人的原代上皮角质形成细胞和永生化的上皮角质形成细胞HaCaT的增殖能力的比较

目的：筛选适合充当组织工程皮肤的种子细胞,比较原代培养的人原代上皮角质形成细胞和永生化的上皮角质形成细胞HaCaT的增值能力。方法：将两种细胞（小儿包皮环切术后的组织培养表皮角质形成细胞,永生化的上皮角质形成细胞HaCaT）,分别接种于96孔板,通过MTT检测细胞1,3,5,7,9,11天的生长情况;当两种细胞融合至60%时分别取1×106个细胞,通过流式细胞检测细胞的周期。结果：永生化的上皮角质形成细胞HaCaT每隔一天即可传代一次,原代上皮角质形成细胞每3天传代一次;细胞周期：永生化上皮角质形成细胞HaCaT的G1期和S期的比例高于原代上皮角质形成细胞。生长曲线：MTT检测两种细胞1,3,5,7,9,11的生长情况,永生化的上皮角质形成细胞HaCaT的生长速度明显高于原代上皮角质形成细胞。结论：永生化上皮角质形成细胞HaCaT的增殖能力要高于原代培养的上皮角质形成细胞。     

重组人胰岛新生相关蛋白的高水平表达与纯化

通过RT-PCR体外扩增目的基因胰岛新生相关蛋白(islet neogenesis associated protein,INGAP),并将其克隆入原核表达载体pET22b(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.表达的目标蛋白主要以包涵体形式存在,洗涤杂蛋白后用尿素溶解,经Heparin Agrose亲合柱层析分离后,再用Superdex75凝胶过滤层析进一步纯化.纯化后的INGAP皮下注射免疫家兔,制备兔抗INGAP血清,采用免疫双扩、ELISA评价INGAP的免疫活性.结果显示INGAP表达量高达菌体总蛋白的40%左右,经HPLC测定,分离纯化后的目标蛋白纯度达到98.81%,且具有良好的免疫原性.     

桂东南柳杉人工林碳氮储量及其分配格局

以广西六万林场31年生3种密度柳杉(Cryptomeria fortunei)人工林为对象,对其碳、氮储量以及碳、氮分配格局进行研究。结果表明:低、中、高3种密度的柳杉人工林生态系统碳储量分别为355.72、417.21和378.71t.hm-2,氮储量分别为17.91、22.13和19.99t.hm-2,均表现为中密度﹥高密度﹥低密度;低、中、高密度植被层碳储量分别为127.71、101.98和100.12t.hm-2,分别为土壤层碳储量的56.01%、32.35%、35.94%,表现为低密度﹥中密度﹥高密度;植被层氮储量分别为1048.85、674.26和705.69kg.hm-2,为土壤层氮储量的6.22%、3.14%、3.66%,则表现为低密度﹥高密度﹥中密度。充分说明桂东南柳杉人工林生态系的碳、氮储量受林分密度的影响,且碳、氮储量主要分布在土壤层。     

Molecular cloning and characterization of a novel gene encoding zinc finger protein from <Emphasis Type="Italic">Medicago sativa</Emphasis> L.

A suppression subtraction hybridization (SSH) cDNA library had been constructed to identify differentially expressed genes. Based on the sequence of an expressed sequence tag (EST) homologous to Pisum sativum zinc finger protein mRNA (Accession number: AF160911), the full-length cDNA of 1,676 nucleotides was cloned from alfalfa by rapid amplification of cDNA ends (RACE). It was designated as MsZFN, encoding a protein of 418 amino acids. The amino acid sequence compared by blast revealed high homology with zinc finger protein of other plants. Sequence comparison showed that there were five conserved typical zinc finger motifs, and one sugar transfer protein signature. The calculated molecular weight of the MsZFN protein was 45.8 k Da, and theoretical isoelectric point was 8.13. The MsZFN localized in nucleus. Under normal growth conditions, differential expression of MsZFN exhibited that the expression was the highest in leaf and the lowest in root. MsZFN was quickly and transiently induced by NaCl treatment and reached its maximum at 30 min.     

有丝分裂诱导基因6(MIG-6)可诱导人成纤维细胞发生提前衰老

年老细胞许多基因表达发生变化,其中有些基因的表达可以诱导成纤维细胞早衰.癌基因诱导的衰老(oncogene-induced senescence,OIS)是由一些连续癌症基因的信号,以阻止细胞增殖造成的反应.有丝分裂诱导基因6(mitogen-inducible gene-6,MIG-6)是一个抑癌基因,是ErbB RTK通路的负调控因子,抑制肿瘤细胞增殖.本文以人胚肺二倍体成纤维细胞为对象,研究MIG-6蛋白在细胞衰老中的作用.通过Western印迹发现,在老年细胞中MIG-6表达升高.利用逆转录病毒载体将MIG-6基因转入年轻的人胚肺二倍体成纤维细胞中,通过Western印迹方法检测是否过表达MIG-6,然后通过SA-β-gal染色检测其阳性率,发现转染MIG-6基因后的成纤维细胞SA-β-gal染色率明显高于对照组,生长缓慢.实验结果证实,MIG-6蛋白可以诱导人二倍体成纤维细胞提前衰老.     

