脑外伤后ERK信号通路调节AQP4及其锚定蛋白DG的表达

脑外伤是青年人最主要的致死与致残疾病。脑水肿是脑外伤的严重并发症,其形成与脑内最主要的水通道蛋白4（aquaporin4, AQP4）关系密切。AQP4对水的转运与其在星形胶质细胞胞膜上的极性分布有关。肌营养不良-肌萎缩蛋白复合物（dystrophin-dystroglycan complex, DDC）可能与AQP4的锚定及极性分布有关。肌萎缩蛋白（dystroglycan, DG）是该复合物的核心成员,但其对AQP4锚定及极性表达的作用目前并不清楚。脑外伤后,AQP4的表达改变是否与DG有关,其二者表达变化的调控机制均不清楚。为了揭示以上科学问题,为临床治疗脑外伤后脑水肿提供理论依据,分别进行在体、离体及离体干扰实验。研究发现脑外伤后,AQP4、α-DG、β-DG的表达,于6 h增至峰值,后逐渐减弱,于24 h降至最低,48 h再次表达上调。在此过程中,其表达变化规律虽基本一致,但确实存在不一致的现象。排除其他因素干扰,在星形胶质细胞划伤后,DG与AQP4及p-ERK的表达改变完全一致;抑制及激活ERK信号通路后,分别导致DG与AQP4的表达下调及上调。以上结果证实,脑外伤后,DG参与AQP4在星形胶质细胞的锚定,但并非AQP4极性表达的专属锚定蛋白质;机械损伤后,早期ERK信号通路激活,并上调DG及AQP4的表达。     

重组人胰岛新生相关蛋白的高水平表达与纯化

通过RT-PCR体外扩增目的基因胰岛新生相关蛋白(islet neogenesis associated protein,INGAP),并将其克隆入原核表达载体pET22b(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.表达的目标蛋白主要以包涵体形式存在,洗涤杂蛋白后用尿素溶解,经Heparin Agrose亲合柱层析分离后,再用Superdex75凝胶过滤层析进一步纯化.纯化后的INGAP皮下注射免疫家兔,制备兔抗INGAP血清,采用免疫双扩、ELISA评价INGAP的免疫活性.结果显示INGAP表达量高达菌体总蛋白的40%左右,经HPLC测定,分离纯化后的目标蛋白纯度达到98.81%,且具有良好的免疫原性.     

小剂量阿奇霉素联合吸入布地奈德和N-乙酰半胱氨酸治疗特发性肺纤维化的临床疗效分析

目的:观察小剂量阿奇霉素联合吸入布地奈德和N-乙酰半胱氨酸对特发性肺纤维化(IPF)患者肺功能及支气管肺泡灌洗液炎症因子表达的影响。方法:随机将56例确诊为IPF的住院患者分为对照组和治疗组,对照组给予常规治疗,吸氧,戒烟,吸入布地奈德及乙酰半胱氨酸;治疗组在常规治疗基础上加服小剂量阿奇霉素片。动态观察两组患者治疗3、6个月的疗效及肺功能的改善情况;完成2个疗程(6个月)治疗后,检测和比较两组支气管肺泡灌洗液相关炎症因子水平的变化。结果:治疗3个月时,两组患者的动脉血氧分压(PO2)、肺活量(VC)、1秒钟用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%pred)、最大通气量占预计值百分比(MVV%pred)、单位肺泡容积的一氧化碳弥散量占预计值百分比(DLCO/VA%pred)均较治疗前显著增加(P0.05);治疗6个月时,治疗组的有效率(20/26,76.9%)明显高于对照组(14/30,46.7%),且PO2、VC、FEV1%pred、MVV%pred及DLCO/VA%pred等肺功能指标均显著高于对照组(P0.05);对照组支气管肺泡灌洗液TNF-α、IL-8浓度均较治疗前降低(P0.05),IL-4、IL-10、IFN-γ浓度较治疗前无明显变化;而治疗组支气管肺泡灌洗液TNF-α、IL-8、IL-4、IL-10浓度均较治疗前降低,IFN-γ浓度较治疗前明显增加(P0.05)。结论:阿奇霉素联合吸入布地奈德和N-乙酰半胱氨酸可能通过改变支气管肺泡灌洗液IFN-γ等炎症因子浓度有效改善IPF患者的肺功能。     

