人颗粒裂解肽片段在大肠杆菌中的表达

目的：建立颗粒裂解肽（NKG5）的原核表达载体系统,并在大肠杆菌中获得表达。方法：采用寡核苷酸合成、PCR扩增得到NKG5编码序列,克隆到pGEM-T载体上,经测序正确后,再切下编码序列连接到重组表达载体pGEx-4T-1中,转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导重组工程菌表达,采用谷胱甘肽偶联的Sepharose 4B纯化重组蛋白。结果：重组菌株可以表达GST-NKG5融合蛋白,用免疫印迹反应鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量34000处有一条带。结论：获得了在大肠杆菌中低表达的颗粒裂解肽融合蛋白,为后续研究奠定了基础。     

产角蛋白酶耐热金孢菌的初筛研究

用鸡羽毛粉或人头发粉作为唯一碳、氮源,对9个耐热的金孢属(Chrysosporium spp.)真菌菌株进行了产角蛋白酶筛选。研究结果表明:菌株H-49-2对鸡羽毛的利用能力最强,而菌株H-143-1对人头发的利用能力最强。对H-49-2菌株进行液体发酵产酶试验的结果表明,培养6d时酶活性最大,为9.6U/mL。     

影响辣椒离体再生芽伸长因素研究(英文)

以辣椒子叶为外植体,比较不同浓度BA和IAA激素组合对辣椒再生芽诱导的差异,利用筛选出的高效芽诱导培养基为基础,研究了赤霉素、芽诱导时间、培养基有机成分、不同激素组合和品种等因素对辣椒不定芽伸长的影响。结果表明:不同基因型辣椒子叶再生能力不同,BA3.0mg·L^-1+IAA0.5mg·L^-1的激素配比对不定芽诱导频率最高;不定芽的伸长百分率随着GA₃浓度的增加而增加,GA₃的适合浓度为1.0～2.0mg·L^-1;不定芽诱导时间对不定芽的伸长有一定的影响,诱导21d的不定芽,其伸长频率明显高于诱导14d的不定芽;B5有机成分在辣椒不定芽的伸长中效果优于MS有机成分;激素组合对不定芽伸长有一定的影响,Zeatin+GA₃激素组合对伸长效果最好,BA+IAA+GA₃伸长效果较好,BA+PAA(苯乙酸,phenylaceticacid)+GA₃伸长效果次之;不同品种辣椒不定芽的伸长能力有一定差异,楚风和苏椒五号再生芽伸长能力最佳。与IAA和NAA相比,IBA对再生芽生根效果较好。     

二维斑点追踪技术评价犬心梗后自体骨髓CD34＋干细胞移植对心肌功能的影响

目的应用二维斑点追踪成像超声心动图（2D-STE）,评价犬心梗后自体骨髓CD34＋干细胞移植对心肌功能的影响。方法 12只杂种犬行冠脉左前降支结扎术,导致前壁心肌梗死,随机分为两组,A组为对照组,结扎术后两周二次开胸手术,经心肌注射磷酸盐缓冲液（PBS）1 mL;B组为治疗组,结扎术后两周二次开胸手术,经心肌注射含自体骨髓CD34＋干细胞的磷酸盐缓冲液1 mL。应用STE对12只犬结扎术前、术后左室短轴基底段及心尖段心室节段径向应变（RS）、圆周方向应变（CS）以及局部心肌旋转（Rot）进行分析,并对对照组和治疗组治疗后的RS、CS及Rot变化进行比较。结果心肌梗死后梗死节段的RS、CS以及Rot均下降,治疗后治疗组梗死段RS及Rot较对照组好转。结论 STE能够评价左室短轴局部心肌的收缩功能,心肌梗死后梗死段短轴各方向应变减低,自体骨髓CD34＋干细胞移植能够提高局部心肌的收缩功能。     

猪源大肠杆菌Nissle 1917菌株的分离鉴定

【目的】证实大肠杆菌Nissle 1917作为自然菌株存在于动物猪体内,并能从猪粪便中分离。建立大肠杆菌Nissle 1917的原位杂交鉴定方法。【方法】采集135份健康断奶仔猪的新鲜粪便制备DNA模板,以人源大肠杆菌Nissle 1917为阳性对照菌株,分别针对Nissle 1917的I型菌毛亚单位Fim A、F1C菌毛亚单位Foc A及两个质粒pMUT1和pMUT2的相关基因序列设计5对特异性引物进行PCR扩增;并将其中427 bp大小的质粒片段pMUT2(a)作为目的片段回收纯化,用地高辛随机引物标记法制成DNA探针。【结果】从其中的2份DNA模板中扩增出上述5对特异性引物PCR预期大小相符的片段,初步认为大肠杆菌Nissle 1917可能存在于猪体内。应用制备的探针通过菌落原位杂交的方法从2份阳性粪便样品中筛选出2株阳性菌落,通过血清学检验、PCR扩增和测序进一步鉴定为阳性Nissle 1917菌株。【结论】动物源益生菌Nissle 1917的分离鉴定,为优良动物源益生菌研究和应用奠定了基础。     

食品微生物本科毕业论文实验的探索与实践——以干酪乳杆菌异源表达胆盐水解酶为例

毕业论文是本科教育教学过程中不可替代的重要环节之一,是检验学生综合素质的重要手段。以干酪乳杆菌异源表达胆盐水解酶为例,从论文选题、实验准备、实验研究和论文撰写等方面介绍上海理工大学食品微生物本科毕业论文实验的有关探索。学生通过综合运用所学理论知识和实验技能,能够顺利完成毕业论文实验,构建出具有工业应用潜力的耐胆盐干酪乳杆菌基因工程菌,达到本科毕业论文实践教学的目的。     

我国特有植物缙云卫矛濒危机理分析

缙云卫矛为我国二级保护植物,仅分布于重庆北碚缙云山和统景镇东温泉公园,皆为旅游胜地。缙云卫矛常以伴生种存在于慈竹林。伴随着旅游业的发展,适宜于缙云卫矛生存的空间环境越来越小,致使该物种处于濒危状态。导致缙云卫矛濒危的原因主要有：(1)物种的生态幅较小,适宜生长在水热条件良好的环境中,(2)形态可塑性较差,对生境的适应能力差;(3)生长发育缓慢,竞争能力较弱;(4)种子萌发率低;(5)人为干扰严重。此外,还讨论了缙云卫矛保护对策。     

环境参数变化对γ射线诱变微生物的影响

报告了在非自然环境中培养选育青霉菌菌株的一些结论。实验表明随着辐射剂量的增加菌株的致死率也相应增加;当辐照剂量相同时,与自然环境相比其致死率有所提高,且随着非自然环境参数值的增加而增加。当电场强度为３００ｋＶ／ｍ、磁场强度为６００Ｇｓ时,正变率有一极大值。     

中国鄂温克、鄂伦春、达斡尔族永生细胞系的建立与保存

本采用ＥＢＶ（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ）上清液转化Ｂ淋巴细胞,并加入环胞霉素Ａ（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ）抑制Ｔ淋巴细胞,成功地对中国东北地区鄂温克族、鄂伦春族及达斡尔族的部分个体建立了永生细胞系,其中鄂温克族４９株,鄂伦春族４０株,达斡尔族５１例,总计１４０株。永久保存我国特有民族的基因组,为分析其遗传学差异奠定了基础。