高效液相色谱法测定大黄素在Caco-2细胞中的摄取

目的:采用反相高效液相色谱法,观察大黄素在Caco-2细胞中的摄取特点。方法:将大黄素与Caco-2细胞共同孵育,收集细胞样品,液氮反复冻融。取细胞裂解液,加入甲醇提取,提取液采用HPLC进行分析。色谱分析柱为C18柱(250mm×4．6mm,5μm,Diamonsil),流动相组成为85%乙腈及15%水(含0．1%乙酸),流速1ml·min-1,进样量20μl,柱温25℃,3D模式采集数据。结果:检测Caco-2细胞中大黄素的工作曲线的回归方程为Y=0．278x 0．148(Y=0．9996,n=5),线性范围为0．037～4．8μmol·L-1,最低检测浓度为0．018μmol·L-1。当细胞中大黄素的浓度为0．05、2和8．5μg·ml-1时,回收率分别为(101．3±7．3)%、(96．7±3．0)%和(98．7±2．1)%(n=5);相应的日内标准偏差分别为0．25%、2．9%和1．4%;相应的日间标准偏差分别为2．3%、5．6%和6．3%。大黄素在Caco-2细胞中的摄取达峰时间为10分钟,峰浓度为108．56±11．57 nmol/L·mg·protein,10分钟后Caco-2细胞中大黄素的含量迅速下降。浓度处于2-50μM之间时,Caco-2细胞对大黄素的摄取量呈线性增加,浓度达50μM后,随着剂量的增加大黄素的摄取量变化不明显。结论:大黄素可被Caco-2细胞迅速摄取,随着剂量的增加,大黄素在Caco-2细胞中的摄取存在饱和现象。     

实时细胞监测技术的人肠道病毒71型感染性检测方法研究

开展基于微电子传感器技术的实时细胞监测技术(Real-time Cell Assay,RTCA)在人肠道病毒71型(HEV71)病毒诱导的细胞病变检测方法中的应用价值研究。动态观察RD细胞不同阶段的生长指数,选择合适的细胞浓度开展HEV71病毒感染力和血清中HEV71中和抗体效价测定。同时应用传统的微量试验作为方法学的比较和结果验证。细胞阻抗通过软件转换成细胞指数CI值和可视的动态变化曲线显示,在96电子孔板上,当RD细胞浓度为1.5×104个/孔时能满足HEV71病毒感染性检测的观察天数大于5d的要求。与传统显微镜观察细胞CPE的方法比较,两种方法在接种病毒后的132h(约5.5d)产生病毒致细胞病变的终点判断结果一致。在中和抗体试验中,三份感染HEV71病毒的人血清中和抗体效价CI值结果和传统的96孔微量板镜检法结果相符。实时细胞监测技术可以提示研究者,即使是终点判断结果为相同的中和抗体滴度的血清,其所含病毒诱导的细胞病变出现时间也可能有所不同。实时细胞监测技术用于HEV71病毒感染力和血清中和抗体效价检测与传统的微量板法检测相比可以节省劳力,消除人为判断的误差,可以作为传统检测方法的补充手段之一,也可以动态观察细胞病变的发生和发展,为进一步深入研究病毒感染力强弱或血清抗体消长提供更为科学的数据。     

长江三峡库区土地利用/覆盖的长期变化

了解土地利用/覆盖的时空变化有助于揭示气候变化和人类活动对生态系统的影响,是开展生态系统管理的重要前提.长江三峡库区是我国重要的生态脆弱区,环境变化影响的复杂性显著,但目前对此仍缺乏系统了解.本文通过解译Landsat时序遥感影像,获取三峡库区土地利用/覆盖数据,研究土地利用/覆盖构成结构及其分布的长期时空变化特征,以揭示三峡库区土地利用/覆盖的演变规律,为深入了解生态脆弱区生态系统变化复杂性和区域生态系统管理提供科学依据.结果表明: 1990—2015年间,三峡库区土地利用/覆盖结构的空间异质性和变化显著,农田面积比例由66.2%降至40.4%,林地面积比例由31.3%增至53.5%,库区由农业景观转变为以森林、灌木林等为主的林地景观,建设用地和水体逐渐增加;林地逐渐向库区中部扩张,建设用地点状扩张;海拔500～1000 m和坡度15°～25°区域林地面积比例增长最明显,针叶林、针阔混交林和灌木林等植被类型增长最快.研究期间,三峡水库建设和各类生态恢复工程的实施促使区域土地利用/覆盖结构呈阶段性变化,总体表现为生态恢复趋势.积极的生态恢复措施有助于消减工程建设对区域生态环境的负面影响.     

