全文获取类型
收费全文 | 7562篇 |
免费 | 1075篇 |
国内免费 | 4327篇 |
出版年
2024年 | 73篇 |
2023年 | 239篇 |
2022年 | 421篇 |
2021年 | 419篇 |
2020年 | 400篇 |
2019年 | 478篇 |
2018年 | 324篇 |
2017年 | 304篇 |
2016年 | 314篇 |
2015年 | 436篇 |
2014年 | 590篇 |
2013年 | 540篇 |
2012年 | 798篇 |
2011年 | 842篇 |
2010年 | 671篇 |
2009年 | 643篇 |
2008年 | 702篇 |
2007年 | 743篇 |
2006年 | 654篇 |
2005年 | 617篇 |
2004年 | 436篇 |
2003年 | 382篇 |
2002年 | 421篇 |
2001年 | 318篇 |
2000年 | 328篇 |
1999年 | 236篇 |
1998年 | 96篇 |
1997年 | 56篇 |
1996年 | 50篇 |
1995年 | 59篇 |
1994年 | 36篇 |
1993年 | 22篇 |
1992年 | 36篇 |
1991年 | 39篇 |
1990年 | 27篇 |
1989年 | 20篇 |
1988年 | 22篇 |
1987年 | 17篇 |
1986年 | 38篇 |
1985年 | 32篇 |
1984年 | 24篇 |
1983年 | 12篇 |
1982年 | 15篇 |
1981年 | 8篇 |
1979年 | 3篇 |
1977年 | 6篇 |
1975年 | 2篇 |
1974年 | 2篇 |
1972年 | 3篇 |
1950年 | 2篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 13 毫秒
951.
双Intein介导3片段vWF的反式剪接 总被引:1,自引:1,他引:0
von Willebrand因子(vWF)基因突变导致血管性血友病(VWD),由于其基因过大在基因治疗研究中难以为多数病毒载体携带.利用双内含肽(intein)的蛋白质反式剪接功能研究断裂成3段的vWF基因分别表达后在蛋白水平的连接,旨在为vWF基因的3载体联合转移应用于VWD基因治疗研究提供依据.将vWF cDNA于满足剪接所需的保守性氨基酸Cys1099、Ser2004的密码子前断裂为3段(N、M和C),分别与splitSspDnaE intein的N端(En)、C端(Ec)和splitSspDnaB intein的N端(Bn)、C端(Bc)编码序列融合,构建到原核表达载体pET-28a(+)中的His-Tag的下游,得到3种表达载体pET-NEn、pET-EcMBn和pET-BcC.分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)细胞,经IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE分析融合蛋白的表达,并进一步用His-Tag的特异性抗体进行分析;亲和层析纯化分别表达的带His-Tag标签的3段蛋白,复性后体外混合进行剪接实验以观察3片段vWF的连接.结果显示,3段预期大小的融合intein的vWF蛋白均有表达,用His-Tag抗体进行的Western印迹得到进一步证实;3段纯化的蛋白混合后可见明显的剪接条带形成,与vWF的预期分子量大小一致,表明双intein通过蛋白质反式剪接可有效连接3个片段的vWF,为进一步应用蛋白质剪接技术的3重载体真核细胞转vWF基因奠定了基础. 相似文献
952.
热休克反应是机体中一个重要的内源性保护机制,但其对TNF-α诱导的单核/巨噬细胞迁移有无影响目前尚不清楚.采用酶联免疫吸附实验观察TNF-α(20μg/L)刺激RAW264.7巨噬细胞4h后炎症因子IL-1β、IL-6、IL-15的表达情况;Western blot验证热休克预处理诱导热休克蛋白表达的增加;利用细胞趋化实验观察热休克预处理(42℃,1h)对TNF-α所致巨噬细胞迁移的影响.研究发现,TNF-α可明显促进RAW264.7细胞株中IL-1β、IL-6、IL-15等炎症因子的释放;热休克预处理诱导热休克蛋白HSP70、HSP90、HSP25表达增加;细胞趋化实验发现TNF-α处理的RAW264.7细胞迁移能力较正常对照组明显增强,而热休克预处理组巨噬细胞的迁移能力较单纯TNF-α处理组明显减弱.上述结果表明,热休克预处理抑制TNF-α所致巨噬细胞的迁移. 相似文献
953.
