Sequential processing of mannose-containing glycans by two α-mannosidases from <Emphasis Type="Italic">Solitalea canadensis</Emphasis>

Two putative α-mannosidase genes isolated from the rather unexplored soil bacterium Solitalea canadensis were cloned and biochemically characterised. Both recombinant enzymes were highly selective in releasing α-linked mannose but no other sugars. The α-mannosidases were designated Sca2/3Man2693 and Sca6Man4191, and showed the following biochemical properties: the temperature optimum for both enzymes was 37 °C, and their pH optima lay at 5.0 and 5.5, respectively. The activity of Sca2/3Man2693 was found to be dependent on Ca²⁺ ions, whereas Cu²⁺ and Zn²⁺ ions almost completely inhibited both α-mannosidases. Specificity screens with various substrates revealed that Sca2/3Man2693 could release both α1-2- and α1-3-linked mannose, whereas Sca6Man4191 only released α1-6-linked mannose. The combined enzymatic action of both recombinant α-mannosidases allowed the sequential degradation of high-mannose-type N-glycans. The facile expression and purification procedures in combination with strict substrate specificities make α-mannosidases from S. canadensis promising candidates for bioanalytical applications.     

两大优势产区‘富士’苹果园土壤养分与果实品质关系的多变量分析

探讨环渤海湾和黄土高原两大苹果产区土壤养分对‘富士’苹果品质的影响,筛选不同产区影响果实品质特性的主要土壤养分因子,明确优质‘富士’苹果的土壤养分含量指标等,为两大苹果产区果园合理施肥、提高果实品质等提供理论依据.于2010—2011年分别在我国环渤海湾和黄土高原两大苹果产区各选择22个县,每个县3片果园,共计132个乔砧‘富士’苹果园,对每个果园的土壤养分含量和果实品质指标进行调查和分析,应用偏最小二乘回归方法筛选不同产区影响果实品质的主要土壤养分因子,并建立果实品质因素与土壤养分含量关系的回归方程,线性规划求解不同产区优质‘富士’苹果的土壤养分含量优化方案.结果表明: 环渤海湾产区的土壤碱解氮、有效磷、钙、铁和锌含量极显著高于黄土高原产区,而土壤pH,有效钾含量显著低于黄土高原产区;黄土高原产区的果实可溶性固形物含量显著高于环渤海湾产区,而固酸比显著低于环渤海湾产区.土壤有效硼含量对两产区果实单果质量影响的正效应最大,而土壤总氮与两产区果实硬度呈负效应;环渤海湾产区的果实可溶性固形物含量主要受土壤总氮和有效硼的负、正效应影响,黄土高原产区主要受土壤有效钙和碱解氮正、负效应的影响.环渤海湾产区优质乔砧‘富士’苹果的土壤养分含量需求为高的土壤有效硼和pH,适宜的土壤有效钾;黄土高原产区为低的土壤全氮,高的碱解氮、有效钾和有效铁,适宜的土壤有效锌和硼.环渤海湾产区优质乔砧‘富士’苹果的土壤养分管理技术措施为增加土壤有效硼含量和调高土壤pH、调整土壤有效钾含量;而黄土高原产区为提高土壤碱解氮、有效钾和有效铁含量,降低果园土壤pH,适当调整土壤有效锌和有效硼含量.     

异戊烯基焦磷酸转运对雷公藤甲素生物合成的影响

雷公藤甲素是一种具有显著抗炎、抗肿瘤和免疫抑制活性的天然产物,市场需求量大,临床应用前景广阔.文中以雷公藤悬浮细胞为实验材料,通过对不同培养时期(7d、14 d)的细胞外源性添加D,L-甘油醛(DLG)以阻断异戊烯基焦磷酸(IPP)转运,分析诱导前后的细胞活性及生物量、雷公藤甲素累积量及其生物合成上游途径关键酶基因的变...     

中华眼镜蛇心脏毒素（cardiotoxinⅢ, CTXⅢ）的克隆及其在大肠杆菌和酵母中的表达

心脏毒素cardiotoxinⅢ (CTXⅢ)是中华眼镜蛇毒主要组分之一,根据Genbank中已有的CTXs序列设计特异性引物,从中华眼镜蛇毒中克隆出208bp的CTXⅢ片段,并将该基因片段分别克隆至大肠杆菌His-patch ThioredoxinB载体中,重组CTXⅢ经渗透休克分泌至胞外。将CTXⅢ基因插入酵母pPIC9K分泌型表达载体重组表达,N端带有三个氨基酸（GYT）残基的重组CTXⅢ（rCTXⅢ）分泌量达9.5mg/L,经一步凝胶过滤纯化,其纯度达90％以上,纯化率达65％。经细胞毒性实验检测,纯化的rCTXⅢ 12h的IC50为4.66?g/ml,证实重组蛋白具有良好的生物学活性。     

盐胁迫下囊果碱蓬出苗状况及苗期抗盐性

研究了盐胁迫对囊果碱蓬出苗、幼苗生长、离子积累以及光合放氧速率的影响.囊果碱蓬生长的最适盐浓度在200 mmol/L NaCl左右.高浓度NaCl(400 mmol/L和600 mmol/L)没有显著降低其出苗率,200 mmol/L NaCl对出苗率具有促进作用.400 mmol/L和600 mmol/L NaCl显著降低了光合放氧速率.囊果碱蓬在高浓度NaCl处理下能够维持叶片较高的K+/Na+ 及含水量可能是其适应高盐生境的重要机制.     