桂东南柳杉人工林碳氮储量及其分配格局

以广西六万林场31年生3种密度柳杉(Cryptomeria fortunei)人工林为对象,对其碳、氮储量以及碳、氮分配格局进行研究。结果表明:低、中、高3种密度的柳杉人工林生态系统碳储量分别为355.72、417.21和378.71t.hm-2,氮储量分别为17.91、22.13和19.99t.hm-2,均表现为中密度﹥高密度﹥低密度;低、中、高密度植被层碳储量分别为127.71、101.98和100.12t.hm-2,分别为土壤层碳储量的56.01%、32.35%、35.94%,表现为低密度﹥中密度﹥高密度;植被层氮储量分别为1048.85、674.26和705.69kg.hm-2,为土壤层氮储量的6.22%、3.14%、3.66%,则表现为低密度﹥高密度﹥中密度。充分说明桂东南柳杉人工林生态系的碳、氮储量受林分密度的影响,且碳、氮储量主要分布在土壤层。     

抗牛PrP多肽单克隆抗体的制备及其在牛PrP 检测中的应用

为获得广谱抗哺乳类动物PrP单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb), 用牛朊蛋白(prion protein, PrP)多肽(209~228 aa)与匙孔槭血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)偶联物免疫Balb/C小鼠. 经细胞融合和克隆后获得针对上述多肽的杂交瘤细胞株. 分别用Western blot和免疫组化(immunohistochemistry, IHC)的方法检测这些McAbs与重组人(human, Hu)、牛(bovine, Bo)、仓鼠(hamster, Ha)PrP蛋白、牛脑组织中的正常朊蛋白(cellular PrP, PrPc)和致病性朊蛋白(scrapie of prion, PrPSc)的反应性. 本文为制备高效价抗PrP McAb提供了一个简单、易行的方法. 制备的抗体可用于研究哺乳类PrP生物学特性, 检测可传播性海绵样脑病, 特别是对牛海绵样脑病的诊断具有重要意义.     

透析式洗涤冰冻红细胞去除白细胞和血小板的方法

目的：用低速离心的方法减少悬浮红细胞中自细胞和血小板的数量,使透析式洗涤机洗涤的冰冻红细胞中白细胞和血小板的残留量小于1％。方法：分别选用低速离心（700和500r／min）和常规离心（3800r／min）全血制备悬浮红细胞,计算白细胞和血小板的清除率;甘油低温冰冻保存,透析式冰冻红细胞洗涤机洗涤冰冻红细胞,对洗涤后的红细胞进行质量检测。结果：500r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为53.82±6.83和85.23±4.21;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为0.843±0.058和0.903±0.035。700r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为23.38±2.36和62.61±3.82;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为0.983±0.024和1.021±0.045。3800r／min离心后白细胞和血小板的清除率（％）分别为9.82±4.12和6.39±3.26;洗涤后的冰冻红细胞中白细胞和血小板残留量（％）分别为3.839±2.896和3.528±2.689。结论：用500r／min离心全血制备的悬浮红细胞,经甘油低温冻存,透析式洗涤机洗涤后,血小板和白细胞的残留量等各项指标均符合国家标准。     

蛛网结构性能及其适应性

蛛网是蜘蛛的捕食工具,蛛网的结构性能不仅影响蜘蛛的捕食效率,也关系着蜘蛛的捕食投入。在不同的内外环境条件影响下,蜘蛛会通过蛛网结构性能上的相应变化来调整捕食策略和维持网结构的稳定性。本文主要综述了蛛网的结构性能以及蜘蛛通过蛛网结构性能表现出的对环境因子的适应性。     

