猴源细小病毒血凝和血凝抑制试验的优化与应用

目的优化猴源细小病毒的血凝和血凝抑制（HA/HI）试验条件,以优化的方法对160份2010年～2011年间采集于中国北京地区圈养猴群的血清样品进行猴源细小病毒抗体调查。方法 在不同的缓冲液、缓冲液pH值、猪红细胞浓度、兔血清浓度、阿氏液比例和温度下进行猴源细小病毒的HA/HI试验,选择合适的HA/HI条件。通过优化的HA/HI方法对160份猴血清进行猴源细小病毒抗体检测。结果pH 7.0、0.02 mol/L PBS、0.75%猪红细胞、0.5%兔血清和4℃可作为猴源细小病毒HA/HI试验合适的反应条件,猪血球以1∶1阿氏液抗凝,可保存5～7 d不影响实验结果。猴血清的猴源细小病毒抗体阳性率为58.1%。结论方法优化后稳定性增强、检测时间缩短、准确性提高。细小病毒在我国北京地区圈养猴群中感染比较普遍。     

版纳微型猪近交系TNF-α基因mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的快速、灵敏、可靠的检测与临床多种疾病密切相关的重要基因TNF-α的表达情况,构建TNF-α基因及内参GAPDH基因荧光定量PCR质粒标准品。方法利用版纳微型猪近交系4～6月龄猪建立动物模型,提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,进行RT-PCR扩增。纯化目的片段与pMD18-T载体连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR,生成标准曲线。结果建立的TNF-α基因和GAPDH内参基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法灵敏度分别可达103和105拷贝,线性范围分别为103～109和105～109拷贝,阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在的线性关系R2分别为0.993和0.999,扩增效率E分别为111.073%和95.948%。结论成功的构建了版纳微型猪近交系TNF-α基因质粒标准品和标准曲线,并用内参基因GAPDH进行校正,此方法可为探讨TNF-α基因在临床多种疾病中所发挥的分子机理奠定基础。     

HMGB1 siRNA对HT-29细胞侵袭转移能力的影响

目的：观察干扰HMGBl表达对HT-29细胞侵袭转移能力的影响。方法：HMGB1siRNA通过脂质体转染HT-29细胞,westernblot和实时定量RT—PCR检测HT-29细胞中HMGB1蛋白和mRNA的表达,Transwell小室观察HT-29的转移侵袭能力。结果：干扰HMGBl后HMGB1蛋白和mRNA的表达均减少,HT-29的转移侵袭能力下降。结论：HMGB1能促进HT-29的转移侵袭能力,干扰其表达可抑制HT-29的转移侵袭。     

CD105shRNA对激光诱导的脉络膜新生血管的干预作用及其机制

目的：观察CD105shRNA对激光诱导的大鼠脉络膜新生血管的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法：40只BN大鼠单眼采用半导体激光建立CNV模型。随机取20只大鼠于建模后1天使用Pgenesil-eng2转染大鼠视网膜和脉络膜作为实验组。在建模后第14天行FFA检查,观察实验组与对照组视网膜激光斑的渗漏情况。各取5只实验组和5只对照组大鼠,行脉络膜铺片,检测并比较脉络膜新生血管渗漏面积。另32只BN大鼠任取一眼建立CNV模型,其中任取20只大鼠于建模后次日进行Pgen-esil—eag2转染,作为实验组。12只建模眼作为对照组,未建模眼作为空白对照组。于基因转染后1w,2w,3w和4w各取5只实验组大鼠和3只对照组大鼠眼球,获取每个时间点实验组、对照组和空白对照组的脉络膜组织。检测各组每个时间点CDl05和VEGF在mRNA水平的表达。结果：FFA显示光凝后第14天时,对照组的渗漏率为63．2％,实验组为24．6％。实验组的BN大鼠眼底渗漏点数较对照组少,渗漏强度较弱。两组间比较有显著性差异。脉络膜铺片结果显示：2周时对照组大鼠的CNV面积为（31．22±1．46）×10^3μm2,实验组大鼠的CNV渗漏面积为（14．46±0．82）×10^3μm2,两组间比较有显著性差异。RT—PCR结果显示：实验组VEGFmRNA及CDl05mRNA的表达变化规律与对照组相似,但各个时间点的表达量较对照组均明显下降,其中实验组VEGFmRNA于2w时的表达约为对照组的36．7％;实验组CD105mRNA在第2w时约为对照组的21．68％。结论：通过沉默CD105基因的表达可以抑制大鼠CNV的生成,下调VEGF的表达可能是其作用机制之一。CD105基因有望成为CNV的基础研究热点和临床治疗的新靶点。     

