不同培养体系对鼠-猪异种嵌合胚胎发育和嵌合能力的比较

近年来,随着干细胞分化与再生医学研究的不断深入,异种嵌合已成为当前干细胞和再生医学领域的热点问题,并有望为未来解决器官移植供体来源严重短缺等再生医学难题开辟新的方向。异种嵌合以及异种器官再造过程中面临众多科学问题和技术难题,而异种嵌合过程中嵌合胚胎时期的选择,后续培养液的选择以及这些环节所造成的供体细胞与受体胚胎之间的发育平衡成为建立异种器官再造的第一个科学问题。猪由于具有与人类器官大小相似、繁殖快等特点,成为异种嵌合最适合的潜在研究对象。为了提高鼠-猪异种嵌合胚胎中小鼠供体细胞——诱导多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells,i PSCs)的存活率和增殖率,我们尝试以i PSCs培养液(N2B27)以及N2B27→PZM-3梯度更换的培养液(N2B27(3.5 h))作为研究异种嵌合胚胎体外发育培养的对象,并与猪胚胎培养液(PZM-3,Porcine zygotic medium)体系下发育进行比较,从而评价了这3种培养液在8-细胞和囊胚期注射后,对嵌合胚胎后续发育的影响及嵌合情况。结果显示,8-细胞期注射后,PZM-3不仅对嵌合胚胎的后续发育较为有利,更有利于小鼠i PS嵌合到猪胚胎中;囊胚期注射后3种培养体系下GFP阳性嵌合率差异不显著,但其嵌合率显著低于8-细胞期嵌合率。结果表明,PZM-3培养体系更有利于鼠-猪异种嵌合胚胎的体外发育,对8-细胞期胚胎进行嵌合操作有益于提高鼠-猪异种嵌合后胚胎的嵌合率。     

嗜酸乳杆菌黏附鸡胚肠黏膜上皮细胞能力的研究

目的建立肠黏膜上皮细胞模型和测定嗜酸乳杆菌的黏附能力。方法将嗜酸乳杆菌用胃蛋白酶和HCl-H2O低pH以及反复冻融、灭活等方法处理后测定其黏附能力。结果成功地建立了鸡胚肠黏膜上皮细胞模型;经胃蛋白酶和HCl-H2O低pH以及灭活处理后,嗜酸乳杆菌的黏附能力和对照组差异有显著性。反复冻融后的嗜酸乳杆菌黏附能力与对照组差异无显著性。结论胃蛋白酶和HCl-H2O pH2.0会使嗜酸乳杆菌黏附肠黏膜上皮细胞能力下降,热灭活可使嗜酸乳杆菌的黏附能力提高,反复冻融对嗜酸乳杆菌的黏附能力无明显影响。     

氧化胁迫在硝基苯致小鼠神经毒性中的作用

目的:探讨氧化胁迫在硝基苯致小鼠神经毒性中的作用。方法:用不同剂量的硝基苯对小鼠进行灌胃染毒,每天1次,共30d;用碱性羟胺比色法测定小鼠脑乙酰胆碱酯酶活性,用试剂盒检测脑抗氧化功能。结果:试验组小鼠的中毒症状随着染毒剂量的增加和时间的延长而越来越明显;乙酰胆碱酯酶活性降低;与对照组相比,脑各项抗氧化指标均表现出显著或极显著差异。结论:氧化胁迫在硝基苯发挥神经毒性过程中起重要作用。     

解淀粉芽胞杆菌分离鉴定及培养优化的研究进展

解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是芽胞杆菌属的一个种,广泛存在于自然界,具有丰富的生境多样性,其芽胞具有抗逆性,可抵抗不良环境,同时能产生多种抗菌物质,如脂肽、抗菌蛋白和多种酶类,能抗植物病原真菌和有害细菌,该菌能形成生物膜,定植于植物根系,促进植物生长,因此对该菌进行分离鉴定以及培养优化具有重要意义。截至目前,已经从各种生境中分离、鉴定了多种有应用价值的解淀粉芽胞杆菌,通过不同策略对该菌的培养基和培养条件进行优化,使该菌相关功能得以提高。本文综述了近年来对解淀粉芽胞杆菌的生境多样性、分离鉴定及培养基和培养条件优化的策略,简要归纳了国内外关于解淀粉芽胞杆菌重要的工业和商业产品,为更好地研究和应用解淀粉芽胞杆菌提供必要的参考和借鉴。     

粘虫胚胎细胞系的建立及对MsNPV敏感性的测定

用培养24h的粘虫受精卵成功地建立一株粘虫胚胎细胞后,命名为NEAU-Ms-980312,目前已传代201代,该细胞系主要含有圆形和纺锤形两种细胞,在28℃、120h的细胞群体倍增时间为47.82h.该细胞系对粘虫核型多角体病毒有较高的敏感性,用原代病毒以感染复数(m.o.i.)为0.08TCID50/细胞感染细胞,在接毒后10d,病毒感染率和每细胞产生的多角体数量分别是为62.10%和33.59PIB.     

