产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及酶学特性分析

【目的】利用筛选培养基,从福建沿海潮间带泥样中分离筛选产壳聚糖酶的菌株,并研究菌株的产酶特性。【方法】通过形态学观察,结合26S rDNA序列进行分类鉴定,采用DNS法测定酶活力。【结果】筛选得到产壳聚糖酶的菌株KQ-1002与草酸青霉(Penicillium oxalicum)的同源性为99%,并初步鉴定为青霉属的一种。发酵培养的最适温度为30°C,最适碳源为1.0%水溶性壳聚糖,最适氮源为1.87%(NH4)2SO4,最适pH为6.0。该菌株液体发酵培养72 h产壳聚糖酶活性最高,经优化后最高产酶量为18 U/mL。纯化后的壳聚糖酶经SDS-PAGE分析其分子量约40 kD。酶促反应最适pH为5.0,最适反应温度为55°C,Km值为1.293 g/L。在离子浓度为1.0×10 3mol/L时,金属离子Cu2+、Hg2+、Ag+对酶的活性均有强烈的抑制作用。壳聚糖酶对不同底物及脱乙酰度的壳聚糖具有不同的降解作用。【结论】筛选获得产壳聚糖酶的真菌菌株KQ-1002的壳聚糖酶活力经优化后提高了约7倍,是一株具有研究和应用潜力的产壳聚糖酶菌株。     

EV71感染抗病毒药物及疫苗研究进展

手足口病在世界多个地区,尤其是亚洲爆发并流行,且其感染率和死亡率逐年增高,危害十分严重。肠道病毒71(Enterovirus 71,EV71)是手足口病(Hand,foot,andmouth disease,HFMD)的主要病原体,以感染婴幼儿为主,其感染常伴随神经系统并发症,严重可导致儿童死亡。近年来,分子生物学和抗病毒研究方面取得的进展为EV71感染的预防及治疗提供了新的途径。本文对EV71病毒学特点及抗EV71药物的筛选、疫苗开发、RNA干扰等进行了综述,以期为相关研究提供参考。     

香菇酶解物对小鼠免疫及肠道菌群的影响研究

【目的】研究香菇酶解物对小鼠免疫及肠道菌群的影响。【方法】首先采用环磷酰胺(CY)造模法制作小鼠免疫抑制模型,然后对其中两组分别灌胃香菇未酶解物和香菇酶解物,最后观察疗效、测定免疫指标和试验小鼠肠道中细菌总数、大肠杆菌数、乳酸菌数和真菌总数等。【结果】香菇酶解物可使受免疫抑制的小鼠(活跃度、粪便、毛皮、体重)恢复到正常水平,促进免疫器官脾脏及胸腺的发育(P<0.05),增强腹腔巨噬细胞的吞噬活性(P<0.01)。同时提高小鼠肠道中以乳酸菌为主的有益菌数量(P<0.01),抑制大肠杆菌等致病菌的生长(P<0.01)。【结论】香菇酶解物可以提高小鼠的免疫功能,改善肠道菌群环境,对肠道功能有一定的调节作用,有较高的食用和药用价值。     

寡居种悦目金蛛若蛛群居机制初步研究

对寡居种悦目金蛛Argiope amoena若蛛群居生活对其结网的影响、温度和种群大小对若蛛存活率的影响、若蛛对限制性空间的利用及其扩散方式进行了观察和研究.结果表明,若蛛从卵袋出蛰后不经历群居扩散即具备结网能力,可结完整网,也具备在扩散前不进食水存活的能力;在变温条件下若蛛存活率要远远高于室温条件下的存活率,而在室温条件下若蛛开始死亡和半数死亡的时间比其聚居期长得多;若蛛主要通过群体空中扩散的方式进行扩散,可以减小能耗与敌害的威胁;不同种群大小的若蛛在限制性空间的分布均从第5d左右开始发生较大变化的,这与在空间不受限的条件下若蛛在第5d开始扩散的结果是一致的.据此我们推断:个体扩散代价最小化(包括御敌和能耗)和维持种群较高的生存率可能是寡居种悦目金蛛若蛛群居生活的主要原因.     

