春小麦体细胞无性系变异的研究

利用RAPD技术检测春小麦愈伤组织和再生植株在离体培养过程中产生的变异,对培养不同时期的愈伤组织、再生植株检测结果表明,在小麦离体培养愈伤组织和再生植株中,RAPD谱带发生变化,表明发生了体细胞无性系分子水平变异．且具有明显的规律性和变异特点：杂交B代幼穗培养获得的愈伤组织发生变异的频率高于遗传稳定品种幼穗培养获得的愈伤组织。在愈伤组织培养75d时,在RAPD电泳图谱反映出高频率的亲本谱带缺失和非亲本谱带增加。不同基因型或外植体诱导的愈伤组织和再生植株中出现了相同的变异。与愈伤组织相比．再生植株中检测到的变异频率更高。不同外植体离体培养获得的再生植株,即使表型上没有观察到变异,但从RAPD图谱上却反映出变异的发生。表明RAPD技术可以快建方便地检测组织培养每个阶段出现的DNA水平变异。     

一串红胚胎发育过程中多胺含量的变化

选取发育正常和败育一串红(Saliva splendens)5个不同时期的胚胎,分别提取、测定多胺(精胺、亚精胺、腐胺与尸胺)的含量变化.通过比较一串红胚胎发育不同阶段多胺物质的变化规律,探讨多胺在一串红胚胎发育中的生理作用.结果表明,一串红的胚胎败育和胚珠中较低的多胺含量及其在发育进程中较大的降幅有关;在盛花期,胚胎发育的关键时期,正常胚珠中哑精胺的含量有一个明显的峰值,而败育的胚珠中则无,这表明亚精胺含量变化在胚胎发育中起关键调节作用.     

猪轮状病毒vp4基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

本研究扩增猪轮状病毒中国分离株JL94株VP4蛋白主要抗原编码区基因(1-756 bp),将测序结果与国外分离株进行比较;将该基因片段同载体pMel BacA连接后,与杆状病毒DNA共转染入昆虫细胞Sf9,经蚀斑筛选纯化重组病毒并再感染Sf9细胞获得vp4基因的表达,对表达的VP4蛋白进行Western blot分析和血清中和抗体试验.结果表明JL94株VP4主要抗原编码区基因与国外分离株CRW-8株、Gottfried株该基因片段氨基酸同源性分别为96.43%和67%,说明JL94株与CRW-8株属同一VP4血清型,而与Gottfried株属不同血清型.JL94株VP4主要抗原编码区氨基酸最大变异处位于aa81-aa207.vp4基因在昆虫细胞中表达量占细胞总蛋白的20%,Western Blot证实表达蛋白有良好的生物学活性.所表达的蛋白免疫小鼠产生中和抗体,阻断JL94在MA104细胞上引起的细胞病变.     

His/GST-HDAC1在大肠杆菌中表达的研究

目的:对His/GST-HDAC1在大肠杆菌BL-21中的表达进行研究。方法:HDAC1的完整基因片断被克隆到pColdⅠ载体和pGEX载体上,并在其N末端分别联有His和GST;采用大肠杆菌BL21对HDAC1进行表达;采用亲和色谱对HDAC1进行纯化;用SDS-PAGE和蛋白质印迹来验证表达和纯化效果;对HDAC1活性进行测定。结果:多数HDAC1存在于大肠杆菌BL-21细胞裂解液的沉淀组分和纯化过程中的未结合组分中,小部分HDAC1可从细胞裂解液的上清液中得以纯化,但未显现出酶活性。用FPLC对HDAC1进行进一步分离,结果表明,HDAC1发生了分子聚集,使得它们的分子量大于正常分子量。结论:活性His/GST-HDAC1不能用大肠杆菌BL21成功表达。     

小麦HMW-GS 12基因克隆及植物表达载体构建

目的:为了利用基因遗传转化改良小麦品质,采用聚合酶链式反应(PCR)技术。方法:从小麦品种东农7742基因组DNA中扩增并克隆了小麦高分子量谷蛋白12亚基基因(HMW-GS 12)。结果:序列分析结果表明,该基因全长1 980bp,其核苷酸顺序和推导的氨基酸顺序与已发表的序列相比,同源性分别为99.5%和99.7%。经过基因拼接,分别构建了胚乳特异性表达和组成型表达的高分子量谷蛋白12亚基基因的两个植物表达载体pDNPPBIHG和pUbPBIHG。     

