基因差异表达研究方法的探讨--从DD-PCR到cDNA RDA

ＤＤ－ＰＣＲ和ｃＤＮＡ ＲＤＡ都是近年发展起来的新技术,它们被应用于生物及医学领域,在基因差异表达和筛选差异基因的研究中有着广泛的前景。本文论述了ＤＤ－ＰＣＲ及ｃＤＮＡ ＲＤＡ的基本技术策略,并对两者进行了比较分析。     

早老蛋白(Presenilins)功能研究进展

编码早老蛋白（Ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎｓ,ＰＳｓ）的基因ｐｓ－１、ｐｓ－２被认为是构成早发家族性老年痴呆（ｅａｒｌｙ－ｏｎｓｅｔ ｆａｍｉｌｉａｌ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ,ＦＡＤ）的主要致病基因。早老蛋白具有８个跨膜区的结构,在神经系统广泛表达。其功能尚未完全明确,最近几年的研究主要集中在早老蛋白与淀粉样沉淀前体蛋白（ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＡＰＰ）的切割、     

水稻品种抗性对褐飞虱和白背飞虱种群动态的影响

用ＴＮ１、Ｎ２２、ＡｓＤ７和Ｐｔｂ３３等４个抗虫性差异明显的水稻品种测定了褐飞虱和白背飞虱在它们上面的栖息率、落卵量、卵存活率、若虫存活和发育状况,以及后代种群数量表现。结果表明,Ｐｔｂ３３通过减少２种飞虱的栖息率、落卵量,降低卵和若虫存活率,延长若虫的发育时间,抑制后代的种群数量增长,表现出明显的抗性。Ｎ２２对白背飞虱、ＡｓＤ７对褐飞虱的后代种群建立与发展均表现明显的抑制作用。２种飞虱在ＴＮ１上     

pLNCX-pemt2重组载体的构建及pemt2基因在大鼠肝癌CBRH-7919细胞中的表达

为进一步研究 pemt2对肝癌细胞生长抑制的作用机制提供方便的实验模型 ,构建了p LNCX- pemt2重组体 .将目的基因 pemt2连接入含有 neo抗性基因的真核细胞表达载体 p LNCX中 ,构建 p LNCX- pemt2重组子 ,并用磷酸钙沉淀法将其转入大鼠肝癌 CBRH- 791 9细胞中 ,应用PCR、Western印迹及 [3 H]SAM参入等技术对其转染、表达及活性进行鉴定 .转染 p LNCX- pemt2的大鼠肝癌细胞 ,PEMT2成功表达 (分子量为 2 2 .5k D) ;高表达克隆 PEMT2的表达量比对照组高约 5倍 ,其活性比对照组高 2 .1倍 ;细胞生长的倍增时间从 2 1 .54± 7.0 8h延长到 43.2 2± 7.1 1h.结果表明 ,p LNCX- pemt2重组体转入肝癌细胞后 ,PEMT2蛋白得到高效表达 ,明显抑制肝癌细胞生长 .     

君子兰组织培养

君子兰幼苗茎、叶均易于诱导愈伤组织;在诱导培养基上继代培养,既可使愈伤组织扩大也可促进芽分化成苗。     

RNA和蛋白质合成抑制剂对番茄种子吸湿-回干抗吸胀冷害效应的影响(简报)

吸湿－回干处理明显增强低温吸胀番茄种子的超氧物歧化酶、过氧化氢酶活性和呼吸速率,进而提高种子活力。在吸湿－回干处理的吸湿过程中加入ＲＮＡ和蛋白质合成抑制剂,虽然超氧物歧化酶和过氧化氢酶活性仍有增强,但种子的呼吸速率和活力显著降低。     

自桑兰叶甲分离出的一种微孢子虫(Mic-Ⅰ)的研究

从广州郊区罗岗的桑园及菜地捕捉到的桑兰叶甲Mimastra cyanura Hope成虫体中分离到一种卵圆形的微孢子虫（简称Mic-Ⅰ）。孢子大小为(3.35±0.46)×(1.96±0.17) μm;孢子具单核、双核两种类型;极丝10～11圈;孢子表面抗原的血清学类型与家蚕微粒子虫Nosema bombycis孢子不同;在家蚕Bombyx mori体内以两种不同的生活史发育,发育过程符合变态孢虫属Vairimorpha微孢子虫发育特征。Mic-Ⅰ微孢子虫对家蚕具强病原性,对斜纹夜蛾Prodenia litura和小菜蛾Plutella xylostella也有感染能力。     

