密码子优化对DNA疫苗免疫原性的影响

DNA疫苗作为疫苗研制工业中的新成果已经得到了越来越多得关注。为了提高其免疫原性,发挥它最大的保护作用,人们进行了各种尝试。近几年来的研究表明,通过密码子优化的方式可以提高DNA疫苗的免疫原性,增强其免疫保护作用。本文即针对该问题做了一些总结。     

Bold 螺钉治疗内踝骨折的疗效分析

目的:对比Bold螺钉和普通空心螺钉内固定治疗单纯内踝骨折的疗效。方法:空心螺钉治疗单纯内踝撕脱骨折57例,分为A组Bold螺钉内固定治疗内踝骨折25例,B组使用普通空心螺钉内固定32例。结果:两组57例均获得随访,两组病例远期均能得到较坚强的固定和良好的功能恢复,但Bold螺钉组相对普通螺钉组愈合时间更快(P<0.05),下床活动时间更早(P<0.05),早期踝关节功能评分高(P<0.05),但六个月后没有明显差异。结论:Bold螺钉内固定有助于内踝骨折早期愈合和早期功能锻炼,是一种比较好的内固定材料,值得推广。     

彩色多普勒超声对晚孕期羊水过少胎儿肾动脉血流的研究

目的:应用彩色多普勒血流显像(CDFI)观察晚孕期羊水过少胎儿肾动脉(RA)血流阻力参数的变化,为临床预测羊水过少时胎儿宫内缺氧及评价胎盘功能提供相关信息。方法:应用CDFI检测100例晚孕期孕妇(孕36～40周)RA的搏动指数(PI)、阻力指数(RI)及收缩期峰值流速与舒张末期流速比值(S/D)。其中羊水过少A组(5cm<羊水指数AFI≤8cm)40例,羊水过少B组(AFI≤5 cm)20例,正常对照C组(8cm相似文献   

C-met及相关基因在m大鼠胰腺发育功能完善中的表达

目的：研究原癌基因c—met及其相关基因在大鼠胰腺发育及细胞功能完善过程中的表达。方法：采用高密度寡核苷酸芯片（Affymetrix芯片）对孕12．5（E12．5）、E15．5和E18．5、新生、成年胰腺进行基因转录水平分析,并用RT—PCR验证基因在大鼠胰腺不同发育时期的表达。结果：c—met基因在E15．5、E18．5较成年特异高表达。芯片中c—met转录调控基因和信号传导通路相关基因的表达趋势与c—met高度相似。RT—PCR（所用引物设计区域与芯片相同）验证,c—met表达趋势与芯片结果相符;与芯片c—met探针所用引物不同RT—PCR,结果却在各发育阶段呈现与芯片不同的表达趋势。结论：提示c—met可能在胰腺发育细胞功能完善的关键阶段起调控作用,参与胚胎胰腺发育中晚期细胞功能完善的信号传导过程。并且c—met在胰腺发育中发挥作用有可能存在不同转录本。     

生物医学信息资源的整合和导航系统的建立

生物医学信息资源的大量涌现,带来了一些问题。为了节约读者检索时问,提高查全率、查准率。我们有必要利用现有的技术条件对大量有用的生物医学数据库进行收集、整合、加工,形成具有实用性、系统性的新的有机整体。针对各类数据库建立生物医学信息的导航系统。两者的结合可以有效、系统地满足医务人员和科研人员对信息的需求。     

乙型肝炎病毒核心抗原及Flt3配体双表达核酸疫苗的小鼠免疫应答研究

目的 构建乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)和Flt3配体(FL)胞外段双表达核酸疫苗,并观察其免疫原性。方法 分别将HBcAg、FL基因克隆入pJW4303载体,获得双表达核酸疫苗,体外转染293T细胞检测目的基因的表达。分组免疫BABL／c小鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清抗-HBc IgG效价,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测HBcAg特异性Th1／Th2型细胞因子的分泌水平。结果 所构建疫苗在体外均能表达HBcAg和FL,当基因位于内部核糖体切入位点(IRES)元件上游时表达水平明显较优。pJW4303／C／FL免疫组产生的抗-HBc IgG效价和Th1／Th2型细胞因子的分泌水平均显著优于pJW4303／C和pJW4303／FL／C组。结论 成功构建双表达核酸疫苗,基因位于上游时表达水平高于下游。FL基因的引入明显增强了HBcAg核酸疫苗的免疫原性。     