高压氧联合依达拉奉、奥扎格雷钠治疗急性脑梗死的疗效观察

目的：评价高压氧联合依达拉奉、奥扎格雷钠治疗急性脑梗死（ACI）的临床疗效,观察其对患者血液流变学指标与血浆血栓素A2（TXA2）、前列腺素I2（PGI2）水平的影响。方法：86例急性脑梗死患者随机分为治疗组与对照组：其中治疗组45例,应用高压氧联合依达拉奉、奥扎格雷钠进行治疗;对照组41例单用奥扎格雷钠,对比分析等两组治疗前后神经功能缺损评分（NHSS）、Barthel指数（BI）和血液流变学指标变化,同时采用放射免疫法检测患者治疗前后血浆TXA2和PGI2含量,最后比较两组患者的临床疗效。结果：①治疗组基本治愈率和总有效率分别为28．89％、91．11％,优于对照组17．07％的基本治疗愈率和80．49％的总有效率（P〈0．01）,两组均无明显不良反应。②经过治疗,患者NHSS评分明显下降,而BI评分明显升高（P〈0．01或0．05）,且治疗组改善程度高于对照组（P〈0．01或0．05）。（3）治疗后,患者各血液流变学指标均明显下降（P〈0．01或0．05）,其中治疗组血小板凝集率、纤维蛋白原水平和血液粘稠度降低幅度大于对照组（P〈0．05）。④经过治疗,两组血浆TXA2水平下降,PGI2水平上升,TXA2／PGI2比值减少（P〈0．01）,其中治疗组变化明显好于对照组（P〈0．01或0．05）。结论：高压氧联合依达拉奉、奥扎格雷钠治疗急性脑梗死能减轻脑细胞损伤,改善神经功能障碍,疗效显著,值得临床推广。     

燕麦米汤对严重烧伤患者休克期肠道复苏的影响

目的：研究严重烧伤患者休克期经肠道给予燕麦米汤对肠道复苏的影响。方法：选取烧伤面积≥30%TBSA的患者42例,并随机分为：燕麦米汤组,伤后24h内开始经鼻肠管给予燕麦米汤;对照组,伤后24h内开始经鼻肠管给予50g/L葡萄糖盐水,连续4d,每组21例。在伤后1、2、3、4 d分别检测其血清二氨氧化酶（DAO）值及动脉血乳酸（LAC）含量,观察两组患者腹胀缓解时间、肠鸣音恢复时间等临床指标。结果：两组患者伤后血清二氨氧化酶及动脉血乳酸含量均呈下降趋势,燕麦米汤组血清二氨氧化酶在伤后2、3、4d显著低于对照组（P〈0.01）,而脉血乳酸含量在伤后2、3d显著低于对照组（P〈0.05或0.01）,治疗过程中燕麦米汤组其腹胀缓解时间、肠鸣音恢复时间、排气时间、开始完全肠内营养时间、继发感染例数均优于对照组（P〈0.01）。结论：在严重烧伤休克期尽早鼻饲燕麦米汤能较好地促进肠道复苏。     

