连作障碍与根际微生态研究Ⅰ.根系分泌物及其生态效应

作物、蔬菜、果树以及苗木长期连作后,皆出现生长衰退和产量降低．许多研究结果表明,连作条件下土壤生态环境对植物生长有很大的影响,尤以植物残体与病原微生物的分解产物,对植物有致毒作用,并影响植物根系分泌物正常代谢,以致于发生自毒作用．本文围绕根系分泌物与根际微生态的相互关系,系统地介绍连作障碍条件下,影响根系分泌物的环境因素（土壤空气、湿度、养分与微生物）、活性物质（自身毒素、残体分解物、微生物产生毒素）、土壤病原菌等的根际效应,为深入研究根系分泌物与连作障碍的相互作用机制提供启示．     

利用转基因烟草确定AtELHYPRP2蛋白对赤霉菌的抗性及其亚细胞定位特征

采用遗传转化技术获得了整合有拟南芥AtELHYPRP2(EARLI1-LIKE HYBRID PROLINE-RICH PROTEIN 2,AT4G12500)基因的转基因烟草株系,研究了该基因编码蛋白对真菌病原体赤霉菌的抗性及其亚细胞定位特征。以拟南芥Col-0生态型基因组DNA为模板,通过聚合酶链反应扩增AtELHYPRP2基因编码序列,经限制性酶切后连接至pCAMBIA1302载体,构建产生pCAMBIA1302-AtELHYPRP2-GFP融合表达载体。进一步采用农杆菌LBA4404转化烟草叶片外植体,筛选得到转基因烟草植株。RT-PCR、Western blotting印迹分析结果显示,AtELHYPRP2基因在转化体中可以有效表达。激光共聚焦显微观察发现AtELHYPRP2-GFP融合蛋白产生的绿色荧光与碘化丙啶染色后产生的红色荧光能够重合,说明AtELHYPRP2蛋白定位于细胞表面。真菌侵染实验结果显示,组成性表达AtELHYPRP2基因能够增强烟草对赤霉菌的抗性,被侵染部位有明显的H2O2积累。转基因烟草植株中PR1基因的本底表达水平比野生型高,PR1和PR5基因的系统表达水平比野生型高,说明AtELHYPRP2基因可能在SAR反应中具有一定的作用。     

白浆土植物系统营养物质转化机制及其有效性研究Ⅳ.环境条件对土壤磷素有效性的影响

根际试验研究表明,水分、有机质、土壤酸度是影响白浆土磷素生物有效性的重要因子．调节土壤水分含量,能增强土壤中铁、铝磷酸盐的溶解,加速磷酸根离子从根际土壤向非根际土壤扩散．增加土壤有机质含量,降低了土壤对Ｐ 素的吸附自由能（ Ｋ 值） ,提高土壤中的速效磷含量．适量施用石灰,调节白浆土酸度,由于化学溶解作用的影响,促进了土壤中铁、铝磷酸盐的溶解,增强了土壤中磷素的生物有效性     

有机物料对白浆土金属氧化物形态转化和迁移的影响及其肥力效应

通过土柱淋溶试验研究了牧草粉腐解物对白浆土Ｆｅ、Ｍｎ、Ａｌ氧化物形态转化及剖面迁移的影响及其对土壤Ｐ素形态转化和有效性的影响．结果表明,加有机物料淋溶使土壤ＤＴＰＡ提取态或有机络合Ｆｅ、Ｍｎ、Ａｌ氧化物含量显著上升;有效磷含量也极显著上升,主要在于铝磷和铁磷含量的增加;白浆层土壤中有效态磷及无机磷各形态均随着腐熟牧草粉用量的加大而极显著地升高,表层土壤中有效态磷、铝磷、铁磷的变化也与加入的腐熟牧草粉极显著正相关．土壤有效态磷、铝磷、铁磷与ＤＴＰＡ提取态和有机络合态Ｆｅ、Ｍｎ显著或极显著相关,但在表层土壤磷素各形态与ＤＴＰＡ及焦磷酸钠提取的Ａｌ呈极显著负相关,而白浆层却是极显著正相关．     

