棉铃虫酪氨酸羟化酶基因的分子特性及功能分析

【目的】酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)是黑色素形成的关键酶,在昆虫表皮骨化过程中扮演重要角色。本研究旨在获得棉铃虫Helicoverpa armigera TH基因序列,并研究其分子特性、表达模式和功能,为更深入探析该基因作用机理奠定基础。【方法】通过生物信息学和分子生物学技术获得了棉铃虫TH基因序列,利用qRT-PCR分析该基因在棉铃虫不同生长发育阶段的表达模式;利用qRT-PCR技术,分别测定了蜕皮激素20E(400 ng/头)处理不同时间和RNAi成功干扰蜕皮激素受体基因(EcR)前提下再用20E(400 ng/头)处理后,棉铃虫5龄幼虫TH表达量变化;采用生物化学方法检测鞣化激素(30 μg/mg组织)和环腺苷酸(cAMP, 200 ng/mg 组织)处理后棉铃虫幼虫脂肪体中TH活性。【结果】获得了棉铃虫酪氨酸羟化酶基因TH (GenBank登录号: MF440319) cDNA片段,长2 270 bp,开放阅读框1 686 bp,编码561个氨基酸残基。该基因在棉铃虫整个发育期均表达,其中在卵期第3天、2龄幼虫第1天、3-5龄蜕皮期、预蛹期和成虫羽化第1天表达量相对较高。研究还发现,400 ng/头 20E注射能够促进TH的转录;在成功干扰并调低幼虫EcR转录水平的前提条件下(对照仅注射dsGFP)再注射20E,对TH表达量无明显影响;而鞣化激素(30 μg/mg组织)和cAMP(200 ng/mg组织)均显著提高了TH的酶活性。【结论】20E在转录水平参与了TH的表达;鞣化激素和cAMP均能够提高TH活性,在蛋白水平上对TH进行调控。     

应对城市雨洪危机的郊野公园营建策略探析——以夹河郊野公园为例

基于城市雨洪和中国郊野公园的发展概况与现状问题,结合国内外研究与实践阐述了郊野公园应对城市雨洪危机的必要性。以获得国际、国内多个奖项的烟台市夹河郊野公园项目为例,在剖析城市水问题的基础上确立设计目标与理念,提出了高效能应对城市雨洪与低成本建设郊野公园的营建策略,并从水资源、水安全、水环境和水生态方面总结了项目绩效。最后提出了新时代郊野公园建设的要求,以期为同类研究和项目实践提供有益借鉴与参考。     

环链棒束孢Isaria cateinannulata发酵液的化学成分分析

环链棒束孢广泛存在于自然界,并且在植物病虫害防治中起重要作用,目前相关的研究多集中于其发酵条件、生物学特性及杀虫毒力的研究,对该菌发酵液中的化学物质研究甚少。本文依次用石油醚和乙酸乙酯对环链棒束孢发酵液进行分级萃取,借助气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术和超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱法（UPLC/Q-TOF-MS）鉴定分析石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和萃余物中的化学物质组成。共鉴定69个化合物的结构,其主要化学成分为酚类、酯类、烷烃、烯烃、卤代烃和酮类非极性/弱极性的小分子化合物等,其中邻苯二甲酸二丁酯、角鲨烯、环戊烯丙菊酯物质、瓜叶菊素Ⅰ等物质具有特殊的作用。发酵液提取物中还含有多种小分子化学物质,应结合多种色谱分离手段和波普学手段对代谢产物进行分离、纯化和结构鉴定,为其次生代谢产物的广泛利用提供数据支撑。     

成纤维细胞生长因子23在胃癌中的表达及作用研究

目的:探讨成纤维细胞生长因子23(Fibroblast growth factor 23, FGF23)在胃癌中的表达,并研究其对胃癌细胞增殖和侵袭的作用。方法:收集2014年7月-2017年12月来我院手术治疗的胃癌患者,免疫组化检测FGF-23和Ki-67的表达;采用Transwell小室进行胃癌细胞侵袭实验;MTT实验检测胃癌细胞的增殖情况。结果:免疫组化的结果显示胃癌组FGF-23的平均光密度是477.5,对照组为46.65(t=10.53,P0.0001),相关性分析的结果显示胃癌组织中FGF-23与Ki-67增殖指数具有正相关性(r=0.6489,P=0.0020);Transwell侵袭实验的结果显示低浓度的FGF-23具有一定的促进胃细胞侵袭的作用,高浓度的FGF-23能够显著的促进胃癌细胞侵袭,相对于对照组和低浓度组,侵袭的细胞数目分别上升了2.19倍和74.77%,结果差异明显(t=16.24,P0.0001;t=9.811,P0.0001);MTT实验的结果显示低浓度的FGF-23具有一定的促进胃细胞增殖的作用,高浓度的FGF-23能够显著的促进胃癌细胞增殖,相对于对照组和低浓度组,吸光度分别上升了1.70倍和37.37%倍,结果差异明显(t=13.81,P0.0001;t=4.227,P=0.0018)。结论:我们的研究发现FGF-23在胃癌组织中高表达,其能促进胃癌细胞的增殖和侵袭,我们的研究为胃癌的诊断和精准治疗提供了一个新的靶点。     

