Engineering mouse apolipoprotein A-I into a monomeric, active protein useful for structural determination

Apolipoprotein AI (apoAI), the major protein component of HDL, is one of the best predictors of coronary artery disease (CAD), with high apoAI and HDL levels being correlated with low occurrences of CAD. The primary function of apoAI is to recruit phospholipid and cholesterol for assembly of HDL particles. Like other exchangeable apolipoproteins, lipid-free apoAI forms a mixture of different oligomers even at 1.0 mg/mL. This self-association property of the exchangeable apolipoproteins is closely associated with the lipoprotein-binding activity of this protein family. It is unclear if the self-association property of apolipoprotein is required for its lipoprotein-binding activity. We developed a novel method for engineering an oligomeric protein to a monomeric, biologically active protein. Using this method, we generated a monomeric mouse apoAI mutant that is active. This mutant contains the first 216 residues of mouse apoAI and replaces six hydrophobic residues with either polar or smaller hydrophobic residues at the defined positions (V118A/A119S/L121Q/T191S/T195S/T199S). Cross-linking results show that this mutant is greater than 90% monomeric at 8 mg/mL. CD, DSC, and NMR results indicate that the mutant maintains an identical secondary, tertiary structure and stability as those of the wild-type mouse apoAI. Lipid-binding assays suggest that the mutant shares an equal lipoprotein-binding activity as that of the wild-type apoAI. In addition, both the monomeric mutant and the wild-type protein make nearly identical rHDL particles. With this monomeric mouse apoAI, high-quality NMR data has been collected, allowing for the NMR structural determination of lipid-free apoAI. On the basis of these results, we conclude that this apoAI mutant is a monomeric, active apoAI useful for structural determination.     

利用微生物重组技术促进羰基不对称还原研究进展

手性醇是许多手性药物合成的关键手性砌块,利用微生物细胞催化相应前手性羰基化合物不对称还原,是合成手性醇的重要方法之一。但应用野生微生物催化时,反应的时空产率、立体选择性较低。详细介绍了利用微生物重组技术以促进前手性羰基化合物不对称还原反应合成手性醇的国内外研究进展。从酶的种类、表达系统以及辅酶再生系统3个方面对重组细胞催化反应体系的构建进行了概述。同时按照反应底物的类型,对重组微生物在催化不同类型羰基化合物不对称还原合成手性醇中的应用分别进行了归纳和介绍。     

植物色氨酸一天冬氨酸重复序列蛋白响应逆境胁迫的调控作用

干旱、盐渍、低温等逆境胁迫会严重影响植物的正常生长发育,导致植物的许多响应基因被诱导表达,其蛋白质产物能够保护植物免受胁迫的伤害。色氨酸一天冬氨酸重复序列蛋白（wD40蛋自）在植物中广泛存在,参与植物体内众多代谢反应的调控,如花的发育、开花、花青素的生物合成、激素响应、渗透胁迫等。WD40蛋白含有40-60个氨基酸的保守的wD重复序列,其c末端为色氨酸．天冬氨酸（Trp-Asp,WD）,形成一个p螺旋桨（p—propeller）结构,通过调节多蛋白复合体的组装而影响蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA间的相互作用。本文综述植物WD40蛋白响应逆境胁迫的调控作用。     

冷和盐预处理提高水稻幼苗抗寒性期间细胞Ca^2＋—ATP酶活性的变化

冷和盐预处理显著提高水稻（OryzasatwaL．）幼苗的抗寒性,但两预处理诱导提高的抗寒性可为钙的螫合剂EGTA和钙调素的抑制剂CPZ所抑制。冷预处理有提高很质膜、液泡膜和叶片的叶绿体Ca2 ．ATPase活性和质膜Fe（CN）3-6还原活性的作用,其中对提高根质膜Ca2 －ATPase活性和Fe（CN）3-6还原活性的作用尤为显著。盐预处理对提高根质膜、幼叶叶绿体Ca2 ATP酶活性和质膜Fe（CN）3-6还原活性的作用类似于冷预处理。虽然盐预处理苗液泡膜Ca2 －ATPase活性有所下降,但其活性仍明显高于未预处理苗,表明在低温胁迫下,两预处理苗都有较强的维持Ca2 稳态能力。结果揭示,冷和盐预处理诱导水稻幼苗抗寒性的提高,可能均与在低温胁迫下两预处理能有效地维持或激活Ca@ －ATPase活性有关,两者有着类似的适应机制。     

广西野生楝科植物提取物对萝卜蚜的杀虫作用初步研究

针对广西12种野生楝科植物提取物进行了对萝卜蚜的触杀活性筛选。结果显示:红楝子(树皮)、香椿(树皮)、地黄连(全株)和老虎楝(枝叶)的提取物在10mg/mL的浓度下有较高的杀虫活性,24h校正死亡率分别达到73.89%、79.47%、74.55%和72.19%,与其它的相比差异性显著。     