Characterization of Energy-Transduction in Thermal Pretreated Chloroplast from Spinach

Characterization of energy-transduction on the chloroplast thylakoid membranes from spinach (Spinacia oleracea L.) after thermal pretreatment was investigated. The related reactions of energy-transduction in chloroplasts were seriously affected by thermal pretreatment. The results were obtained as following: (1) The rate of cyclic photophosphorylation declined when the pretreatment temperature increased in the range of 25 to 45 ℃. (2) The thermal pretreatment led to a decrease of the activity of thylakoid membrane-bounded ATPase. (3) Proton uptake of chloroplasts and the fluorescence quenching of 9-aminoacridine (9-AA) in thylakoid membrane decreased after the thermal pretreatment, but addition of dicyclohexylcarbodiimide (DCCD) could partially restore the fluorescence quenching of 9-AA. (4) Both the rates of fast phase in electrochroism absorption change at 515 nm and the millisecond delayed light emission (ms-DLE) of chloroplast showed a progressive decrease upon raising the temperature of pretreatment. (5) Immunbloting analysis showed that the thermal pretreatment caused the changes of protein content and the electrophoresis mobility of thylakoid membrane-bound ATPase and its α-subunit. (6) If the temperature of pretreatment were higher than 33 ℃, oxygen uptake of PSⅠ -mediated in the samples was rapidly inhibited, but addition of sinapine into the reaction medium could partially restore the ability of oxygen uptake in the samples. These results are briefly discussed in relation to the change of permeability of thylakoid membranes, the dissociation of coupling factor complex as well as accumulation of the radicals in the thylakoid membranes after thermal pretreatment.     

贵州省安龙县狂犬病的流行病学研究

为了探讨局部地区暴发流行的因素,对2004年与2005年间在贵州省安龙县及其周边发生的人间狂犬病进行个案调查,用直接免疫荧光法检测犬脑组织中的狂犬病毒抗原,用RT-PCR法扩增G基因片段,测定核苷酸序列并构建系统发生树进行遗传特征分析.自1994-2003年安龙县报告无人间狂犬病疫情,但于2004与2005年分别报告44例与27例人狂犬病.71例狂犬病患者中68人被犬所伤,3人被猫所伤.在有完整记录的69例患者中,潜伏期平均为47.5d(10～282),13例狂犬病患者的潜伏期≤15d(18.84%);32例的潜伏期≤30d(46.38%),尤其是在2004年的患者中,潜伏期≤20d的病例有13例,占30%.2005年在疫点周围采集的85只犬脑组织中,5只犬脑组织狂犬病毒抗原阳性,阳性率为5.88%.A13株与A48株病毒之间的G基因核苷酸序列同源性为86.5%,与已报道病毒株比较发现,A13株与广西分离株有最高的同源性,而A48株却与印度尼西亚分离株SN01-23的同源性最高.比较分析两株病毒G基因编码的氨基酸序列,发现包括GⅠ、GⅡ,以及GⅢ抗原位点内的区间,A13与A48分别有19和28个氨基酸位点发生了氨基酸的替代.用全G基因核苷酸序列进行系统分析发现,两株毒株全为Ⅰ型狂犬病毒.结果表明引起安龙县的狂犬病流行的病毒不是新型狂犬病毒,犬饲养量大与病毒携带率高是狂犬病发病暴发流行的直接原因.     

一种促分裂活性降低的hbFGF突变体的表达及纯化(英文)

为了降低由人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的广谱促分裂活性引起的潜在副作用,用中性氨基酸丙氨酸取代了hbFGF第108位的丝氨酸,构建了促分裂活性降低的hbFGF突变体(mhbFGF)。IPTG诱导突变体在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。mhbFGF的表达量约为全菌体蛋白的30％。通过离子交换和肝素亲和层析从菌体上清中纯化目标蛋白。MTT法检测促分裂活性表明,mhbFGF的促分裂活性显著低于野生型hbFGF。纯化的:mhbFGF可用于进一步的药效和安全性研究。