大豆深加工产品两种荧光定量PCR检测方法的比较研究

以内源基因Lectin作为内参照,根据RR大豆中外源基因CP4-EPSPS和内源基因Lectin设计TaqMan和SYBR GreenⅠ引物和荧光探针,使用定量PCR仪对大豆深加工产品中RR大豆的含量使用两种FQ-PCR方法进行定量检测,建立了RR大豆标准品CP4-EPSPS和Lectin之间的△Ct与样品中RR大豆含量百分比之间的校正曲线和线性回归方程,并对5种未知大豆深加工样品进行检测,同时比较二者的检测结果。结果表明,说明TaqMan和SYBR GreenⅠ两种FQ-PCR检测技术的检测结果可靠,且均可用于转基因深加工产品的检测。     

利用16S rRNA基因同源性分析鉴定两株明串珠菌

从酸马奶中分离出2株明串珠菌KLDS 5.0301和KLDS 5.0302,对2株菌的16S rRNA基因经PCR扩增测序,将测序结果同该属内菌株的16S rRNA序列作多序列比较,并建立明串珠菌属的系统发育树.结果表明,KLDS 5.0301的16S rRNA序列同L. garlicum的同源性百分比为100%.KLDS 5.0302的16S rRNA序列同L.mesenteroides LM2菌株的16S rRNA序列的同源性百分比为99.9%.根据系统发育树的结果,将KLDS5.0301鉴定为L.garlicum,KLDS 5.0302鉴定为L.mesenteroides.菌株KLDS 5.0301和KLDS 5.0302的16SrRNA序列已经在GeneBank申请国际序列注册号,分别为DQ239691和DQ297412.     

抗菌肽及其重组表达系统研究进展

抗菌肽作为一类具有多种生物学功能的小肽,具有分子量小、不含外源成分、不易产生耐药性等特性,成为近年来的研究热点。该文综述了抗菌肽的种类、作用机制及其重组表达系统等方面的研究进展,并对存在的热点问题进行了探讨。     

HSV1-TK基因原核表达质粒的构建及其表达检测

目的:构建含有HSV1-TK基因的原核表达质粒,并对其原核表达情况进行检测,为进一步将细菌载体应用于肿瘤基因治疗奠定基础.方法:以质粒pHSV-106为模板,利用PCR获得HSV1-TK基因克隆并将其与表达载体pBV220连接,重组质粒经鉴定后转化到大肠杆菌DH5a中,并检测其蛋白表达情况.结果:TK基因全长1 128bp,与理论值相符.经测序发现,克隆的DNA片段与TK基因(NCBI登录号:V00470)同源性为100%;但是电泳结果中不能看到目的蛋白条带;因此,进行多次重复及更换宿主等试验以排除试验误差和偏爱密码子的影响;通过更换载体pET-28a确定来源于单纯疱疹病毒的胸苷激酶能够实现原核表达,表达蛋白大小约为41 kD,与理论值相符.结论:试验结果表明HSV1-TK基因能够实现原核表达,筛选合适的TK基因原核表达载体是利用细菌载体携带自杀基因TK治疗肿瘤的基本前提.     

罗伊乳杆菌对致龋变形链球菌拮抗作用的研究

目的研究罗伊乳杆菌对变形链球菌的拮抗作用,初步了解产生拮抗作用的原因。方法利用罗伊乳杆菌无菌上清液,应用双层平板打孔法测定其抑菌效果,再通过滤纸片抑菌法对罗伊乳杆菌发酵的酸乳制品与普通酸乳制品对变形链球菌的抑菌作用进行比较,用饱和硫酸铵沉淀法分析产生拮抗作用的原因。结果罗伊乳杆菌有显著抑菌活性（P〈0.05）,仅罗伊乳杆菌的发酵乳样品对变性链球菌产生直径为6.3mm抑菌圈,80%饱和硫酸铵沉淀的细菌素抑菌活力最强,蛋白酶K处理后无明显抑菌圈。结论本研究证明了罗伊乳杆菌的代谢产物以及罗伊乳杆菌发酵的酸奶制品对致龋菌变形链球菌有着明显的拮抗作用。