全文获取类型
收费全文 | 4873篇 |
免费 | 323篇 |
国内免费 | 343篇 |
出版年
2024年 | 8篇 |
2023年 | 76篇 |
2022年 | 167篇 |
2021年 | 256篇 |
2020年 | 159篇 |
2019年 | 189篇 |
2018年 | 198篇 |
2017年 | 147篇 |
2016年 | 208篇 |
2015年 | 272篇 |
2014年 | 354篇 |
2013年 | 382篇 |
2012年 | 425篇 |
2011年 | 364篇 |
2010年 | 238篇 |
2009年 | 226篇 |
2008年 | 243篇 |
2007年 | 169篇 |
2006年 | 169篇 |
2005年 | 166篇 |
2004年 | 165篇 |
2003年 | 148篇 |
2002年 | 106篇 |
2001年 | 118篇 |
2000年 | 84篇 |
1999年 | 98篇 |
1998年 | 46篇 |
1997年 | 34篇 |
1996年 | 37篇 |
1995年 | 34篇 |
1994年 | 30篇 |
1993年 | 20篇 |
1992年 | 28篇 |
1991年 | 22篇 |
1990年 | 31篇 |
1989年 | 8篇 |
1988年 | 18篇 |
1987年 | 12篇 |
1986年 | 9篇 |
1985年 | 8篇 |
1984年 | 10篇 |
1983年 | 8篇 |
1982年 | 7篇 |
1981年 | 5篇 |
1980年 | 6篇 |
1979年 | 3篇 |
1978年 | 3篇 |
1977年 | 3篇 |
1975年 | 6篇 |
1974年 | 3篇 |
排序方式: 共有5539条查询结果,搜索用时 15 毫秒
21.
Mutational analysis of the Saccharomyces cerevisiae ABD1 gene: cap methyltransferase activity is essential for cell growth.
下载免费PDF全文
![点击此处可从《Molecular and cellular biology》网站下载免费的PDF全文](/ch/ext_images/free.gif)
RNA (guanine-7-)-methyltransferase is the enzyme responsible for methylating the 5' cap structure of eukaryotic mRNA. The Saccharomyces cerevisiae enzyme is a 436-amino-acid protein encoded by the essential ABD1 gene. In this study, deletion and point mutations in ABD1 were tested for the ability to support growth of an abd1 null strain. Elimination of 109 amino acids from the N terminus had no effect on cell viability, whereas a more extensive N-terminal deletion of 155 residues was lethal, as was a C-terminal deletion of 55 amino acids. Alanine substitution mutations were introduced at eight conserved residues within a 206-amino-acid region of similarity between ABD1 and the methyltransferase domain of the vaccinia virus capping enzyme. ABD1 alleles H253A (encoding a substitution of alanine for histidine at position 253), T282A, E287A, E361A, and Y362A were viable, whereas G174A, D178A, and Y254A were either lethal or severely defective for growth. Alanine-substituted and amino-truncated ABD1 proteins were expressed in bacteria, purified, and tested for cap methyltransferase activity in vitro. Mutations that were viable in yeast cells had either no effect or only a moderate effect on the specific methyltransferase activity of the mutated ABD1 protein, whereas mutations that were deleterious in vivo yielded proteins that were catalytically defective in vitro. These findings substantiate for the first time the long-held presumption that cap methylation is an essential function in eukaryotic cells. 相似文献
22.
Optimization of affinity and ion-exchange chromatographic processes for the purification of proteins
This study documents several alternative approaches for the optimization of the ion-exchange and affinity chromatographic purification of proteins. In these approaches, the chromatographic process has been treated as a four-stage (adsorption, washing, elution, and regeneration) operation. Central to these investigations has been the elaboration of practical iterative procedures based on the use of theoretical models describing each of these stages. Predictions derived from these models have then been evaluated in terms of experimental data obtained using batch adsorption measurements in finite bath configurations and frontal breakthrough measurements with packed beds of different dimensions, containing nonporous and porous adsorbents of different selectivities and capacities for proteins. Commencing with the kinetic and distribution parameters derived from batch equilibrium measurements, the effect of the initial concentration of the target protein, the solid-liquid volume ratio, the superficial velocity and the column dimensions on the pressure drop, production rate, concentration profile, column utilization, and yield have been determined with packed beds. The potential of these iterative approaches to simplify the determination of key mass transfer and interaction parameters required for scale-up and economic optimization of chromatographic purifications of proteins has been examined using ion exchange, immobilized metal ion affinity, and triazine dye pseudo-affinity adsorbents of different selectivity and adsorption capacities. (c) 1996 John Wiley & Sons, Inc. 相似文献
23.