连作障碍与根际微生态研究Ⅱ.根系分泌物与酚酸物质

阐述了作物主要根系分泌物与作物种类、生长期以及与所处环境的关系。并从植物的残体分解、作物根系的分泌等方面论述了土壤中酚酸物质的来源、存在形态、吸附机理及其对作物生长发育与土壤生物活性的影响与机制。     

胡麻专化型尖孢镰刀菌ISSR-PCR最佳反应体系的建立

采用正交试验设计原理,对尖孢镰刀菌ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素进行优化筛选,确立了适合尖孢镰刀菌ISSR分析的反应体系,即25μL PCR反应体积中合有20 ng模板DNA、1 U Taq酶、0.4 μmol/L引物、0.2 mmol/LdNTPs、4.0 mmol/L Mg2+和2.5 μL 10 × buffer.PCR反应最佳退火温度根据引物而定,在此基础上筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.此研究为今后利用ISSR技术分析尖孢镰刀菌遗传多样性和群体结构奠定了基础.     

苜蓿根癌农杆菌转化系原生质体培养研究

首蒂是一种重要的豆科牧草。1980年,Kao等首次由首精叶向原生质体通过胚状体途径再生植株获得成功'",此后有关首请原生质体再生植株的报道已经涉及很多不同品种'。本工作对首带胭脂碱型农杆菌转化愈伤组织进行了原生质体培养,建立起一种简便有效的培养方法;并分析了碘乙酸胺对原生质体的作用,为融合实验打下了基础。1材料与方洁以本实验室得到的首精（Medicago。tiva）根瘤农杆菌（Agrohacteriumtumdeciens）702菌株转化系为材料。取2g转代12d的颗粒状黄绿色愈伤组织转人10mL酶液,于黑暗、25C、50r／min条件下游离6h。酶液组成为2…     

发根农杆菌A4菌株转化苜蓿悬浮培养物

将苜蓿无菌苗下胚轴切割后,在附加２ｍｇ／Ｌ２,４Ｄ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织。愈伤组织在附加０５ｍｇ／Ｌ２,４Ｄ的ＳＨ培养基中悬浮培养。悬浮培养物在用于转化之前,用０４５ｍｏｌ／Ｌ甘露醇处理１ｈ,然后用０１６ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ洗涤两次。预处理后的悬浮培养物用ＳＨ培养基悬浮（１０ｍｌ／ｇ悬浮培养物）,再加０２ｍｌ农杆菌悬浮液,于２５±２℃共培养２ｄ。共培养的悬浮培养物洗涤后在附加０５ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素的无激素培养基上选择培养。悬浮培养天数、悬浮培养基激素组成和选择培养基种类明显影响转化频率。纸电泳分析表明７０％的转化体可以合成农杆碱和甘露碱。染色体观察显示转化组织细胞存在严重的数目和结构变异     

Regeneration of intergeneric somatic hybrids by protoplast fusion between Onobrychis viciaefolia and Medicago sativa

Protoplast fusion was induced between sainfoin and alfalfa by an improved polyethyleneglycol (PEG) method. The intergeneric somatic calluses were selected based on complementation of hydroxyproline-resistance of sainfoin and hormone autonomy growth of alfalfa transformation cell line. 17 somatic hybrid plantlets were regenerat-ed. PEG could induce the tight agglutination of protoplasts. During diluting and washing process, cyclization of the linked membrane and formation of vesicle-like structures were observed, resulting in protoplast fusion. 5%-10% glycerol supplemented in the fusion inducing solution markedly increased the frequency of heterogeneous fusion. Better fusion results were obtained when mixed protoplast suspension was dripped in petri dishes in which PEG solution was previously placed. Chromosome number of regenerated hybrid buds varied from 30 to 60. The genome of hybrids in-cluded the small chromosome from sainfoin and two chromosomes with two clear constrictions from alfalfa. The hybrid