猪瘟兔化弱毒E2蛋白A/D区的高效表达和蛋白纯化及其应用

本试验对表达猪瘟E2囊膜糖蛋白的原核表达载体pET-E2的表达条件进行了优化,在此基础上,对表达的蛋白质进行了纯化.在6 mol/L盐酸胍存在的条件下,将包涵体溶解在Tris-HCI中,并直接用于His Band亲和层析.收集过柱产物并透析,在2%SDS条件下,对所得的重组蛋白质进行了定量.重组蛋白质被用来包被96孔ELISA板并应用于免疫猪瘟抗体水平的测定.     

HPLC指纹图谱技术在灵芝组织分离试验中的应用

利用 HPLC 指纹图谱技术研究从同一灵芝子实体不同部位组织分离获得的菌株三萜化合物的差异。用常规组织分离方法获得不同菌株,在 A、B、C、D 四种培养基上进行出菇试验,运用HPLC指纹图谱技术获得各子实体三萜提取物 HPLC 指纹图谱,计算图谱间的相似度,分析三萜指纹的差异。结果表明,从子实体不同部位分离获得的四个菌株在同一培养基相同条件下培养获得的灵芝子实体的三萜指纹图谱相似度均大于0.99;同一部位分离获得的菌株在不同培养基相同培养条件下获得的子实体,其粗三萜 HPLC 图谱相似度均大于0.96;不     

NaCl胁迫下大麦根系液泡膜H+-ATP酶活性受ATP和焦磷酸含量的调节

选用两个耐盐性强弱不同的大麦(Hordeumvulgare L.)品种,研究了NaCl胁迫下其幼苗根中ATP和焦磷酸(PPi)含量的变化以及PPi对液泡膜H -ATP酶活性的影响.结果表明:在含NaCl 200mmol/L的1/2 Hoagland溶液中处理2 d,耐盐品种(滩引2号)根中液泡膜H -ATP酶活性增加,然后逐渐下降,而H -PPi酶活性在NaCl处理9 d中'直下降.盐敏感品种(科品7号)在NaCl胁迫下根中H -ATP酶和H -PPi酶活性都下降(图1).与对照相比较,NaCl胁迫下耐盐品种根中ATP含量2 d时增加,4 d后下降;盐敏感品种根中ATP积累受NaCl胁迫的抑制(图2).NaCl胁迫下,两品种的PPi含量皆略有增加(图3).PPi对液泡膜H -ATP酶活性有竞争性抑制作用(图4).结果表明:ATP积累是NaCl胁迫下液泡膜H -ATP酶活性增加的原因之一,NaCl胁迫下大麦品种根中ATP含量下降和PPi对液泡膜H -ATP酶的抑制使该酶活性下降.     

苹果多酚氧化酶双链RNA干扰(RNAi)研究

以成熟苹果果实的RNA为模板,经RT-PCR扩增并克隆苹果多酚氧化酶(APPO)长度为710bp的反义、正义基因片段.以副球菌中类胡罗卜素合成有关的(crtW+crtY)融合基因片段YYT为间隔区,将APPO反义基因片段、YYT和APPO正义基因片段串联,构成全长为2446bp的DNA并插入到植物双元载体pYPX145中,构成可表达苹果多酚氧化酶双链RNA的植物双元载体pYF7704.以根癌农杆菌介导的叶盘转化法转化苹果栽培品种红富士,通过50mg/L卡那霉素筛选和GUS检测,获得了转基因苹果抗性芽.荧光定量RT-PCR检测结果显示,转基因苹果抗性芽内多酚氧化酶基因的干扰效果达91.69%以上,研究结果证实多酚氧化酶双链RNA干扰在转基因苹果上是可行的.     

半胱胺对成年鹅血浆中生长抑素和某些代谢激素的影响

目的:研究半胱胺(CS)对成年鹅生长抑素(SS)和某些代谢激素的影响.方法:14只装有翅静脉瘘管的成年杂交鹅(川白×太湖),经瘘管采取对照期和处理(一次性添喂100 mg/kg bw的半胱胺)后第1、3、5、7 d的血样,用RIA双抗法测定其中激素的含量.结果:实验期第1、3、5和7 d的生长抑素的含量均显著低于对照期(1.89±0.10 μg/L).促甲状腺激素较对照期(2.45±0.31 mIU/L)在第1 d显著下降21.63 %(P<0.05),第3、5 d均降低18.37%(P>0.05),第7 d基本回复正常(P>0.05). 实验期1、3、5和7 d的T4 较对照期(5.41±0.98 μg/L)显著升高(P<0.01);实验期第3 d的T3水平较对照期(1.05±0.06 μg /L)高36.19 %(P<0.01);同样,胰岛素在实验期的第5 d显著高于对照期(P<0.05).结论:CS能够降低成年鹅血液中SS含量,使T4、T3和胰岛素水平升高,提高了机体的代谢水平,同化作用加强,从而有利于生长.     

