U-1分解草酸的检测及其降低草酸毒性的研究

草酸是油菜菌核病病菌(Sclerotinia sclerotiorum)致病的重要因子。以实验室分离得到的草酸分解菌U-1为材料,研究U-1分解草酸的能力及其降低草酸对油菜毒性的作用机理。检测U-1分解草酸的能力,即以草酸、U-1 草酸分别培养24 h后,利用高效液相色谱仪检测草酸的含量;研究U-1抑制草酸对油菜毒害的作用机理,即分别以清水、U-1、草酸、U-1 草酸处理油菜叶片,检测不同处理对油菜叶片中防卫反应0相关酶(PAL酶、PPO酶和PO酶)变化的影响。研究结果表明,与草酸单独处理组相比,U-1 草酸处理组草酸含量显著降低;U-1可以显著抑制草酸对油菜中PAL酶、PPO酶和PO酶活性的作用。     

RPAP3 蛋白中TPR 结构域的功能研究

目的:构建针对RPAP3 TPR区域的慢病毒载体,观察过表达对细胞周期的影响。方法:通过生物信息学软件比较RPAP3结构域组成,推测功能;分析RPAP3核定位信号,构建瞬时表达质粒pEGFP-N2-RPAP3,激光共聚焦显微镜观察RPAP3蛋白的亚细胞定位;通过酵母双杂交和GST-Pulldown实验研究RPAP3与HSP70的相互作用及作用靶点;构建慢病毒载体pLJM.1-RPAP3,转染293T细胞,收病毒感染MCF7细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞系,流式细胞分析对细胞周期的影响。结果:RPAP3在多物种广泛存在,有高度保守性;蛋白存在典型核定位信号,激光共聚焦显微镜下,GFP标记的RPAP3蛋白主要分布在细胞核;酵母双杂交和GST-Pulldown实验证实RPAP3与HSP70间存在相互作用,且作用发生在RPAP3的三联TPR结构域和HSP70的GPTIEEVD末端之间;流式细胞显示RPAP3 TPR区域的高表达阻滞细胞周期且凋亡增加。结论:RPAP3与HSP70间的相互作用发生在RPAP3的三联TPR结构域和热休克蛋白70的GPTIEEVD末端之间;构建高表达细胞株发现其对细胞周期及凋亡有影响。