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101.
102.
以质粒pRK404为载体亚克隆含大豆根瘤菌吸氢酶结构基因(hup)的片段,构建成嵌合质粒pHR11、pHR4和pHR10。通过三亲本杂交将这些嵌合质粒导入无吸氢活性的Rhodobactersphaeroides241菌株(Hup-),均获得Hup+的接合子。利用启动子检测质粒pMP220证明,在hup对结构基因上游1.2kb内存在hup启动基因片段。以pRK2013为助质粒可将pHR11导入Enterobactercloacae和Klebsiellaoxytoca等土壤固氮菌株。本文以接合子E.cloacaeEH1113为例,通过对基因组DNASouthern杂交分析证明,嵌合质粒pHR11在EH1113中稳定贮存和复制。H2诱导接合子EH1113吸氢酶活性高表达,吸氢活性与放氢活性比值约为对照的两倍。当以延胡索酸为电子受体时,吸氢酶的吸氢作用支持菌株固氮酶活性的提高。 相似文献
103.
以玉米根微粒体为材料进行的微量放射配体结合(MRLB)实验表明玉米根微粒体膜上存在着ABA结合位点,ABA与ABA结合蛋白(ABA-BP)结合的最适pH为6.5,结合反应对温度(0℃和25℃)不太敏感,ABA与ABA-BP的结合反应是一个动态平衡过程,5min即可达最大结合(Bmax)的50%,30min达到最大结合,1h内基本保持不变。胰蛋白酶处理表明此结合位点为蛋白质,冻融实验则表明此蛋白与ABA的结合不仅要求其自身具有特定构象而且需要有一定的膜脂环境,DTT处理实验结果显示ABA-BP中可能存在着二硫键。逆境处理可以提高玉米根微粒体膜对ABA的结合活性,盐胁迫、渗透胁迫、干旱胁迫和热冲激处理分别使结合活性上升34.9%、17.8%、23.1%和13.3%。 相似文献
104.
为研究水稻蜡质基因(waxy)5'上游调控区中存在的顺式作用元件,我们将水稻waxy基因翻译起始声、(ATG)5'上游3.4kb(-2118~+1291bP)片段经外切核酸酶ExoⅢ部分酶解,得到一系列5'端缺失的片段。将这些缺失片段分别与gus基因编码区连接,构建成融合质粒,经PEG介导引入水稻原生质体,26℃培养48h后,定量测定GUS酶活力,并以同时导入的由35S启动子指导的荧光素酶(LUC)基因表达的酶活力作为内对照。结果表明,GUS酶活性随5’上游调控区长度的减少而逐渐减弱。由─861bp缺失至─640bP时,gus基因表达水平有较明显的降低,推测在该区域中可能存在一个顺式作用元件区。 相似文献
105.
小牛类表皮生长因子活性肽(c-EGF)的分离纯化及性质 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道小牛颌下腺通过酸抽提、CM52、DE52柱层析、SephadexG75凝胶过滤及HPLC等步,分离纯化到一个分子量为6kD,等电点为4.6的小肽。该小肽类似人重组表皮生长因子(rh—EGF)的生物活性,具有刺激NRK细胞的增殖及刺激新生小鼠的睁眼、萌牙,并具有增加A431细胞膜蛋白质磷酸化的功能。氨基酸组成缺少苯丙氨酸及苏氨酸残基。我们命名它为小牛类EGF样活性肽(calfEGF-likeactivepeptide,简称c-EGF)。 相似文献
106.
本文用PCR方法获得大肠杆菌热休克蛋白转录因子σ32的编码基因rpoH,并克隆在含有tac启动子的表达载体pUHE中,经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达了C端融合有6个寡聚组氨酸的σ32。表达产物经金属螯合层析一步纯化,达到SDS-PAGE银染一条带纯度,氨基酸组成分析及N端序列分析结果与文献报道一致。35S细胞内参入实验表明:即使在较低的温度下,表达产物σ32(His)6也能导致热休克蛋白如GroEl、DnaK、Htp的大量合成. 相似文献
107.
利用改进的kar交配法,将一个含有340kb人基因组DNA的YAC片段的供体酵母菌株YAC23与受体菌株YLB504进行交配,以选择平板对所形成的候选YAC导入菌进行筛选。经PCR分析,候选YAC导入菌在404bp处有一个扩增带,即具有受体菌株的交配型(MAT α)。进一步用脉冲电泳进行核型鉴定,证实YACs己成功地进入受体,实现了YACs从一个宿主到另一个宿主之间的转移。 相似文献
108.
ZHANG Junwu QIAO Jun SONG Wenfeng QIU Zhiming 《中国科学:生命科学英文版》1996,39(3):329-336
A permanent lymphocyte cell line of a heterozygote with Yunnanese (Aγδβ)0-thalassemia deletion, associated with an increased production of Cry globin in adult, was founded using Epstein-Barr virus transformation. The hybrids of the lymphocyte cell and mouse erythroleukemia cell (MEL) were achieved and the hybrids containing human chromosome 11 were selected with the monoclonal antibody 53/6. The subclones containing only either the normal or the abnormal human chromosome 11 were separated and the expression of the human globin genes was studied. Expression of the β-globin gene, but not the Cγ and Aγ, was observed in the hybrids containing only the normal human chromosome 11, while active expression of the Cγ globin gene was observed in the hybrids containing only the abnormal human chromosome 11. These results have confirmed that the DNA deletion in the β-globin gene cluster is the cause of persistent active expression of the Cγ globin gene in the Yunnanese mutant. 相似文献
109.
110.