基于流式细胞术分选的高效表达外源基因细胞的筛选

目的：以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告基因,用流式细胞术筛选高表达EGFP的细胞,从而获得外源基因高效表达细胞株。方法：构建在EGFPC端编码区融合新霉素（neomycin）抗性基因的融合基因EGFP-Neomycin,将其插入pcDNA3.1（＋）载体,构建EGFP-Neomycin融合基因表达载体pcDNAEN,转染CHO-K1细胞,G418加压筛选和倒置荧光显微镜观察证实所表达的EGFP-Neomycin融合蛋白具有新霉素抗性和激发EGFP荧光双功能;将编码组织型纤溶酶原激活剂（tPA）的cDNA插入pcDNAEN中CMV启动子下游,构建表达tPA的表达载体pcDNAEN/tPA。结果：流式细胞术分析和tPA纤维蛋白溶解活性测定表明,pcDNAEN/tPA转染CHO-K1细胞的EGFP相对荧光强度（RFT）的自然对数值与tPA表达水平呈明显的直线相关关系,相关系数为0.983;比较部分未经流式细胞仪分选的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆和RFT分布在100～1000的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆的tPA表达水平,经流式细胞术分选获得的细胞克隆的tPA平均表达水平和最高表达水平分别是未经分选获得的细胞克隆的3.9倍和4.1倍。结论：构建的EGFP-Neomycin融合基因具有双功能,建立了利用流式细胞术筛选外源基因高效表达物细胞株的方法。     

菌物分子系统学研究进展

分子生物学技术的发展以及计算机的广泛使用给菌物系统学在分子水平上带来了革命性变化,本文简要回顾了菌物分子系统学研究现状与分析方法,并就目前菌物分子系统学中存在的问题以及该研究的发展方向提出了一些看法。     

中国山矾属一新种

潮安山矾新种图1SymplocoschaoanensisF.G.WangetH.G.Ye,sp.nov.(subg.Hopea)Fig.1 SpeciessimilisS．euryoidiHand.-Mazz.,quaramulispubescentibus,floresolitario,fructibuscylin-dricisdiffert. Guangdong(广东)：ChaoanXian（潮安县）,FenghuangMountain(凤凰山),alt.1000－1200m.H.G.Ye3986（holotype,IBSC）. Evergreenshrubs,2－3mhigh.Branchesterete,glabrousandblackish.Leavesalternate,thickleathery,elliptic,obovateornarrowlyobovate,1.5－3.4cmlong,0.7－1.5cmbroad,apexacute,rarelyacuminat…     

泽兰实蝇雌成虫的寄主选择行为

【背景】泽兰实蝇是紫茎泽兰的专性寄生天敌,已成为控制紫茎泽兰的重要因子。泽兰实蝇的寄主选择力对其控制紫茎泽兰至关重要,但相关报道还很少。【方法】采用"Y"形嗅觉仪在实验室内测定泽兰实蝇雌成虫对寄主植物——紫茎泽兰及其他植物的选择行为,以及紫茎泽兰受重金属胁迫后泽兰实蝇对其选择的变化。【结果】不同日龄的泽兰实蝇雌成虫对紫茎泽兰的选择性不具有显著差异;交配与否对雌成虫的寄主选择没有显著影响;雌成虫对紫茎泽兰的选择显著高于黄蒿、水葫芦和蓝花鼠尾草等非寄主植物;雌成虫对花期及机械损伤的紫茎泽兰选择更显著;紫茎泽兰经重金属镉(Cd)、铅(Pb)和锌(Zn)单一及复合处理后,泽兰实蝇雌成虫对其选择性显著降低。【结论与意义】泽兰实蝇雌成虫的寄主选择性随植物种类、寄主植物(紫茎泽兰)的生育期、健康状况及重金属胁迫而变化,这有助于更好地利用泽兰实蝇控制紫茎泽兰。     

人工四倍体鲤鲫后代遗传同一性的FCM及RAPD证明

人工四倍体鲤鲫是本实验室采用人工染色体组叠加构建的一个以雌核发育为生殖模式的鲫克隆系,现已繁殖至第五代.它生长快、体型好、抗病力强、易捕捞,比普通二倍体鲫和三倍体鲫经济性状更优良,将具有广阔的生产应用前景.从表型看,子代是由四倍体鲤鲫原代母本拷贝而成,与母本极其相似,表明异源精子启动发育的后代无分离现象.我们曾对原代四倍体雌核发育生殖方式的遗传进行过基因组、形态学和同工酶分析研究[1-4],为了获得更进一步的证据,本文应用FCM和RAPD分子遗传标记方法进行验证.     

