慢病毒介导的GFP-Hsp90αE47A基因在HepG2细胞表达及对细胞增殖性影响的研究

目的：建立真核细胞表达的GFP-Hsp90αE47A基因重组慢病毒载体三质粒包装细胞系统,并检测其对细胞增殖性的影响,为进一步研究HSP90分子伴侣功能奠定基础。方法：制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统：转移质粒（Hsp90αE47A/psin-GFP）,包装质粒（ΔNRF）及包膜蛋白质粒（VSV-G）。磷酸钙法将三质粒共转染293T包装细胞,48h后收集病毒上清。将制备好的慢病毒颗粒感染HepG2细胞,在荧光显微镜下观察报告基因GFP的表达情况,Westernblot检测HepG2细胞GFP-Hsp90α表达。MTT法检测细胞增殖情况。结果：转染后的293T和感染后的HepG2细胞能观察到较强的绿色荧光,培养液上清病毒滴度约为3.0×103ifu/μl,HepG2细胞中有GFP-Hsp90α蛋白的表达。内源性Hsp90α表达无明显上升（为对照组的1.05±0.15倍,P〈0.05,t检验）,有明显外源性GFP-Hsp90αE47A蛋白的表达,为对照组内源性Hsp90α的0.68±0.12倍。外源性GFP-Hsp90αE47A蛋白的表达HepG2细胞增殖活性于第4d有明显抑制。（1.051±0.03vs1.349±0.05,P〈0.05,t检验）。结论：成功建立重组慢病毒载体的三质粒包装细胞系统,并将GFP-Hsp90αE47A基因在HepG2细胞中稳定表达,且并未引起细胞明显的热休克反应而导致的内源性Hsp90α增高;且能明显抑制细胞增殖,为后期Hsp90α分子伴侣功能进行研究奠定基础。     

菜州湾南岸滨海湿地的生态系统服务价值及变化

在提出莱州湾南岸滨海湿地生态系统服务价值分类系统和湿地类型系统基础上,提取1987年10月、2002年10月2个时段Landsat 7卫星遥感影像空间数据计算了莱州湾南岸滨海湿地的生态系统服务价值,并分析了湿地生态系统服务价值的变化.结果表明:湿地产出的水产品和原盐价值、气体调节服务价值和涵养水源服务价值是研究区湿地的核心生态系统服务价值,自然湿地的生态系统服务价值以气体调节服务价值和涵养水源服务价值为主,人工湿地的生态系统服务价值以产出的水产品和原盐价值为主.15年间湿地总的生态系统服务价值由38.953亿元降至27.743亿元,降低了28.8%;单位面积湿地的生态系统服务价值由4.291万元·hm-2降至3.031万元·hm-2,降低了29.4%.引起湿地总生态系统服务价值降低的主要原因是自然湿地转化为养殖池和盐田等人工湿地,自然湿地转化为人工湿地后,湿地总的生态系统服务价值中直接使用价值升高了,但间接使用价值和非使用价值降低了.为避免湿地生态系统服务价值的降低,应严格控制人工湿地建设,保护现有的自然湿地.     

川芎HPLC—APCI—MS特征图谱方法研究

建立川芎中药高效液相色谱-大气压化学电离质谱（HPLC-DAD-APCI—MS）特征指纹图谱的分析方法。采用HPLC-DAD-APCI-MS联用技术,对川芎甲醇提取物中活性成分进行了分离和初步鉴定,并对10批不同来源的川芎样品和1批当归样品进行分析,建立川芎有效部位的特征图谱。本文所建立的色谱方法精密度、重现性、稳定性良好,采用APCI—MS共计鉴定出川芎甲醇提取物中10种有效成分,酚酸类化合物为：ferulic acid;苯酞类化合物：senkyunolide I、senkyunolide H、senkyunolide A、3-butylphthalide、coniferylferulate、Z-ligustilide、E—butyli—denephthalide;苯酞二聚体类化合物：riligustilide、levistolide A。该方法是川芎药材质量控制的可靠方法。     