聚乙二醇对菠萝蛋白酶的化学修饰

方法:用琥珀酸酐法活化的聚乙二醇对菠萝蛋白酶进行化学修饰,得到菠萝蛋白酶的修饰酶,对比研究三种菠萝蛋白酶:修饰酶、混合酶、天然酶的热稳定性及酸碱稳定性,考察金属离子对三种菠萝蛋白酶的影响。结果:当在55℃水浴保温100min后天然酶活力只保留20%,混合酶活力保留37%,修饰酶活力保留58%;在pH3.0-4.5及pH6.0-7.0的条件下,修饰酶活力高于天然酶活力。当Ca2 的浓度达到0.05mg/mL时,修饰酶的活力高达257.66%;当Mg2 的浓度达到0.035mg/mL时,修饰酶的活力高达147.25%。一价离子Na 对三种菠萝蛋白酶无明显影响。结论:修饰的菠萝蛋白酶对温度和pH值的稳定性均比天然酶有很大程度的提高。混合酶的活力介于天然酶和修饰酶之间说明聚乙二醇对菠萝蛋白酶有一定的保护作用。二价离子Ca2 、Mg2 对三种菠萝蛋白酶活力均有不同程度的激活作用。     

HIV-1 Tat蛋白神经毒作用的研究进展

HIV-1感染者常并发神经系统损伤,患者主要表现为运动功能障碍,认知和行为受损等。研究表明,HIV-1多种蛋白参与上述病理过程,其中Tat蛋白发挥了极为重要的作用。外周Tat蛋白可透过血脑屏障进入脑组织,与脑内感染细胞分泌或释放至胞外的Tat共同作用于NMDAR、mGluR1、多巴胺转运蛋白等,损伤神经系统。该文主要对Tat蛋白的神经毒作用作一综述。     

湖南省八大公山国家自然保护区蛾类调查初报

从2007年4月到9月,对八大公山国家自然保护区蛾类昆虫进行了初步调查,共获得蛾类标本4000余号。与湖南农业大学昆虫学教研室以往在八大公山采集保存的蛾类标本1000余号一起,共鉴定出19科175种,其中7种为湖南省新记录种。区系分析结果表明:该地区蛾类昆虫以东洋种为主。     

原发性干燥综合征患者肠道菌群特征分析

通过比较原发性干燥综合征(pSS)患者和健康人群肠道菌群的差异, 深入探讨pSS患者肠道菌群与pSS发生发展的关系。

招募2019年1月至2021年2月于大连市中心医院风湿免疫科住院的pSS患者60名, 作为本研究的pSS组; 同时招募大连市中心医院体检中心的健康志愿者50名作为本研究的对照组(Control组)。收集两组粪便标本, 各50例, 提取细菌DNA进行16S rDNA高通量测序后进行菌群多样性和LEfSe分析。

pSS组肠道菌群α-多样性较Control组显著降低(P < 0.05)。与Control组相比, pSS组厚壁菌门/拟杆菌门比值降低; 普雷沃菌科、红蝽菌科、消化链球菌科、Eggerthellaceae, unidentified_Clostridiales丰度降低, 而拟杆菌科升高; 罗姆布茨菌属和Dorea等丰度降低, 拟杆菌属、韦荣球菌属等丰度升高。并且在pSS组肠道菌群中发现大肠埃希菌丰度明显升高。

pSS患者存在肠道菌群失调, 提示菌群失调可能与pSS的发生发展有关。

     

蛇足石杉COBRA基因家族的分子生物信息学及表达分析

为探明蛇足石杉COBRA基因家族成员分子生物信息学特征及组织表达规律,该文基于蛇足石杉的全长转录组数据,通过生物信息学技术对该家族成员(HsCOBRAs)的理化性质、结构域、保守基序、顺式作用元件、基因表达量等进行分析。结果表明:(1)在蛇足石杉全长转录组中共筛选出24个HsCOBRAs家族成员,其中酸性蛋白9个,稳定蛋白11个,疏水性蛋白5个,具有跨膜结构的蛋白7个,具有信号肽的蛋白3个。(2)亚细胞定位在细胞壁、叶绿体、细胞核、细胞膜上。(3)结构分析发现HsCOBRAs有7种结构域和6种保守基序,部分成员具有高度保守的CCVS结构。(4)HsCOBRAs具有CAAT-box、TATA-box等45种顺式作用元件。(5)HsCOBRA2在叶、孢子、茎、芽胞中的表达量均最高。该研究结果可为HsCOBRAs的进一步研究及生物学功能验证等提供理论依据。     

反应扩散模型的全局渐近稳定性和持续性

本文主要应用反应扩散方程的不变原理和构造适当的Liapunov泛函方法研究了一类反应扩散模型的唯一齐次正平衡态的全局渐近稳定性.进一步,根据Dunbar et al.(1986)和Hutson与Moran(1987)得出的动力学系统结果,我们得到了判别具有持续性的充分条件.     

红壤矿区复垦土壤的微生物生态特征及其稳定性恢复研究Ⅱ.对土壤微生物生态特征和群落结构的影响

研究了浙江哩铺铜矿废弃地土壤微生物生态特征和群落结构.结果表明,与对照土壤相比矿区土壤微生物生态特征发生了明显的改变,微生物呼吸速率减弱,微生物生物量显著降低,微生物生理生态参数C_mic/C_org下降、qCO₂值明显升高,重金属对土壤微生物生态特征有明显的影响.Biolog结果显示,矿区土壤微生物的群落结构发生变异,对能源碳的消耗量和速度明显升高,改变了微生物利用碳源的种类,使微生物消耗更多的能源,以维持其正常的生命活动,利用效率降低,明显不如对照土壤.由此可见,微生物生态特征是表征矿区复垦土壤重金属污染的灵敏、有效和可靠的生物学指标.