光滑足距小蠹虫道真菌的组成和变化

本文同时采用分离和电镜扫描技术研究了光滑足距小蠹Xylosandrus germanus(Blan dford)不同发育阶段坑道和贮菌器内真菌种类的组成和变化。Ambrosiella hartigii是光滑足距小蠹扩散、蛀孔、越冬和体壁新硬化的成虫贮菌器内唯一分离到的真菌,而刚羽化的雌成虫贮菌器中没有分离到任何真菌种类,体壁新硬化的成虫贮菌器中真菌的分离频率最低。坑道内共分离到4种真菌：A. hartigii,Acremonium kiliense和2种镰刀菌Fusarium spp.。从卵期到蛹期的坑道中,A. hartigii总是能被分离到,占分离物总数的百分率较高,达40％～60％;而在成虫期坑道中,A. kiliense和Fusarium sp.1被分离率较高,都为34.6％。扫描电镜观察表明,A. hartigii为卵期到蛹期坑道中的优势种,而镰刀菌Fusarium spp.则是成虫期坑道中的优势种。这些结果均表明,Ambrosiella hartigii,Acremonium kiliense和2种镰刀菌Fusarium spp.是光滑足距小蠹的虫道真菌,而且这些真菌种类组成和优势种类是随着蠹虫的发育阶段而变化的。真菌种类的组成和变化可 能与幼虫和成虫的营养需求以及虫道真菌的生长特性有关。     

中国西北地区中国林蛙各居群的分类学研究(两栖纲:蛙科)

采用形态学比较和数值分类相结合,对中国西北部分布地中国林蛙Ｒａｎａ ｃｈｅｎｓｉｎｅｎｓｉｓ各居群间（包括分布于青藏庙的地区的原定种或亚种）的差差水平进行了探讨。结果认为：分布于中国西北部高原地区的各居群其形态特征和数值分析这〖其中包括原定名为Ｒａｎａ ａｍｕｒｅｎｓｉｓ ｋｕｋｕｎｏｒｉｓ（Ｎｉｋｏｌ ｓｋｉｉ,１９１８,青海湖）,Ｒ．ｗｅｉｇｏｌｉｄ（Ｖｏｇｔ,１９２４,四川甘孜和德格）,Ｒ．     

珠江口超微型浮游植物时空分布及其与环境因子的关系

对珠江口及近海区域进行了夏季和冬季超微型浮游植物(0.2-3μm)调查,分析了其时空分布及其与环境因子的关系.夏季,珠江口浮游植物密度与磷酸盐成显著正相关,且N/P远远高于30,表明浮游植物受到P限制.夏季超微型藻数量比冬季高一个数量级,其丰度与盐度成显著正相关而和营养盐(溶解性无机氮(DIN),PO4-P,SiO4-Si)显著负相关,表明珠江口超微型藻受到径流的负面影响,表现出其数量在虎门附近海域低,随着咸淡水混合程度的加剧逐渐增大的分布特征;超微型浮游植物叶绿素a在总叶绿素a中的比例也表现为河口上游低,到万山群岛附近海域达到最大,推测近海高光照、低营养盐更适宜超微型藻的生长,同时也说明超微型浮游植物适应贫营养环境的生态特点.     

植物无融合生殖鉴定方法的研究进展

由于利用无融合生殖途径可以固定杂种优势,从而改良现有植物的育种策略,因此对无融合生殖的研究已成为生物学科的新生长点,为了利用植物的无融合生殖,首先必须建立,发展和完善一套简单,准确的鉴定体系,目前有关植物无融合生殖的鉴定的方法,主要可以分为5大类型：（1）形态学观察法;（2）显微观察法;（3）生化鉴定法;（4）分子生物学的方法;（5）其它方法,主要对以上5类方法的各各鉴定方法进行了介绍,对几种已被证实有效方法的优缺点进行了比较,并就今后的改进方向进行了探讨。     

Inter-species comparison of 7-hydroxycoumarin glucuronidation and sulfation in liver S9 fractions

Summary UDP glycosyltransferases (UGTs) and sulfotransferases (SULTs) are phase II enzymes that interact with a number of xenobiotics in humans and animals. Species differences in enzymatic characteristics have seldom been investigated. Liver S9 fractions are commonly used for studying phase II metabolism in vitro. The objective of this study was to characterize the UGT and SULT activities in liver S9 fractions from various species including humans, monkeys, dogs, and rats. A single substrate, 7-hydroxycoumarin (7-HC), at several concentrations was incubated at 37° C with the S9 reaction matrices along with necessary cofactors. The rate of formation of two metabolites, 7-HC-glucuronide (7-HC-G) and 7-K_m and V_mas values were calculated for each species. For the UGTs, the apparent K_m and V_max for 7-HC-G formation varied greatly among different species, with dog UGTs having both the highest K_m and V_max values. In contrast to UGTs, the K_m for 7-HC-S formation showed no significant difference among humans, monkeys, and rats (approximately 3 μM). However, the K_m in dog was 8.7 μM. Species differences with respect to phase II metabolism must be carefully considered when selecting an in vitro model system to study various aspects of drug metabolism.