骨组织工程脱细胞骨基质的研究进展及存在问题

随着骨科学的发展,骨组织缺损治疗这一难题尤显突出,急需一种更为有效的疗法.骨组织工程是采用组织工程学的原理与方法,研制具有修复骨缺损能力的骨替代物的一门科学.经过20余年的发展,骨组织工程最终确立了将骨再生相关分子、成骨活性细胞与支架材料三者复合来构建组织工程骨的基本模式.支架材料是骨组织工程的核心,而作为支架材料之一的脱细胞骨基质(Acellular bone extracellular matrix,ABECM),近年来发展迅猛,展示出强大的生命力及临床应用前景.并且ABECM已有应用于临床试验的报道.本文将就此做一综述.     

芦苇型湿地生态系统的潜水水质状态研究

以白洋淀芦苇滩地为实验地,研究了湿地生态系统中潜水的水质状况.苇地潜水运动受到芦苇根孔的强烈影响.受芦苇根区生物呼吸作用的影响,潜水pH值(6.94士0.14)显著低于淀水(9.17).潜水中CO2分压约为淀水的85～1039倍.潜水水质类型在离淀2.7至6.7m发生变化,逐渐由ClN3转变为CCa.自苇地边缘至中央,HT(总硬度),Ar(总碱度)与∑C(主要离子总量)逐渐升高.潜水中Mg2+/Ca2+的平均摩尔比值为0.60,明显低于淀水(1.31).淀水和潜水Cl-,SO2-,Na++K+含量无显著差异,平均值分别是176,116和112mg/L.苇地濒水区为一过渡带,对磷氮污染物具备首先的过滤作用.在离淀0.7m处TN,TP和活性磷酸盐的减少量分别为63.3%,84.6%,80.8%.     

施肥与摘蕾对棉蚜、棉叶蝉种群数量及棉花产量的影响

分析比较了不同施氮水平(0-450kg·hm^-2)与不同摘蕾处理(0-12个·株^-1)对转Bt基因棉花(GK-12)和常规棉花(泗棉3号)的棉蚜、棉叶蝉种群数量以及棉花产量的影响．结果表明,两个品种的棉蚜、棉叶蝉种群数量和有效铃量没有显著性差异。在本实验水平下,施肥和摘蕾与施肥的交互作用对两种棉花的棉蚜数量有显著性的影响,而摘蕾、施肥和两者的交互作用对两种棉花的棉叶蝉数量没有显著影响．在花铃期,施氮肥能增加两种棉花的有效铃数．线性回归分析表明,两种棉花的棉蚜、棉叶蝉的数量与施氮肥量和摘蕾量成正相关关系;有效铃量与施氮肥量呈正相关,与摘蕾量呈负相关．     

下丘脑室旁核加压素能神经元参与电针刺激对实验性内脏痛的抑制

本实验采用内脏痛的实验模型,探讨室旁核中的加压素在针刺抑制内脏痛中的作用。实验结果如下:(1)大鼠在在射酒石酸锑钾(0.1％,10ml/kg,i.p.)后,出现可定量的扭体反应,能作为观察内脏痛的客观指标。(2)电针对内脏痛有抑制效应,即具有镇痛作用。(3)电刺激室旁核,能加强电针对内脏痛的抑制效应,损毁室旁核,则此抑制效应基本消失。(4)脑室注射加压素抗血清(14μl)或加压素拮抗剂[d(CH_2)_5Tyr(Me)-AVP,500ng/5μl]都能明显减弱电针的抑制效应。(5)腹腔注射加压素拮抗剂(10μg/kg),不能翻转电针的抑制效应。上述实验结果表明,下丘脑室旁核的加压素能神经元参与了电针刺激对实验性内脏痛的抑制。     