黄瓜类囊体不同膜制备物的类脂组成

由黄瓜类囊体及其基粒片层、间质片层、PSⅡ放氧颗粒和捕光色素蛋白复合体类脂组成的分析表明;各膜制备物均含有类囊体膜的5种类脂成分,除LHCⅡ外,其它均以MGDG含量为最高,其次是DGDG,在LHCⅡ所含类脂中,PG含量最高。SQDO除在LHCⅡ中含量稍低以外,在其它膜制备物中的含量没有明显的差异。类脂脂肪酸组成的分析可知,不同膜制备物中MGDG、DGDG和SQDG的脂肪酸组成没有明显差异,但PG的脂肪酸组成差异较明显。     

适用于种群遗传管理的小熊猫微卫星亲子鉴定体系的建立

由于标记缺失、生产记录不详、亲权关系不明及部分个体来源不清等历史问题,中国小熊猫圈养种群存在谱系错漏、近亲繁殖等风险。近年来,随着小熊猫种群规模不断扩大,管理者们对谱系的准确性提出了更高的需求,亲子鉴定工作也成为了研究的重点。本文采用26个微卫星标记,对国内3个小熊猫圈养种群进行了亲缘关系运算,完成了相关谱系的查错与整理。26个位点多态性与稳定性良好,联合非亲排除概率达到0.9999以上,可解决国内小熊猫圈养种群的各类亲子鉴定需求。在单亲未知或双亲未知的情况下,8或11个位点组合可实现亲子鉴定。5个位点组合可进行个体识别。在小熊猫圈养管理过程中,应用一套亲子鉴定体系对小熊猫圈养的谱系进行查漏补缺,有利于制定科学的配对计划、避免近亲繁殖,对小熊猫种群保护有着重要意义。     

人嗅觉黏膜间充质干细胞来源的外泌体促进内皮细胞的血管生成

外泌体作为是细胞旁分泌的重要介质,在促血管形成方面有重要作用。在我们前期研究中,已经成功从嗅黏膜间充质干细胞（olfactory mucosa mesenchymal stem cells,OM-MSCs）分离、鉴定了其外泌体,然而,OM-MSCs源外泌体对血管生成的影响尚不清楚。本研究旨在探讨OM-MSCs来源外泌体对内皮细胞血管生成能力的影响。采用PKH67 荧光标记OM-MSCs源外泌体,与人脑微血管内皮细胞（human brain microvessel endothelial cells, HBMECs) 共培养,观察 OM-MSCs外泌体能否进入 HBMECs。采用CCK-8法、Transwell 迁移实验和小管实验,观察 OM-MSCs外泌体对 HBMECs增殖、迁移及管状结构形成的影响。采用基质胶塞实验及CD31免疫荧光,观察OM-MSCs外泌体在体内对血管生成的影响。上述研究均以等量 PBS 作为对照。结果提示,OM-MSCs外泌体可被HBMECs 摄取。CCK-8 法检测显示,在处理1、2、3、4、5 d各时间点,实验组细胞增殖均优于对照组（1.32±0.14 vs. 0.98±0.04, 1.36±0.14 vs.1.04±0.06, 1.75±0.18 vs.1.33±0.11, 2.16±0.11 vs.1.50±0.19, 2.71±0.11 vs. 1.81±0.20, P<0.01）。Transwell 实验结果显示,实验组跨膜迁移细胞吸光度值较对照组显著增多（1.12±0.05 vs.0.02±0.02, P<0.05）。在体外小管实验中,从节点、交叉点、网眼数、血管分支数和总长度5个方面,实验组均高于空白对照组（374.33±127.74 vs. 193.33±44.79, 104.56±33.07 vs. 54.33±11.65, 20.11±11.20 vs. 7.56±3.64, 81.67±19.07 vs. 57.00±13.02, 11466.22±2781.03 vs. 8544.00±1848.61, P<0.05）;在体内实验中,实验组成血管及CD31阳性率（%）亦显著高于对照组（85.00±5.57 vs.8.00±2.08, P<0.05）。本研究表明：OM-MSCs外泌体可促进 HBMECs 增殖、迁移及管样结构形成,提示OM-MSCs外泌体可促进血管新生。     