小麦叶锈病新抗源筛选

小麦叶锈病是小麦生产的主要病害之一,发病严重时往往导致大幅度减产。叶锈菌生理小种的变异易导致抗病基因抗性的丧失,因此不断获得新抗源对小麦抗病育种至关重要。小麦近缘植物中含有丰富的小麦育种所需的抗病基因。本研究从小麦-近缘植物双二倍体、附加系、代换系或易位系等创新种质中筛选出小麦叶锈病新抗源,为利用这些新抗源打下基础。苗期对116份供试材料人工接种美国堪萨斯州流行的小麦叶锈菌混合生理小种 (Lrcomp) ,其中部分材料人工接种09-9-1441-1等5个中国当前流行的叶锈菌生理小种进行抗性鉴定,筛选获得新抗源。116份种质中,31份免疫、近免疫或高抗Lrcomp。含有希尔斯山羊草、尾状山羊草、拟斯卑尔脱山羊草、两芒山羊草、卵穗山羊草、沙融山羊草、柱穗山羊草、顶芒山羊草、小伞山羊草、偏凸山羊草、中间偃麦草、茸毛偃麦草、长穗偃麦草、粗穗披碱草、栽培黑麦、非洲黑麦、提莫菲维染色质的部分种质免疫或高抗Lrcomp,而含二角山羊草、无芒山羊草、沙生冰草、多年生簇毛麦和一年生簇毛麦染色质的种质表现中感至高感Lrcomp。希尔斯山羊草4S染色体、尾状山羊草C#1和D#1染色体和两芒山羊草、顶芒山羊草中可能含有未被报道的抗Lrcomp的新基因,值得进一步向小麦转育。小麦-粗穗披碱草1HtS.1BL罗伯逊易位系对Lrcomp及 09-9-1441-1和09-9-1426-1等5个中国当前流行叶锈菌生理小种近免疫,值得利用染色体工程等方法获得小片段抗病易位系应用于我国小麦抗叶锈育种。     

现生微生物群落形态研究及其对解释埃迪卡拉生物群化石属性的启示

通过对常见微生物种类进行纯培养获得多种微生物菌落形态,并将其与埃迪卡拉生物群化石形态进行对比研究,发现：1）盘状化石Aspidella与圆盘形菌落的轮廓和放射状分布的小脊具有相似性;2）“rangeomorphs”分支状化石与具有次级分支结构的菌落具有某些相似性;3）五边形似棘皮动物化石Arkaruaadami与五边形菌落较为相似;4）两侧对称类化石Kimberella与圆盘形边缘具放射状脊的菌落的表面形态非常相似;5）盘状化石Az—bumaresbrunsae与圆盘形表面具辐射状脊的菌落的轮廓和表面纹饰分布极为相似。以上对比结果表明部分埃迪卡拉生物群化石与微生物菌落形态具有一定的相似性。本研究为埃迪卡拉生物群化石生物属性的解译提供了新思路。     

海南多孔菌研究(1)

20 0 2年对海南省尖峰岭和吊罗山自然保护区的木材腐朽菌进行了考察 ,共采集标本 2 72种 ,发现多孔菌 62种 ,其中硬附毛菌 (Trichaptumdurum)为中国新记录种 ,并根据中国的材料对该种进行了详细描述。包括黄胶孔菌 (Favolaschiavolkensi) ,黑线齿菌 (Grammothelefuligo) ,帕托纤孔菌 (Inonotuspatouillardii) ,亚拉巴马厚孢孔菌 (Pachykytosporaalabamae) ,皮生多年菌 (Perenniporiacorticola) ,灰孔多年菌 (Perenniporiatephropora) ,木垫白薄孔菌 (Physisporinusxylostromatoide) ,核桃隔孔菌 (Protomeruliuscaryae) ,淡黄裂孔菌 (Schizoporaflavipora) ,常见硬皮菌 (Skeletocutisvulgaris) ,红木色孔菌 (Tinctoporellusepimiltinus) ,热带平伏饰孢 (Wrightoporiatropicalis)等 1 2种为海南省新记录种。     

烙铁头蛇毒对体外血凝及纤溶的影响

行体外血凝及纤溶观察结果表明：①烙铁头蛇毒能明显延长凝血活酶时间（ＰＴＴ）、凝血酶原时间（ＰＴ）及蝰蛇毒磷脂时间（ＲＶＶＣＴ）,显示出较强的抗凝活性;②对人纤维蛋白原及纤维蛋白有较强的溶解作用,这种作用不完全是单一的活化素样作用,还有脆浆素样作用     

罗伊乳酸杆菌甘油脱水酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

迅速升温的生物柴油投资热导致了其副产物甘油的大量积累,这一现状使得开发和利用甘油生产各种精细化工产品备受关注。本实验通过构建基因工程菌来生物转化甘油生产3-羟基丙醛,为甘油下游产品的开发开辟了一条新途径。3-羟基丙醛是一种重要的化学中间体,同时也是一种有效的抗菌剂和生物组织的固定剂,在化学工业中具有广泛的应用前景。实验主要利用甘油脱水酶N末端序列,并根据NCBI中公布的甘油脱水酶的氨基酸序列设计了一对克隆引物,并以菌株罗伊乳酸杆菌Lactobacillus reuteri的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得约为1.6kb的片段,将其克隆到T载体上进行测序,对测序结果进行分析,重新设计两端含有EcoRI和HindIII酶切位点的表达引物,利用PCR扩增得到了甘油脱水酶基因,该基因片段长度为1674bp,编码558个氨基酸。将所得片段定向克隆到pET28b载体中,并转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中。经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳,在约65kD处检测出一蛋白表达条带,另外还对该重组菌进行比活力测定,最高比活力可达1.14U/mg,比野生型菌株提高了86.88%。