检测牛冠状病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

[背景]牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是引起新生犊牛死亡的主要病原之一,有效的检测手段是防治该病的前提。目前BCoV ELISA检测方法存在敏感性低、不稳定等缺陷。[目的]对原有BCoV ELISA方法进行改进,建立间接ELISA检测方法。[方法]应用我国BCoV流行毒株CD株n基因为模板,预测N蛋白抗原表位,通过原核表达制备可溶性的重组N蛋白作为抗原,建立间接ELISA方法,应用该方法对黑龙江省2010-2017年的BCoV感染进行血清流行病学调查。[结果]该ELISA方法最佳工作条件为:用50 mmol/LpH 9.6碳酸盐作为包被液,抗原包被浓度2.5μg/mL;用PBST作为样本稀释液,稀释浓度1:50,37℃孵育1.5 h;HRP-羊抗牛IgG稀释浓度1:7 500,37℃孵育1.0 h;用1%明胶37℃封闭30 min。阴阳性临界值为0.225。该方法与BRV、BRSV、BVDV、IBRV、BPIV3和E.coli阳性血清均无交叉反应。批内和批间变异系数均小于10%,与病毒中和试验的符合率高达93.5%。对黑龙江省部分地区共603份奶牛血清样品检测结果显示,BCoV抗体阳性率为98.84%。[结论]建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、稳定性好,为进一步研发ELISA试剂盒提供了技术基础。     

青藏高原栽培青稞淀粉粒蛋白多态性及其与淀粉含量的关系

淀粉粒蛋白(Starch granule proteins, SGPs)是一类与淀粉粒结合的微量蛋白, 其变异可能与淀粉特性相关。实验率先研究了我国青藏高原栽培青稞的SGP组成, 初步探索了所分离的SGP蛋白与淀粉合成的关系。青藏高原青稞的SGP组成存在多态性, 66份青稞材料中分离了10种主要的SGPs, 16种组合带谱。西藏青稞和四川青稞的SGP组成有很大差异, SGP组成具有地域差异性。不同组合带谱材料间淀粉含量差异显著性检验显示, 实验所分离的淀粉粒蛋白可能与淀粉的合成相关。     

珍稀濒危植物细果秤锤树开花生物学特性和繁育系统

为了解珍稀濒危植物细果秤锤树（Sinojackia microcarpa）开花特征和有性繁殖,对其花部形态特征、开花动态、花粉胚珠比（P/O）、柱头可授性、花粉活力、套袋试验、访花昆虫及访花频率进行观测。结果表明：（1）细果秤锤树的杂交指数（OCI）为4,单花期5~7 d,种群花期可持续20 d左右。花粉与胚珠比为4 093.21±498.56。开花后第3天的花粉活力最高（76.21%）,而开花后第7天时花粉活力较低（18.37%）。细果秤锤树柱头最适可授期在开花后第2天。（2）套袋试验表明,细果秤锤树存在部分自交不亲和性,同时不存在无融合生殖,传粉昆虫是其完成生殖过程所必需的,且异株授粉能够提高其坐果率和结籽率。细果秤锤树的访花昆虫有3目5科7种,主要访花昆虫有黄胸木蜂（Xylocopa appendiculata）、熊蜂（Bombus sp.）、胡蜂（Vespa sp.）、中华蜜蜂（Apis cerana）、黑带食蚜蝇（Episyrphus balteatus）、其中熊蜂平均访花频率最高,达（8.67±0.21） 次·h^-1。对该物种开花生物学特征与繁育系统进行深入研究,有利于进一步探究其濒危机制,为后续珍稀濒危植物的研究提供理论依据和参考。     

东昌湖水质动态变化与富营养化评价

根据东昌湖水环境监测资料, 采用单因子指数、内梅罗指数法及综合营养状态指数法对东昌湖各监测点2004-2011年的水质变化和富营养化状态进行了分析。结果表明, 酸碱度(pH)、溶解氧(DO)单因子指数呈波动中上升趋势, 但均符合IV类水质标准;化学需氧量(COD_Cr)、总氮(TN)单因子指数呈波动中下降趋势, 总磷(TP)单因子指数呈波动中上升趋势且三者单因子指数均较高, 以总氮(TN)对水质影响最大。南关桥、西关桥内梅罗指数呈波动中上升趋势, 表明水质趋于恶化。北关桥、东关桥内梅罗指数呈波动中下降趋势, 表明水质趋于好转。2004-2010年各监测点处于轻-中度富营养化水平, 截至2011年各桥均达到中营养水平。东关桥、北关桥富营养化水平高于西关桥、南关桥。     

Identification of the nuclear matrix and chromosome scaffold in dinoflagellate Crypthecodinium cohnii~1

Dinoflagellate is one of the primitive eukaryotes,whosenucleus may represent one of the transition stages fromprokaryotic nucleoid to typical eukaryotic nucleus.Usingselective extraction together with embeddment-free sectionand whole mount electron microscopy,a delicate nuclearmatrix filament network was shown,for the first time,indinoflagellate Crypthecodinium cohnii nucleus.Chromosomeresidues are connected with nuclear matrix filaments to forma complete network spreading over the nucleus.Moreover,we demonstrated that the dinoflagellate chromosome retainsa protein scaffold after the depletion of DNA and solubleproteins.This scaffold preserves the characteristic mor-phology of the chromosome.Two dimensional elec-trophoreses indicated that the nuclear matrix and chromo- some scaffold are mainly composed of acidic proteins.Ourresults demonstrated that a framework similar to the nuclearmatrix and chromosome scaffold in mammalian cells appearsin this primitive eukaryote,suggesting that these structuresmay have been originated from the early stages of eukaryoteevolution.     