玉米苗中DIMBOA与几种酚酸类物质抑菌活性比较

本文从室内培养的7日龄玉米幼苗中提取、分离、鉴定了抗性次生化合物丁布(2,4-d ihydroxy-7-m ethoxy-2H-1,4-benzoxazin-3(4H)-one,D IMBOA),并就该物质对玉米纹枯病病原菌立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)的活性与三种酚酸类物质(阿魏酸、对羟基肉桂酸和咖啡酸)进行了离体比较研究。结果表明,丁布(D IMBOA),对立枯丝核菌有很强的生物活性,在浓度为50μg/mL时即可抑制立枯丝核菌菌丝的生长,抑制率为18.52%。阿魏酸、对羟基肉桂酸和咖啡酸,这三种酚酸在浓度250μg/mL时对立枯丝核菌菌丝的生长有抑制作用,抑制率分别为26.30%、8.50%和6.30%。不仅如此,丁布与对羟基肉桂酸之间、以及三种酚酸两两组合之间还存在一定的协同作用。在浓度相等的情况下,丁布与对羟基肉桂酸的等量混合液的抑菌率显著高于这两种物质单独存在时的抑菌率之和;同样,对羟基肉桂酸与阿魏酸的等量混合液的抑菌率比单一的对羟基肉桂酸溶液的抑菌率高18.89%,比单一的阿魏酸溶液的抑菌率高13.33%;对羟基肉桂酸与咖啡酸的等量混合液,抑菌率比两者单独试验时分别高9.63%和14.83%;阿魏酸与咖啡酸的混合液,抑菌率比两酸单独试验时分别高11.48%和22.23%。这一结果提示植物体内产生适当比例不同次生化合物的组合对植物抗病性的提高是至关重要的。     

豆科植物中鱼藤酮含量测定及光学异构体研究

采用HPLC法测定了豆科鱼藤属的毛鱼藤、白花鱼藤、边荚鱼藤、马来鱼藤,灰豆属的非洲山毛豆、灰毛豆,豆薯属的豆薯、鸡血藤属厚果鸡血藤和紫穗槐属紫穗槐9种植物中鱼藤酮含量,发现毛鱼藤含量最高,每100g植物干粉中含1．82g鱼藤酮,紫穗槐含量最低,仅含0．005g。通过比较毛鱼藤、白花鱼藤、边荚鱼藤、非洲山毛豆、豆薯分离得到鱼藤酮的比旋光度,结合马来鱼藤、灰毛豆、厚果鸡血藤、紫穗槐提取物对3龄家蚕的点滴触杀活性差异,说明这些植物中含有的鱼藤酮均为同-光学异构体。     

内蒙古巴彦淖尔盟蒙古野驴的数量、分布和保护对策

20 0 0年 7月中旬至 8月上旬 ,大批蒙古野驴从蒙古共和国进入我国内蒙古自治区巴彦淖尔盟乌拉特中旗和乌拉特后旗境内。 2 0 0 0年 9月对该地区蒙古野驴的数量、分布和保护情况等进行了考察 ,发现蒙古野驴主要活动在巴彦淖尔盟乌拉特中旗和乌拉特后旗中蒙边境沿线的梭形狭长地带。蒙古野驴活动区东端最南点在乌拉特中旗敦德乌素嘎查 (42°1 7′N ,1 0 8°3 0′E) ,距边境 2 3km ,西端最南点在乌拉特后旗乌力吉图嘎查以西 (42°0 8′N ,1 0 6°3 6′E) ,距边境 1 2km。活动区中部的南限在北纬 42°0 1′,距正北方边境 44km ,活动区面积约 5 3 80km2 。根据样带法调查计算估计该分布区蒙古野驴总数约在 1 1 40 0头左右。目前蒙古野驴种群在该地区的分布尚未完全稳定。密集的人口 ,有限的食物资源和偷猎是影响蒙古野驴种群在该分布区稳定生存的主要因素     

植物萜类合酶研究进展

随着植物中许多有价值的萜类化合物被发现和应用于人类生活 ,萜类生物合成途径的研究倍受重视。萜类合酶催化单萜、倍半萜和二萜生物合成 ,即分别催化GPP、FPP和GGPP形成单萜、倍半萜和二萜。本文叙述了近年来在植物萜类合酶催化机理、克隆策略和萜类生物工程的研究进展     

微生物来源的γ内酰胺酶研究进展

γ-内酰胺酶属于酰胺酶,其中的(+)γ-内酰胺酶能够高效率的动力学拆分外消旋体γ-内酰胺,获得光学纯的(-)γ-内酰胺。光学纯的(-)γ-内酰胺是制备抗病毒药物碳环核苷化合物的重要手性中间体。目前报道共有7个来源于微生物的γ-内酰胺酶,其中来源于Aureoacterium sp.的(-)γ-内酰胺酶的晶体结构获得了解析。根据晶体结构推测的(-)γ-内酰胺酶的催化机理与α/β水解酶超家族的催化机理是类似的。但是,目前还没有(+)γ-内酰胺酶的晶体结构模型的数据及机理的描述。γ-内酰胺酶的研究方向主要包括γ-内酰胺酶的蛋白质工程改造,对不同对映体选择性的γ-内酰胺酶的催化机理的阐述,以及γ-内酰胺酶在生物体内的功能研究。