春小麦体细胞无性系变异的研究

利用RAPD技术检测春小麦愈伤组织和再生植株在离体培养过程中产生的变异,对培养不同时期的愈伤组织、再生植株检测结果表明,在小麦离体培养愈伤组织和再生植株中,RAPD谱带发生变化,表明发生了体细胞无性系分子水平变异．且具有明显的规律性和变异特点：杂交B代幼穗培养获得的愈伤组织发生变异的频率高于遗传稳定品种幼穗培养获得的愈伤组织。在愈伤组织培养75d时,在RAPD电泳图谱反映出高频率的亲本谱带缺失和非亲本谱带增加。不同基因型或外植体诱导的愈伤组织和再生植株中出现了相同的变异。与愈伤组织相比．再生植株中检测到的变异频率更高。不同外植体离体培养获得的再生植株,即使表型上没有观察到变异,但从RAPD图谱上却反映出变异的发生。表明RAPD技术可以快建方便地检测组织培养每个阶段出现的DNA水平变异。     

植物抗病基因同源序列及其研究进展

抗病基因同源序列(RGA)标记是一种新兴的分子标记方法,由于它可能与某些抗病基因有关,因此具有很大的发展前景。该文综述了抗病基因(R基因)的不同保守区以及抗病基因同源序列(RGA)在基因组中的分布、演化及应用,并对其应用前景进行了展望。     

番茄随机扩增DNA多态性体系的条件优化

利用改进的SDS法提取代号为03748的栽培番茄叶片基因组DNA。对影响番茄随机扩增DNA多态性（RAPD）扩增结果的因素进行了分析,确定了模板、Mg^2＋、dNTPs、引物和Tap DNA聚合酶的适宜浓度及反应的最佳循环次数。实验结果表明,在以下条件下,番茄的RAPD扩增效果较好：20μL反应体系中使用20-40ng的模板、1．5-2．0mmol／L的Mg^2＋、0．15＋0．20μmol／L的dNTPs、0．15-2．0μmol／L的引物、1．0U的Taq DNA聚合酶;94℃预变性5min,然后经94℃变性1min、360℃ 1min、720℃ 1．5min,进行35个循环,最后在72℃时再延伸10min。     

一串红胚胎发育过程中多胺含量的变化

选取发育正常和败育一串红(Saliva splendens)5个不同时期的胚胎,分别提取、测定多胺(精胺、亚精胺、腐胺与尸胺)的含量变化.通过比较一串红胚胎发育不同阶段多胺物质的变化规律,探讨多胺在一串红胚胎发育中的生理作用.结果表明,一串红的胚胎败育和胚珠中较低的多胺含量及其在发育进程中较大的降幅有关;在盛花期,胚胎发育的关键时期,正常胚珠中哑精胺的含量有一个明显的峰值,而败育的胚珠中则无,这表明亚精胺含量变化在胚胎发育中起关键调节作用.     

我国新分离森林脑炎病毒E基因特征分析

为了解分离自黑龙江省大兴安岭林区全沟硬蜱中的DXAL-5、12、13、16、18,21共6株森林脑炎(TBE)病毒E蛋白基因特征并确定病毒基因型,应用RT-PCR技术对6株病毒E蛋白基因进行体外扩增、克隆、测序.结果发现,6株病毒E蛋白基因的核苷酸序列长均为1 488 bp,推导的氨基酸序列长均为496 aa.与TBE参考毒株E蛋白基因进行比较,这6株病毒与远东亚型同源性最高,其次是西伯利亚亚型,与欧洲亚型同源性最差;在决定亚型特征的氨基酸位点多数属于TBE病毒远东亚型.E蛋白基因推导的氨基酸种系发生树分析表明,6株病毒均在远东亚型分枝内.因此就E蛋白基因而言,DXAL-5、12、13、16、18、21株均属于TBE病毒的远东亚型.新分离毒株与Senzhang株同源性较高,种系发生关系也比较接近,推测疫苗株对新分离毒株仍具有很好的保护作用.但是在E蛋白的A、B和C抗原决定区内,6株病毒均有不同程度的氨基酸改变,这些突变有可能影响E蛋白的功能.