24.
25.
人重组IL6/IL2融合蛋白的变性、复性及纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
经超声破碎,分离已表达CH925包涵体,较系统地研究变性剂浓度、融合蛋白浓度对蛋白折叠的影响.在还原型及氧化型谷胱甘肽复性条件下,成功地将融合蛋白CH925折叠成具有IL6及IL2双活性蛋白,IL6的比活为2.3×108U/mg, IL2比活为2.2×106U/mg.经阴离子交换、凝胶过滤层析,获得一定纯度的CH925,配合反相HPLC.洗脱收集蛋白峰,CH925纯度为98%. 相似文献
26.
内毒素致大鼠肺损伤时肺组织β受体的变化与膜磷脂代谢的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
采用放射性配基结合分析法,现察内毒大致大鼠急性肺损伤时肺β-肾上腺素能受体(β-AR)的变化。分别用荧光偏振法和高效液相色谱测定肺组织细胞膜脂流动性和磷脂含量。结果显示:(1)静脉注射内毒素后4h,大鼠肺β-AR的最大结合容量明显降低,较对照组减少47%;(2)内毒素组肺膜脂流动性和磷脂含量均明显降低,同时伴有肺组织磷脂酶A2(PLA2)活性升高。提示:(1)β-AR下调导致其介导的功能减弱,在内毒素诱导的大鼠急性肺损伤发病机理中起一定作用;(2)PLA2激活是膜磷脂减少的重要原因,后者可导致膜脂流动性降低,结果引起β-AR的侧向扩散和旋转运劝减弱,从而减少β-AR与配基结合的机率,出现β-AK下调。 相似文献
27.
观察了hFPIL6/2对6.5Gyγ线照射NIH小鼠第10天造血功能恢复的影响。结果表明:照射小鼠连续4d给予hFPIL6/2250μg·kg-1·d-1,其脾重、CFU-8、骨髓有核细胞数及CM-CFU分别比对照组增加59.0%、278.5%、57.9%和138.2%,统计学处理均有显著差异;对此四项指标的改善也明显优于25μg组。另外,250μg剂量组小鼠外周血象30d的动态观察结果表明,hFPIL6/2不但能明显提高红细胞和血红蛋白的最低值,而且能使血小板的恢复提前。提示hFPIL6/2在促进血小板生成和促进红系造血方面可能具有良好的应用前景。 相似文献
28.
以草鱼ZC7901细胞株为材料,观察鱼类细胞从间期染色质到中期染色体的包装过程。主要通过(1)分裂期与间期细胞融合,诱导染色体早熟凝集;(2)染色体“伸长”处理;(3)培养细胞的低渗处理;(4)染色质辅展等方法,制作染色体标本,进行扫描和透射电镜观察。观察表明,鱼类染色质的基本结构与哺乳类细胞相同,也是直径约10nm的核丝。染色体的色装有两种形式:一种是多级螺旋化形成直径约300nm的染色单体, 相似文献
29.
30.
棉花枯萎病菌多聚半乳糖醛酸内切酶在pH大于7时不稳定,故对它进行多种化学修饰而又不影响其活性,必须在pHd小于7的体系中进行。本文报道将PGAUase在还原剂存在下,与稀酸处理的Sepharose 4B交联,获得较高活力的固定化酶。固定化酶催化动力学表明,最适pH为4,4,最适温度为55℃,在pH1至8.0范围内稳定。和溶液酶比较,对热稳定性提高,但对碱稳定性下降。以多聚半乳糖醛酸为底物,Km为0.27mmol/L,Vmax为66.67nmol/L·min,均大于溶液酶(Km=0.07mmol/L,Vmax=28.00nmol/L·min)。在pH4.8,30℃,聚半乳糖醛酸在固相酶的柱中循环水解不同的时间降解产物经圆盘电泳和等电聚焦测定,得到不同大小的寡糖片段混合物,证明固相酶和溶液酶的作用方式相同,同时使以酶解法制备一定大小的有生物活性的寡糖分子成为可能。 相似文献