954.
通过测定精子的激活率、运动时间及寿命,研究了鮸鱼精子的生理特性,以0.5mL麦细管为冻存管、两步降温法超低温冻存鮸鱼精子。结果表明,鮸鱼精子激活与运动的适宜盐度为20~30、适宜pH值为5.5~9.0,适宜的KCl、NaCl、CaCl2溶液浓度分别为(500~600)mmol/L、(400~500)mmol/L、(300~400)mmol/L,适宜的葡萄糖溶液浓度为(800~900)mmol/L。无Ca2+、Mg2+及HCO3-的人工海水均能使鮸鱼精子激活,但运动时间及寿命有所下降。以Cortland溶液为稀释液,10%Gly、15%Gly、5%DMSO、10%DMSO、15%DMSO、10%EG、10%PG、15%PG及20%PG为抗冻剂,超低温冻存鮸鱼精子15d后,冻精的活力与鲜精相比无显著差异,其中,以10%Gly为抗冻剂冻存精子的效果最好,冻精的激活率、运动时间及寿命分别达(86.38±1.63)%、(8.24±1.37)min及(10.21±0.42)min。 相似文献
955.
956.
目的:探索一种大量表达结核分枝杆菌ESXB-ESXA融合蛋白的方法,分析其抗原性,评价其在结核抗体检测中的初步应用。方法:采用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中分别扩增esxB和esxA基因,用Linker(G4S)3连接2条目的片段,连接pET-32a(+)载体,构建ESXB-ESXA融合蛋白表达载体;重组表达载体转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达、纯化,Western印迹分析重组蛋白的抗原性;建立以融合重组蛋白为抗原的ELISA和胶体金检测方法,分析其在结核病抗体检测中的应用。结果:构建了ESXB-ESXA融合蛋白的表达载体,重组ESXB-ESXA在大肠杆菌中得以高效表达,表达量占菌体总蛋白的70%以上;Western印迹分析表明该重组蛋白具有较好的抗原性;ELISA和胶体金检测结果显示,用重组ESXB-ESXA抗原检测临床结核病患者有较好的特异性。结论:重组ESXB-ESXA融合蛋白表达量高并具有较好的抗原性,可作为结核病抗体检测的备选抗原。 相似文献
957.
958.
柠檬酸合酶的分子生物学研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
柠檬酸合酶(citrate synthase,CS)是细胞内多种重要代谢途径的关键酶。CS可催化草酰乙酸和乙酰辅酶A之间的缩合反应生成柠檬酸和辅酶A。通常革兰氏阳性细菌、古菌以及真核细胞的CS为同源二聚体,而革兰氏阴性细菌的CS为同源六聚体。根据其在细胞内的定位不同,CS可分为线粒体CS、乙醛酸循环体CS、过氧化物酶体CS。这些同工酶在能量代谢、植物脂肪的代谢、脂肪酸的氧化及细胞解毒过程中起着重要作用。不同来源的CS空间结构、催化机制和动力学性质十分相似。针对其生化特性、空间结构特点、催化机制以及分子进化等研究进展进行综述。 相似文献
959.
960.
甲型H1N1流感病毒NA、PB2和PA表位抗原区段的克隆和表达 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:分析比对甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)、聚合酶B2(PB2)和聚合酶A(PA)抗原的序列,克隆表达保守的和变异的表位抗原区段,为免疫学诊断试剂的研究提供候选抗原。方法:采用BioSun生物学软件比较新近公布的A/H1N1流感病毒和我国猪流感病毒浙江株NA、PB2和PA抗原序列,并预测筛选NA、PB2和PA抗原表位保守区段与变异区段,采用PCR逐步合成法合成NA、PB2和PA表位抗原区段基因序列,并利用原核表达载体pBVIL1进行克隆表达。结果:筛选的保守表位抗原区段和变异表位抗原区段为NA/135~180aa、NA/310~350aa、PB2/1~80aa、PA/41~90aa、PA/231~280aa和PA/341~400aa;获得6条表位抗原区段基因序列,且6条表位抗原区段均获得了高效表达,得到纯化后的抗原。结论:获得了A/H1N1流感病毒NA、PB2和PA表位抗原区段,为进一步研制特异的甲型流感病毒快速诊断试剂提供了抗原储备。 相似文献