中药金叶败毒制剂抑制巨细胞病毒感染

目的：通过对感染丝裂索活化蛋白激酶（Mitogen—Activated Protein Kinase,MAPK）细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase包括ERK1和ERK2）的信号通路的抑制作用,研究中药金叶败毒制剂治疗巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染的分子机制。方法：使用免疽印记技术检测中药金叶败毒制剂和更昔洛韦（ganciclovir,GCV）干预HCMV感染的人胚肺成纤维细胞（human embryonic lung,HEL）的ERK表达水平,并观察MEK（mitogen-activated protein kinase kinase）特异性抑制剂PD98059,中药金叶败毒制刑对细胞的病变作用（cytopathic effect,CPE）的影响。结果：两种药物都可抑制HCMV在HEL中的增殖,以PD98059与中药金叶败毒制剂合用效果明显。中药金叶败毒制剂使磷酸化ERK1／2表达降低,对ERK1的抑制作用在感染后10min出现,30min达到高峰,对ERK2的抑制作用在感染后10min出现,60min达到高峰。而GCV对ERK1／2无明显的抑制作用。结论：中药金叶败毒制剂可通过调节MAPK／ERK通路而抑制HCMV基因的表达和复制从而发挥其部分抗病毒作用。     

应用基因芯片技术检测非综合征型耳聋基因突变

目的:应用遗传性耳聋基因芯片对散发性聋患者进行分子病因学检测,评估其在遗传性耳聋快速基因诊断中的可靠性。方法:门诊收集散发性聋患者10例,取外周血,提取基因组DNA,用遗传性耳聋基因芯片检测4个中国人中常见的耳聋相关基因中的9个热点突变,包括GJB2(35delG、176del16bp、235delC及299delAT)、GJB3(C538T)、SLC26A4(IVS7-2AG、A2168G)和线粒体DNA 12S rRNA(A1555G、C1494T)。同时,PCR扩增GJB2、线粒体12S rRNA基因全序列,DNA测序,以验证基因芯片检测结果的准确性。结果:在10名耳聋患者中,基因芯片方法检出1例携带线粒体DNA 12S rRNA C1494T突变;2例GJB2基因235delC纯合突变;2例235delC杂合突变;SLC26A4基因和GJB3基因未检出突变。基因芯片的结果与测序结果完全一致。结论:遗传性耳聋基因芯片技术对中国人常见耳聋相关基因热点突变的检出率高,结果准确、可靠,具有快速、高通量、高准确性、低成本等特点,能够满足临床耳聋基因检测的要求,同时结合产前诊断技术能有效预防耳聋患儿的出生,因而具有广阔的临床应用前景。     

层黏连蛋白1aminin-511的研究进展

Laminin-511是层黏连蛋白（laminin）家族中高度保守的一员,在早期胚胎及成体多种组织的基底膜中广泛分布。Laminin-511通过其肽链的相应区域与细胞受体及基底膜成分连接,参与维持基底膜的完整性和调节细胞的多种生物学功能。该文在概述laminin-511的结构特点、作用机制的基础上,对其在胚胎发育、干细胞研究中的功能作一综述。     

热量限制通过HNF3γ下调NOX4表达来抑制内皮细胞的衰老

为了观察热量限制对主动脉内皮细胞中HNF3γ及NOX4基因表达的影响, 揭示HNF3γ-NOX4-活性氧通路介导热量限制抗内皮细胞衰老的分子机制, 文章将主动脉内皮细胞分为5组：对照组、高热量组、低热量组、siRNA+低热量组、siRNA+高热量组。应用逆转录实时定量PCR(Real-time quantitative PCR, RT-qPCR)、Western blotting分析各组HNF3γ、NOX4 mRNA及蛋白水平变化, 并检测各组细胞内活性氧产量及细胞衰老程度变化。采用染色质免疫共沉淀分析HNF3γ蛋白与NOX4基因启动子区域结合情况, 萤光素酶报告基因检测HNF3γ蛋白结合后对NOX4基因启动子活性的影响。结果显示：与对照组比较, 低热量组HNF3γ mRNA和总HNF3γ蛋白表达水平、磷酸化/总HNF3γ比值显著升高(P<0.05), NOX4 mRNA和蛋白表达水平、细胞内活性氧产量及细胞衰老程度显著降低(P<0.05); 高热量组HNF3γ mRNA和总HNF3γ蛋白表达水平、磷酸化/总HNF3γ比值显著降低(P<0.05), NOX4 mRNA和蛋白表达水平、细胞内活性氧产量及细胞衰老程度显著升高(P<0.05); siRNA+低热量组及siRNA+高热量组中NOX4 mRNA和蛋白表达水平、细胞内活性氧水平及细胞衰老程度显著升高(P< 0.05)。染色质免疫共沉淀证实HNF3γ蛋白可与NOX4基因启动区域4个结合位点(-6 bp、-76 bp、-249 bp、-954 bp)结合。萤光素酶报告基因检测显示HNF3γ蛋白与NOX4启动子区域1个位点(-6 bp)、2个位点(-6、-76 bp)、3个位点(-6、-76、-249 bp)、4个位点(-6、-76、-249、-954 bp)结合, 可使NOX4启动子活性分别降低至对照组的80.15±4.64%、40.02.±2.15%、16.46±2.24%、12.13±1.46%, P<0.05。上述结果提示热量限制可上调HNF3γ基因表达, 增强HNF3γ蛋白活性, 促进HNF3γ蛋白同NOX4基因启动子区域结合, 抑制NOX4基因表达, 进而减少细胞内活性氧产生而延缓动脉内皮细胞衰老。