离子束介导玉米DNA影响水稻幼苗根系蛋白水解酶的表达

利用离子束介导法把玉米DNA导入水稻豫粳6号种子胚中,通过复性电泳技术,分析水稻幼苗根系中蛋白水解酶在pH4.5、pH7.0和pH8.5的表达情况.结果表明:(1)在不同pH条件下处理,各蛋白水解酶种类与活性存在差异,酸性、中性、碱性条件下,检到的蛋白水解酶酶带依次增多,酸性条件下酶活性较弱,中性和碱性条件下酶活性较强;(2)在3种pH条件下,离子束辐照处理均有部分蛋白水解酶带缺失,同时,在中性和碱性条件下检出50kD新酶带,说明离子束辐照可影响水稻蛋白水解酶表达;(3)离子束介导玉米DNA水稻幼苗根系中,pH4.5时无新蛋白水解酶酶带检出,pH7.0和pH8.5时均检到多条新酶带且活性较强.说明离子束介导玉米DNA引起水稻幼根蛋白水解酶表达发生变化.     

有丝分裂诱导基因6(MIG-6)可诱导人成纤维细胞发生提前衰老

年老细胞许多基因表达发生变化,其中有些基因的表达可以诱导成纤维细胞早衰.癌基因诱导的衰老(oncogene-induced senescence,OIS)是由一些连续癌症基因的信号,以阻止细胞增殖造成的反应.有丝分裂诱导基因6(mitogen-inducible gene-6,MIG-6)是一个抑癌基因,是ErbB RTK通路的负调控因子,抑制肿瘤细胞增殖.本文以人胚肺二倍体成纤维细胞为对象,研究MIG-6蛋白在细胞衰老中的作用.通过Western印迹发现,在老年细胞中MIG-6表达升高.利用逆转录病毒载体将MIG-6基因转入年轻的人胚肺二倍体成纤维细胞中,通过Western印迹方法检测是否过表达MIG-6,然后通过SA-β-gal染色检测其阳性率,发现转染MIG-6基因后的成纤维细胞SA-β-gal染色率明显高于对照组,生长缓慢.实验结果证实,MIG-6蛋白可以诱导人二倍体成纤维细胞提前衰老.     

Characterization of the multiple absorbed constituents in rats after oral administration of Chai-Huang decoction by liquid chromatography coupled with electrospray-ionization mass spectrometry

A rapid, sensitive, and specific method by high‐performance liquid chromatography (HPLC) coupled to diode‐array detection (DAD) and tandem mass spectrometry (MS) techniques was developed for the identification of absorbed constituents and their metabolites in rats after the oral administration of a Chai‐Huang decoction (CHD), which consists of Bupleurum chinense and Scutellaria baicalensis in the proportion 1 : 1 (w/w). By comparing their retention times and MS data with those of authentic compounds and published data, a total of 14 compounds were identified in the CHD samples. In addition, eleven and seven compounds were characterized in the urine and serum samples of the rats, respectively. The results indicated that the main absorbed constituents were chrysin‐6‐C‐arabinosyl‐8‐C‐glucoside, chrysin‐6‐C‐glucosyl‐8‐C‐arabinoside, baicalin, wogonin‐5‐O‐glucoside, oroxylin A‐7‐O‐glucuronide, wogonoside, saikosaponin A, saikosaponin C, saikosaponin D, baicalein, and wogonin. These compounds might be responsible for the curative effects of the CHD. The findings demonstrated that the proposed method could be used to rapidly and simultaneously analyze and screen the multiple absorbed bioactive constituents in a formula of traditional Chinese medicines (TCM). This is very important not only for the pharmaceutical discovery process and the quality control of crude drugs but also to explain the mechanisms of action of TCM.