甜瓜属远缘杂种回交自交群体的过氧化物酶同工酶分析

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,对甜瓜属远缘杂种 (Cucumis× hytivus Chen & Kirkbride)与栽培黄瓜的回交自交群体共 4 6份材料进行了同工酶分析 ,结果表明 :群体内各单株间过氧化物酶酶谱差异较大 ,根据酶带数目及位置的差异可归为 6个类型 ,反映了群体内的遗传多态性。将回交自交群体与普通栽培黄瓜酶谱相比较时发现 ,群体比黄瓜新增了 4条带 ;群体的平均酶带数目 (7.8)比普通栽培黄瓜 (5 .0 )高出 5 6 .0 %。与此同时 ,在酶的活性上群体内也存在很大变异。这说明通过远缘杂交获得的新种对扩大黄瓜的遗传变异 ,改良黄瓜资源具有巨大的潜力。     

甜樱桃胚胎离体培养

甜樱桃（Cerasusavium）果实采收后贮藏在40℃下30～40d。除去果肉,将内果皮撬开后,取出胚放在无菌水中浸泡30min,70％乙醇中30s,再用0．2％HgCl2或2％～4％NaOCI表面灭菌20min,最后用无菌水冲洗4次。将胚切成两部分,一部分带有胚珠（大小为整个胚的2／3）,另一部分为子叶。将带有胚珠的外植体接种在诱导培养基（MS＋0．5ms·＊－‘6－BA＋2％蔗糖十0．8％琼脂）上,20d后观察统计胚胎发育类型。然后,将外植体发育成的植株切除或保留主根转入增殖培养基（MS＋0．5mg·L－‘6－BA＋2％蔗糖十0．8％琼脂）。切除主根的试管苗培…     

氮源对紫云英根瘤菌nod基因表达的作用

高浓度的硫酸铵阻碍了紫云英根瘤菌诱导紫云英根毛发生典型的根毛变形并明显抑制了紫云英结瘤能力。通过对融合子的β-半乳精苷酶活性的测定进一步表明高浓度的硫酸铵对紫云英的结瘤调节基因nodDZ、共同结瘤基因nodA及nodBC的表达有抑制作用而对结瘤调节基因nodD1的表达无抑制作用。     

氮素形态及配比对5个种源菘蓝的生物碱类成分和多糖的影响

以5份不同种源的菘蓝为材料,采用田间小区试验,设置不施氮(CK)、硝态氮(NO3--N)、铵态氮(NH4+-N)、NH4+-N/NO3--N=75/25、NH4+-N/NO3--N=50/50、NH4+-N/NO3--N=25/75和酰胺态氮等7个处理,分析比较了不同种源植株的靛蓝、靛玉红和总生物碱含量、(R,S)-告依春及多糖含量等指标的差异,为菘蓝栽培生产中氮素的高效利用提供理论参考。结果表明:氮素处理有利于提高山西运城菘蓝和陕西商洛菘蓝叶内靛蓝含量,以及安徽亳州菘蓝和陕西商洛菘蓝叶内的总生物碱含量;NH4+-N/NO3--N=50/50处理对山西运城菘蓝,以及酰胺态氮处理对山西运城菘蓝和陕西商洛菘蓝叶内生物碱类成分的积累均有促进作用;与对照相比,氮素处理亦能有效地提高甘肃张掖菘蓝和陕西商洛菘蓝根内的(R,S)-告依春及安徽亳州菘蓝根内的多糖含量;安徽阜阳菘蓝(R,S)-告依春含量在任一氮处理下均远远高于其他种质菘蓝。研究表明,不同种源菘蓝对氮素处理的响应存在较大的差异,建议生产中综合考虑菘蓝的来源和需肥规律,采用经济有效的施氮组合,以提高其活性成分含量。     

萝卜品种指纹图谱SRAP与AFLP分析

应用SRAP与AFLP两种分子标记技术进行了萝卜品种鉴定分析。对萝卜基因组DNA的SRAP-PCR反应体系中引物、Mg2 、dNTPs浓度进行优化,确定最优体系为引物0.3μmol.L-1,dNTP 0.2 mmo.lL-1,Mg2 3.0 mmo.lL-1。对SRAP-PCR中的退火温度(50℃)设置了12个梯度处理,以em2-me2为引物时带型无明显差异。7个供试萝卜材料的SRAP和AFLP指纹图谱分析表明,供试材料均可被SRAP和14个AFLP引物准确鉴定,每对引物组合都产生独特的指纹图谱。11个SRAP引物组合共产生155条带,多态性条带84条。聚类分析与相对遗传距离(GD)表明,供试材料聚为4类,CB-03-2与SHCB-02-1亲缘关系最近(GD=0.054 9);齐虹大连和Heiseng的亲缘关系最远(GD=0.203 4)。基于16个AFLP标记引物组合分析结果表明,供试材料聚为3类,CB-03-2和SHCB-02-1的亲缘关系最近。SRAP与AFLP综合分析结果表明,供试材料可聚为3类,其中CB-03-2与SHCB-02-1亲缘关系最近(GD=0.047 6)。