浙江武义2009年南方水稻黑条矮缩病的毒源地分析

2009年, 浙江省境内首次出现南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black streaked dwarf virus, SRBSDV), 且仅武义县有发病现象。因为该病毒病是一种虫媒病毒, 且白背飞虱Sogatella furcifera (Horváth)是主要传毒介体, 所以本文通过白背飞虱灯下诱虫情况调查、 迁飞轨迹模拟、 天气学背景分析以及毒源地分析, 阐释了2009年浙江省武义县发现的南方水稻黑条矮缩病的供毒源地分布情况, 以及白背飞虱携毒的传递路径, 并讨论了轨迹模拟中各生物学参数的设定方法, 从而为剖析该病毒的宏观流行规律奠定科学基础。结果显示：(1) 通过对白背飞虱迁入武义的主要虫源地与经鉴定的南方水稻黑条矮缩病发病区域的叠加分析, 明确了浙江武义的可能毒源地分布于两广、 闽南、 赣南四省区境内; (2) 西南低空急流及偏南气流是白背飞虱将我国南方的病毒远距离传送到武义县境内的动力源; (3) 白背飞虱随下沉气流和降雨在武义境内的集中降落是南方水稻黑条矮缩病在当地暴发的触发条件。     

纯化膜蛋白质复合体Cytb6f的新方法

建立了纯化光合膜蛋白质复合体Ｃｙｔｂ６ｆ的新方法。与现有方法相比,新方法简单明了,只包括透析离心和用硫酸铵分级沉淀两个步骤,而且适于大批量制备。按此方法从菠菜叶绿体分离纯化的制剂含９．８ｎｍｏｌＣｙｔｆ·ｍｇ－１;ＳＤＳＰＡＧＥ显示４条主要区带及１条低分子量区带,背景干净;Ｃｙｔｂ６（ｂ型血红素）∶Ｃｙｔｆ＝２∶１（ｍｏｌ∶ｍｏｌ）,Ｃｈｌａ∶Ｃｙｔｆ＝１∶１（ｍｏｌ∶ｍｏｌ）;酶活性（ＰＱ２Ｈ２→Ｃｙｔｃ）８０μｍｏｌＣｙｔｃ·ｎｍｏｌＣｙｔｆ－１·ｈ－１左右;产率可达３８％。     

麦田一代灰飞虱(Laodelphax striatellus Falln)若虫的时空分布

灰飞虱(Laodelphax striatellus Falln)近年来严重危害水稻并传播病毒病,麦田是其越冬并虫量扩增后向稻田迁移的重要场所,麦田一代灰飞虱也是防治的重点对象之一。利用半方差函数模型分析了麦田一代灰飞虱若虫在时间序列上的空间结构,得出了空间自相关的各项属性与虫口密度或环境因素的关系:长、短变程与密度无关,保持相对稳定;块金常数与密度成正相关(比例效应的存在),随机性强度与密度成三次多项式曲线相关;各向异性主要由于麦田行株距的差别所决定。并用一般克立金方法作出预测表面图,按时间顺序排列,将灰飞虱若虫在田间的时空分布情况直观地显示出来进行比较分析,得出灰飞虱若虫具有比较稳定的时空分布,认为食料充足、生境孤立、自身行动力较弱是形成这种情况的主要原因,此外包括天敌在内的一些次要因素也对其种群分布产生影响。     

乙草胺对葡萄叶片光合和叶绿素荧光特性及叶绿体结构的影响

以沙培1年生巨峰葡萄为材料,研究土施乙草胺对葡萄叶片光合、叶绿素荧光特性和叶绿体结构的影响.结果表明：喷施初期(处理后第13天),上部叶片净光合速率和气孔导度显著下降,PSII最大光化学效率和实际光化学效率显著低于对照,快速叶绿素荧光诱导动力学曲线中J点和K点荧光显著上升,性能指数PI_ABS显著下降,其PSII反应中心和放氧复合体受损伤程度显著高于中部叶片,但随着处理时间的延长,受损伤的程度减轻.在喷施后期(处理后第60天),上部叶片与中部叶片各指标之间的差距变小;下部叶片对除草剂的响应滞后,PSII反应中心和放氧复合体受到较大损伤,J点和K点荧光上升及PI_ABS下降的幅度高于中、上部叶片.乙草胺处理后第60天,葡萄叶片可溶性糖和淀粉含量增加,中、上部叶片色素含量显著下降,叶绿体膜受损,叶绿体变小,片层结构模糊或间隙增大.表明土施乙草胺可传导至葡萄地上部,导致叶片光合机构损伤、PSII活性下降和光合速率降低.