同型半胱氨酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

血中同型半胱氨酸（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ,ＨＣＹ）浓度的升高已成为动脉粥样硬化发生的一个独立危险因子．为进一步阐明ＨＣＹ促进血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｓ,ＶＳＭＣｓ）增殖,从而引起动脉粥样硬化发生的机理．本实验采用细胞计数、３Ｈ－ＴｄＲ参入、细胞周期分析、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法证明,一定剂量的ＨＣＹ可促进离体培养的ＷＫＹ大鼠血管平滑肌细胞增殖,使其ＤＮＡ合成增加,细胞周期中Ｓ期细胞所占比例增加４３％,并促进ｃ－ｍｙｃ与ｃ－ｆｏｓ原癌基因ｍＲＮＡ表达增加．提示ＨＣＹ可能通过促进ＶＳＭＣｓ增殖而诱发动脉粥样硬化     

重组蛋白质纯化技术

90年代以来 ,基因重组技术得到很大的发展 ,基因工程产品的分离纯化的成本约占其全部成本的 6 0 %～ 80 %,因此重组蛋白的分离纯化技术越来越重要。着重介绍了扩张柱床吸附层析技术 ,径向膜层析技术 ,灌注层析技术 ,液液萃取技术 ,置换层析技术和金属螯合亲和层析技术近年来进展情况以及它们的优缺点和应用范围。     

Ca(NO3)2对NaCl胁迫下木麻黄扦插苗生理特征的调控

用不同浓度 Ca(NO3) 2 · 4 H2 O(0 .7、1.4、2 .1g Ca2 / kg土 )对 1年生的处在两种 Na Cl胁迫 (10和 2 0 g/ kg)处理下的木麻黄扦插苗进行化学调控 ,研究硝酸钙盐加氯化钠处理的木麻黄幼苗的生长量、木麻黄幼苗抗氧化酶系统活性和渗透调节物质的含量的变化 ,研究结果表明 :中度 Na Cl胁迫加硝酸钙处理下的木麻黄扦插苗的可溶性蛋白质含量增加 ,MDA含量降低说明膜脂过氧化作用减轻 ,而且抗氧化酶活性 (SOD、POD)之间协调变化有利于提高清除自由基的速率 ,中度盐胁迫下钙盐可以促进木麻黄体内脯氨酸的积累 ;但重度 Na Cl胁迫下钙盐对木麻黄的调控作用不显著 ,重度盐胁迫下钙盐反而降低木麻黄 SOD、POD活性和脯氨酸的含量 ,减弱了抗氧化酶系统对活性氧的清除作用 ,同时高浓度钙盐还会加重 Na Cl胁迫对木麻黄幼苗的损伤 ,这说明适量的钙盐有利于木麻黄幼苗抵抗盐胁迫能力的提高 ,而高浓度钙盐则可能会加重盐胁迫     

微生物1,3-1,4-β-葡聚糖酶蛋白质改造及工业应用研究进展

1,3-1,4-β-葡聚糖酶(E.C.3.2.1.73)是一种重要的工业用酶,其可以通过特异性切割毗邻β-1,3-糖苷键的β-1,4-糖苷键将β-葡聚糖或地衣多糖降解为纤维三糖和纤维四糖。微生物β-葡聚糖酶属于糖苷水解酶家族16,其三维结构为卷心蛋糕状的逆向β-片层结构。文中综述了近些年来β-葡聚糖酶在工业上的应用情况及酶蛋白质工程改造的研究进展,并对其研究前景进行了展望。     

麻疯树脂酶全长基因克隆、表达及其蛋白质结构预测

脂酶(Lipase,EC3.1.1.3)是普遍应用于皮革、饲料及生物柴油工业的工业酶制剂,具有广泛的应用价值。目前对植物来源的脂酶研究较少。本研究用在生物柴油中具有应用前景的油料植物——麻疯树(Jatrophacurcas)作为研究对象,克隆了该物种的脂酶基因(JcLIP)。通过多序列比对并结合物种的亲缘关系设计了具有较高特异性的简并引物,通过使用RT-PCR和RACE技术,最终获得了麻疯树脂酶基因的全长序列并成功地在大肠杆菌中表达,酶活测定结果表明,麻疯树脂酶在大肠杆菌中表达在包涵体中,但是能产生具有活力的蛋白质,酶活约为0.8U.mL-1。结构预测和比较表明,JcLIP蛋白质具有脂酶的结构核心和催化活性中心,而在非核心区具有较毛霉脂酶更多的插入和随机卷曲,这可能是决定二者之间酶活差异的重要原因。     

