidences reveal that iron can act directly or indirectly on telomere maintenance. In human, disruption of systemic or cellular iron homeostasis is reportedly to cause serious health problems such as iron overload （hereditary hemochromatosis）, iron deficiency anemia, carcinogenesis and acceleration of aging process. These processes commonly associate with abnormal telomere length. Additionally, cells containing mutations in iron-containing proteins such as DNA polymerases （Pola, g, and ~）, regulator of telomere length 1 （RTEL1） and the small subunit of ribonucleotide reductases （RNRs） have abnormal telomere length. This review briefly summarizes current understandings on iron homeostasis and telomere maintenance in cancer and aging process, followed by discussing their direct and indirect correlation, and the possible regulatory mechanisms.     

营养干预对儿童缺铁性贫血症状治疗与预防的研究

目的：探究营养干预对儿童群体中常见的缺铁性贫血症状的治疗及预防效果。方法：对我院2018年12月-2020年1月检查出的缺铁性贫血儿童80例作为研究对象,按照简单随机分组的形式分为对照组（40例）和营养干预组（40例）,两组患者均采用常规的药物治疗,营养干预组患儿在常规药物治疗的基础上加以营养干预,治疗时长为3个月,观察统计干预后两组患儿的恢复情况以及干预前后红细胞计数、血红蛋白等生化指标的差异。结果：营养干预组患病率明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,且营养干预组患儿各项生化指标优于对照组,具有显著性差异（P<0.05）。结论：营养干预可以有效地降低儿童缺铁性贫血患病率,具有临床推广意义。