血压控制水平与自发性脑出血后再出血的相关性分析

目的：探讨自发性脑出血后再次出血与血压控制水平的相关性;方法：按照研究条件严格遴选2006年1月．2010年12月间,我科收治的高血压脑出血患者共计221例,依据其血压控制水平,将其分为〈140／80mmHg,140／80mmHg．160／100mmHg两个组别,分别总结两组发生再出血的病例数,对其发生率进行统计学分析（卡方检验）,以P〈0．05为具有统计学意义;结果：两个组中,患者年龄、性别、GCS评分、出血部位、首次出血量、血肿密度、血肿形状等因素完全匹配,无明显统计学差异（P〉0．05）,而两组血压控制水平与再出血具有明显的相关性（P〈0．05）,血压控制水平〈140／80mmHg时,再出血的发生率为15．64％,明显低于140／80mmHg-160／100mmHg组的27．17％;结论：高血压脑出血后,患者血压水平控制在正常血压范围内,有望降低患者发生再次出血的风险。     

脑磁图：从标量探测迈向矢量探测

脑磁图：从标量探测迈向矢量探测     

透析式洗涤冰冻红细胞去除白细胞和血小板的方法

目的：用低速离心的方法减少悬浮红细胞中自细胞和血小板的数量,使透析式洗涤机洗涤的冰冻红细胞中白细胞和血小板的残留量小于1％。方法：分别选用低速离心（700和500r／min）和常规离心（3800r／min）全血制备悬浮红细胞,计算白细胞和血小板的清除率;甘油低温冰冻保存,透析式冰冻红细胞洗涤机洗涤冰冻红细胞,对洗涤后的红细胞进行质量检测。结果：500r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为53.82±6.83和85.23±4.21;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为0.843±0.058和0.903±0.035。700r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为23.38±2.36和62.61±3.82;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为0.983±0.024和1.021±0.045。3800r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为9.82±4.12和6.39±3.26;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为3.839±2.896和3.528±2.689。结论：用500r／min离心全血制备的悬浮红细胞,经甘油低温冻存,透析式洗涤机洗涤后,血小板和白细胞的残留量等各项指标均符合国家标准。     

不同光照条件下外源水杨酸对浒苔响应紫外辐射胁迫的影响

为研究不同光照条件下,外源水杨酸(SA)和紫外辐射(UV)对海洋绿藻浒苔的复合效应,在两个光照强度(高光:160 μmol·m^-2·s^-1;低光:70 μmol·m^-2·s^-1)条件下,设置对照(CK)、SA、UV及UV+SA处理(UV=3.2 W·m^-2、SA=10 μg·mL^-1),处理3 d后测定浒苔生长、叶绿素荧光参数、光合放氧速率、超氧化物歧化酶活性、可溶性糖和可溶性蛋白含量等的变化,探讨光照强度、UV及SA的复合效应.结果表明: 低光无UV条件下,SA会促进浒苔生长,降低浒苔叶绿素a(Chl a)和可溶性蛋白含量;高光无UV条件下, SA会抑制其生长,但显著提高了Chl a含量、呼吸速率、光合放氧速率、可溶性糖和可溶性蛋白含量;高光和UV条件下, UV+SA显著促进浒苔生长,提高Chl a和可溶性糖含量;低光和UV条件下,与UV相比,UV+SA提高了浒苔最大光化学效率(F_v/F_m)和可溶性蛋白含量,涨幅分别为139.8%和32.2%.外源SA的加入在一定程度上缓解了UV对浒苔的胁迫作用,且在高光条件下的效果更为显著.     

人嗅觉黏膜间充质干细胞来源的外泌体促进内皮细胞的血管生成

外泌体作为是细胞旁分泌的重要介质,在促血管形成方面有重要作用。在我们前期研究中,已经成功从嗅黏膜间充质干细胞（olfactory mucosa mesenchymal stem cells,OM-MSCs）分离、鉴定了其外泌体,然而,OM-MSCs源外泌体对血管生成的影响尚不清楚。本研究旨在探讨OM-MSCs来源外泌体对内皮细胞血管生成能力的影响。采用PKH67 荧光标记OM-MSCs源外泌体,与人脑微血管内皮细胞（human brain microvessel endothelial cells, HBMECs) 共培养,观察 OM-MSCs外泌体能否进入 HBMECs。采用CCK-8法、Transwell 迁移实验和小管实验,观察 OM-MSCs外泌体对 HBMECs增殖、迁移及管状结构形成的影响。采用基质胶塞实验及CD31免疫荧光,观察OM-MSCs外泌体在体内对血管生成的影响。上述研究均以等量 PBS 作为对照。结果提示,OM-MSCs外泌体可被HBMECs 摄取。CCK-8 法检测显示,在处理1、2、3、4、5 d各时间点,实验组细胞增殖均优于对照组（1.32±0.14 vs. 0.98±0.04, 1.36±0.14 vs.1.04±0.06, 1.75±0.18 vs.1.33±0.11, 2.16±0.11 vs.1.50±0.19, 2.71±0.11 vs. 1.81±0.20, P<0.01）。Transwell 实验结果显示,实验组跨膜迁移细胞吸光度值较对照组显著增多（1.12±0.05 vs.0.02±0.02, P<0.05）。在体外小管实验中,从节点、交叉点、网眼数、血管分支数和总长度5个方面,实验组均高于空白对照组（374.33±127.74 vs. 193.33±44.79, 104.56±33.07 vs. 54.33±11.65, 20.11±11.20 vs. 7.56±3.64, 81.67±19.07 vs. 57.00±13.02, 11466.22±2781.03 vs. 8544.00±1848.61, P<0.05）;在体内实验中,实验组成血管及CD31阳性率（%）亦显著高于对照组（85.00±5.57 vs.8.00±2.08, P<0.05）。本研究表明：OM-MSCs外泌体可促进 HBMECs 增殖、迁移及管样结构形成,提示OM-MSCs外泌体可促进血管新生。