八肽胆囊收缩素对内毒素休克时海马损伤的影响及其机制初探

目的：观察八肽胆囊收缩素（CCK-8）对内毒素休克（ES）时海马损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：将日本大耳白兔经静脉注入内毒素的主要活性成分脂多糖（LPS,8mg／kg）复制ES模型。动物（32只）随机分为对照组、LPS组、CCK-8＋LPS组和非特异性CCK受体拮抗剂丙谷胺（Pro）＋LPS组（n=8）。监测平均动脉压（MAP）的变化,光、电镜观察海马的组织形态学改变,比色法检测海马NOS和SOD活性、N0和MDA含量的改变．用SD大鼠（12只,同上复制模型及分组）以免疫组织化学染色法观察海马iNOS和nNOS表达的变化。结果：与对照组相比,注入LPS后出现MAP显著而持续下降（P〈0．01）;海马部位神经元损伤明显;iNOS和nNOS表达增强,NOS活性、NO和MDA含量显著升高（P〈0．05、P〈0．01和P〈0．01）,SOD活性则降低（P〈0．01）。预先注入CCK-8可明显减轻上述变化,预先注入Pro则加剧以上变化。结论：CCK-8可减轻ES时脑内海马部位的损伤。其机制可能与其抗氧化作用和抑制NO的过量生成有关。     

A novel β-glucosidase from <Emphasis Type="Italic">Aspergillus fumigates</Emphasis> releases diosgenin from spirostanosides of <Emphasis Type="Italic">Dioscorea zingiberensis</Emphasis> C. H. Wright (DZW)

A β-glucosidase effectively releasing diosgenin from spirostanosides of Dioscorea zingiberensis C. H. Wright (DZW), named AfG, was purified from a strain of Aspergillus fumigates. The molecular weight of AfG was 113 kDa. Analysis of protein fragments by ESI-Q-TOF indicated that AfG was a β-glucosidase. The circular dichroism spectrum suggested that the main secondary structure of AfG in Milli-Q water was α-helixes. Atomic force microscopy revealed that it was a globular protein. AfG maintained high activity from pH 3.6 to 5.0 and from 50 to 90°C. With the strong heat stability, AfG retained 55% of its original activity at 65°C for 120 h. AfG utilized muti-3-O-glycosides of various steroidal saponins from DZW as substrate, such as trillin, diosgenin diglucoside, dioscin, deltonin and gracillin, to yield diosgenin, suggesting the possibility of producing diosgenin from total saponins of DZW using a single enzyme.     

应用iTRAQ定量蛋白质组学研究海分枝杆菌mkl的基因功能

【目的】通过分离海分枝杆菌野生株和mkl突变株的全菌蛋白,并进行差异蛋白质组分析,以期为探索分枝杆菌重要毒力基因mkl的功能提供新思路。【方法】以海分枝杆菌野生株和mkl突变株为研究材料,提取全菌蛋白,i TRAQ试剂标记后进行质谱鉴定和定量分析,并利用Uni Prot数据库对差异蛋白进行生物信息学分析。【结果】共鉴定出在野生株和mkl突变株中差异表达蛋白566个,其中在突变株中上调表达蛋白232个(比值≥1.4),下调表达蛋白334个(比值≤0.7)。生物信息学预测这些蛋白主要参与细菌脂质代谢、细胞壁和细胞进程、中间代谢、呼吸作用等生物学功能。其中Des A3下调最显著,其功能为脂肪酸去饱和酶,与油酸合成相关,进一步验证发现mkl突变株在不含油酸的固体培养基中生长受限,提示mkl可能在油酸的生物合成通路中发挥功能。【结论】通过i TRAQ分析了海分枝杆菌mkl突变株和野生株的差异表达蛋白谱,发现可能影响分枝杆菌油酸、脂质等合成代谢通路,为进一步研究mkl基因在分枝杆菌致病中发挥作用的相关机制奠定了基础。     

伯乐树种子不同条件贮藏下前后生理比较

对3个不同地区（浙江省遂昌县、福建省浦城县和浙江江山市）的伯乐树种子形态指标进行了测定。并分别设置3种贮藏方式（A为室内湿沙环境下贮藏;B为低温（4℃）湿沙下贮藏;C为低温（4℃）封口袋中贮藏）,对贮藏前后种子的发芽率、发芽势、含水量等生理指标进行了比较研究。结果表明,浦城县地区较另外二个地区的种子狭长而扁平,且质量较小。经130d的贮藏后,3个地区的种子内淀粉含量显著下降（P〈0．05）,含水量、蛋白酶活性、淀粉酶活性、蛋白含量和可溶性糖含量则均显著升高（P〈0．05）,从而使休眠得以解除。贮藏后的发芽率和发芽势显著提高（P〈0．05）,以湿沙低温下的发芽率和发芽势为最高。     

人血小板因子4在大肠杆菌中的高效表达及活性研究

为了提高人血小板因子 4(humanplateletfactor 4,hPF4)的表达 ,在PT7 7 hPF4表达质粒的基础上 ,采用PCR定位突变技术 ,改造人血小板因子 4(hPF4)cDNA基因片段 ,去除cDNA 3′端非翻译区AT富含序列 ,改用大肠杆菌强串联终止密码子TAATAA ,成功构建了高效表达质粒pBV2 2 0 hPF4。摇瓶发酵重组人血小板因子 4的产量达 1 60mg L较原表达质粒PT7 7 hPF4表达量提高了近 80倍。经包涵体的洗涤、变性、复性后 ,采用鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制实验测定复性后rhPF4的生物学活性 ,结果显示 :rhPF4具有抑制血管生成活性。