Induction and identification of tetraploid <Emphasis Type="Italic">Hedychium coronarium</Emphasis> through thin cell layer culture

We describe an encapsulation–dehydration procedure with prefreezing steps for the cryopreservation of rhizome bud explants of Asparagus officinalis L. cv. Morado de Huétor. With this procedure, survival of Rhizome buds was at least 84 and 42% developed to complete plantlets at 8 weeks. Flow cytometry and EST-SSR molecular markers were used to assess genetic stability of the regenerated material. Effects of preculture time in a medium rich in sucrose and prefreezing treatments (0 °C or/and ??20 °C) on plant recovery were evaluated. Rhizome Buds of the “Morado de Huétor” landrace were incubated in preculture medium (MS?+?0.3 M sucrose) for 48 h, encapsulated in alginate beads and desiccated until a water content of 35%, prefrozen for one hour at 0 °C plus one hour at ? 20 °C, followed by cryopreservation in liquid nitrogen, and then were rewarmed and recovered in ARBM medium for 6 weeks and finally incubated in ARBM-0 for 4 weeks. Analyses of ploidy and molecular stability of plantlets recovered from cryopreserved rhizome buds of two selected genotypes showed no differences compared with the mother plants. Cryopreservation of RB explants of A. officinalis with this Encapsulation–Dehydration procedure will be useful in long-term preservation programs.     

Functions of VPA1418 and VPA0305 Catalase Genes in Growth of Vibrio parahaemolyticus under Oxidative Stress

The marine foodborne enteropathogen Vibrio parahaemolyticus has four putative catalase genes. The functions of two katE-homologous genes, katE1 (VPA1418) and katE2 (VPA0305), in the growth of this bacterium were examined using gene deletion mutants with or without complementary genes. The growth of the mutant strains in static or shaken cultures in a rich medium at 37°C or at low temperatures (12 and 4°C), with or without competition from Escherichia coli, did not differ from that of the parent strain. When 175 μM extrinsic H₂O₂ was added to the culture medium, bacterial growth of the ΔkatE1 strain was delayed and growth of the ΔkatE1 ΔkatE2 and ΔkatE1 ΔahpC1 double mutant strains was completely inhibited at 37°C for 8 h. The sensitivity of the ΔkatE1 strain to the inhibition of growth by H₂O₂ was higher at low incubation temperatures (12 and 22°C) than at 37°C. The determined gene expression of these catalase and ahpC genes revealed that katE1 was highly expressed in the wild-type strain at 22°C under H₂O₂ stress, while the katE2 and ahpC genes may play an alternate or compensatory role in the ΔkatE1 strain. This study demonstrated that katE1 encodes the chief functional catalase for detoxifying extrinsic H₂O₂ during logarithmic growth and that the function of these genes was influenced by incubation temperature.     

蒜蝇的初步研究

蒜蝇(Eumerus strigatus Fallen)据国外记载,分布于苏联、日本、北欧和北美。在国内据周明祥等(1953)记载,分布于内蒙古呼和浩特、包头、萨拉齐;山西大同、朔县;河北宣化。据土山哲夫(1953)记载,分布于东北熊岳等地。作者调查获知内蒙乌兰察布盟呼和浩特市、巴彦淖尔盟五原县、伊克昭盟达拉特旗、锡林郭勒盟太朴寺旗、呼伦贝尔盟喜桂图旗(牙克石市)和满洲里市均有分布。此虫在内蒙仅发现为害大蒜、大葱及洋葱。根据三