利用分子标记18S rDNA对天牛高阶元进化关系的研究

【目的】构建天牛总科高阶元的进化关系,为解决天牛各亚科之间进化关系和归属提供依据。【方法】本研究采用18S rDNA(V4、V7区)分子标记,分析和测定了49种天牛基因序列,并结合GenBank数据库中3科2亚科21种天牛的18S rDNA基因序列,采用邻近法(Neighbor Jointing,NJ)、贝叶斯推论法(Bayesian Inference,BI)和最大似然法(Maximum Likelihood),对天牛总科3科6亚科的70种天牛基因序列构建进化树,探讨天牛高阶元类群的进化关系。【结果】研究表明:序列分析比对后得到序列为703 bp,碱基A、T、C、G的含量分别为21.1%、26.3%、23.6%和28.9%;变异位点(Variable sites)98个占全部位点的13.9%,简约信息位点(Parsimony informative sites)45个占全部位点的6.4%;转换(Transition)/颠换(Transversion)的平均值R值为2.79,转换大于颠换。进化树结果显示沟胫天牛亚科Lamiinae、天牛亚科Cerambycinae、锯天牛亚科Prioninae和瘦天牛科Disteniidae为单系性进化群,这与传统形态学分类结果相似。【结论】本研究成功构建了天牛总科高阶元的系统发育树,研究证明18S rDNA(V4、V7区)是探讨天牛高级阶元分类有效的分子标记。     

中国西北六盘山区原尾虫研究

通过研究中国西北六盘山区采集到的原尾虫标本,对华山蚖Huashanentulus huashanensis Yin,1980进行了重新描述,补充了第Ⅰ幼虫、第Ⅱ幼虫和前成虫的描述,重新描绘了颚腺结构图,并描述了体表腺孔.同时记述华山蚖属1新种,六盘华山蚖Huashanentulus liupanensis sp.nov.,新种的主要特征是颚腺管粗短,前足跗节上感器a极长大,并与华山蚖进行了比较区别.文中列出了六盘山区原尾虫的种类名录,共包括15种,分别是青海夕蚖Hesperentomon chinghaiensis Yin,1982,棘腹夕蚖H.pectigastrulum Yin,1984,中国原蚖Proturentomon chinensis Yin,1984,天目巴蚖Baculentulus tianmushanensis Yin,1963,河南肯蚖Kenyentulus henanensis Yin,1983,九寨肯蚖K.jiuzhaiensis Tang et Yin,1986,华山蚖Huashanentulus huashanensis Yin,1980,六盘华山蚖H.liupanensis sp.nov.,中华诺蚖Nosekiella sinensis Bu et Yin,2008,双腰富蚖Fujientomon dicestum Yin,1977,东方古蚖Eosentomon orientalis Yin,1965,大眼古蚖E.megalenum Yin,1989,日升古蚖E.asahi Imadaté,1961,三纹拟异蚖Pseudanisentomon trilinum Zhang et Yin,1981,小孔拟异蚖P.minystigmum Yin,1979.新种模式标本保存在上海昆虫博物馆.     

山女鳟肌肉营养组成分析

山女鳟(Oncorhynchus masou)原产于日本山区河川,冷水性鲑亚科(Salmoninae)鱼类,色彩典雅,肉质细嫩,品味鲜爽自古就受到日本人民的珍爱,视其为具有女性美的鱼类,称之为山女鳟。1996年中国水产科学研究院黑龙江水产研究所从日本引进山女鳟经试养获得成功。目前已成为冷水性鱼增养殖及游钓业的新品种,给国人带来新的享受。山女鳟引进后一些学者对它的生化遗传结构和鱼卵的运输及饵料营养等方面都相继进行了研究报道,为山女鳟的人工增养殖、品种改良及保护遗传多样性提供了理论依据。有关鱼类肌肉营养成分的研究报道很多,但关于山女鳟肌肉营养成分与评价却未见报道。本研究采用生化分析手段对山女鳟肌肉组成进行综合分析,旨在为山女鳟种质标准的建立、保存和合理开发利用及饵料的研制提供基础资料。