索拉非尼和沙利度胺对肝癌患者血清中VEGF-C、VEGF-D及微血管密度的影响

目的：探讨索拉非尼和沙利度胺这两种不同的化疗药物,对肝癌患者血清中VEGF-C、VEGF—D及微血管密度的影响。方法：将患者分成3组,每纽16例。对照组采用常规治疗并服用安慰剂;索拉非尼和沙利度胺这两个组患者中,前者服用索拉非尼400mg／次,2次／d,治疗6个月;后者服用沙利度胺每日服200mg,每周增加200mg／d,直至最大剂量每日600mg,至少服用4月。ELISA检测患者血清中VEGF-C、VEGF-D;免疫组织化学检测肝癌组织中微血管密度。结果：对照组患者血清中VEGF-C的水平为210ng／ml,索拉非尼组患者血清中VEGF—C的水平为132ng／ml,而沙利度胺组患者血清中VEGF—C的水平为186ng／ml。与对照组相比,索拉非尼组和沙利度胺组患者血清中VEGF—C的水平均降低。对照组患者血清中VEGF—D的水平为322ng／ml,索拉非尼组患者血清中VEGF—D的水平为217ng／ml,而沙利度胺组患者血清中VEGF—D的水平为256ng／ml。与对照组相比,索拉非尼组和沙利度胺组患者血清中VEGF—D的水平均降低。索拉非尼组患者血清中VEGF—D的水平明显低于沙利度胺高（P〈0．05）。对照组肝癌组织MVD为（44．32±5．16）个,索拉非尼组患者肝癌组织MVD为（21．75±1．49）个,而沙利度胺组患者肝癌组织MVD为（34．78±2．31）个。结论：多靶点化疗药物索拉非尼对肝癌患者血清中VEGF—C、VEGF—D及微血管密度的影响最大,深入探讨其作用机制．可为其肝癌患者提供新的化疗方案。     

干细胞定向分化胰岛β细胞新进展

在治疗糖尿病领域里,干细胞定向分化成胰岛β细胞是目前新颖又有前景的一种糖尿病治疗策略,不仅克服了注射胰岛素所带来的并发症,还避免了胰岛移植供体来源的短缺不足。目前供体细胞的材料主要有从胰腺中分离出的胰腺干细胞/胰腺祖细胞、胰腺导管细胞、胰腺泡细胞、肝实质细胞、小肠细胞、神经干细胞、ES细胞以及近来研究热点之一的iPS细胞。以上这些细胞都被证明或多或少具备分化成胰岛素分泌的细胞形态的潜力。在体外分化技术方面,国际上有D’Amour法、Lumelsky法等。现对干细胞定向分化胰岛β细胞的一些研究概况作简单评述。     

邮票中的蘑菇属种类及其分布

截至2010年,通过对全世界范围蘑菇邮票的收集和统计得知,世界上76个国家和地区共发行了蘑菇属24个种计126枚邮票,从中大致了解世界范围上蘑菇属真菌的资源分布和栽培状况。     

燕麦米汤对严重烧伤患者休克期肠道复苏的影响

目的:研究严重烧伤患者休克期经肠道给予燕麦米汤对肠道复苏的影响。方法:选取烧伤面积≥30%TBSA的患者42例,并随机分为:燕麦米汤组,伤后24h内开始经鼻肠管给予燕麦米汤;对照组,伤后24h内开始经鼻肠管给予50g/L葡萄糖盐水,连续4d,每组21例。在伤后1、2、3、4 d分别检测其血清二氨氧化酶(DAO)值及动脉血乳酸(LAC)含量,观察两组患者腹胀缓解时间、肠鸣音恢复时间等临床指标。结果:两组患者伤后血清二氨氧化酶及动脉血乳酸含量均呈下降趋势,燕麦米汤组血清二氨氧化酶在伤后2、3、4d显著低于对照组(P<0.01),而脉血乳酸含量在伤后2、3d显著低于对照组(P<0.05或0.01),治疗过程中燕麦米汤组其腹胀缓解时间、肠鸣音恢复时间、排气时间、开始完全肠内营养时间、继发感染例数均优于对照组(P<0.01)。结论:在严重烧伤休克期尽早鼻饲燕麦米汤能较好地促进肠道复苏。