胸神经阻滞和肋间神经阻滞对乳腺癌根治术患者血流动力学、术后镇痛及呼吸功能的对比研究

目的:比较胸神经阻滞和肋间神经阻滞对乳腺癌根治术患者血流动力学、术后镇痛以及呼吸功能的影响,为乳腺癌根治术患者的临床麻醉选择提供参考。方法:选择2017年3月至2018年3月医院收治的120例行乳腺癌根治术的患者作为研究对象,按照麻醉方式不同分为观察组和对照组各60例,其中观察组患者给予胸神经阻滞复合全身麻醉,对照组患者给予肋间神经阻滞复合全身麻醉。比较两组患者术后2h、6h、12h、24h、48h的静态和动态的视觉模拟评分(VAS)评分,并比较两组患者切皮前5 min(T_0)、切皮即刻(T_1)、切皮后15 min(T_2)、30 min(T_3)、钉皮即刻(T_4)及拔管后15 min(T_5)的血流动力学以及呼吸功能指标,并分析两组患者术中用药、术后镇痛泵使用情况以及术后不良反应。结果:两组患者术后静息状态下不同时点的VAS评分差异无统计学意义(P0.05);动态状态下,观察组患者的VAS评分明显低于对照组(P0.05)。T_1-T_5期间,观察组患者的平均动脉压(MAP)、心率(HR)均明显低于对照组,每分钟通气量(MV)明显高于对照组(P0.05)。观察组患者的术中瑞芬太尼消耗量、丙泊酚用量、镇痛泵有效按压次数以及补救镇痛例数均明显低于对照组;恶心呕吐(PONV)、尿潴留、嗜睡等不良反应明显低于对照组(P0.05)。结论:与肋间神经阻滞相比,胸神经阻滞治疗乳腺癌根治术患者可以有效增强术后镇痛效果,术中血流动力学平稳,减少阿片类药物用量,降低术后不良反应发生率,改善术后呼吸功能,效果显著,值得临床推广使用。     

丹参多酚酸盐联合前列地尔治疗糖尿病肾病的效果

目的:探讨丹参多酚酸盐联合前列地尔治疗糖尿病肾病的效果。方法:选取2015年11月～2018年11月我院收治的糖尿病肾病患者114例,采用随机数字表法将患者分为两组。对照组在常规治疗的基础上给予前列地尔注射液,观察组在对照组的基础上给予丹参多酚酸盐注射液。比较两组患者的临床治疗效果、治疗前后肾功能、血糖水平、血清可溶性细胞间粘附分子1(s ICAM-1)及内皮素(ET-1)水平的变化及不良反应的发生情况。结果:治疗后,观察组治疗的总有效率为91.23%,显著高于对照组(73.68%,P0.05)。两组患者治疗后的血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、β2-微球蛋白(β2-MG)、尿蛋白排泄率(UAER)、血清s ICAM-1及ET-1水平均较治疗前显著下降(P0.05),且观察组以上指标均显著低于对照组(P0.05)。两组患者治疗前后及两组间的糖化血红蛋白(HbALc)及空腹血糖(FPG)水平比较均无统计学差异(P0.05)。两组患者均未发生严重不良反应,轻微不良反应均经对症处理后好转,且不影响治疗。结论:丹参多酚酸盐联合前列地尔可显著改善糖尿病肾病患者的肾功能、提高临床治疗效果,且不影响血糖水平,可能与其显著降低患者血清s ICAM-1及ET-1水平有关。     

缺血预处理通过激活自噬保护肾缺血-再灌注损伤

目的:探讨缺血预处理对缺血-再灌注所致急性肾损伤的保护作用与可能机制。方法:将健康雄性SD大鼠18只随机分为三组:假手术组(Sham组)、肾缺血组(I/R组)、实验组,Sham组大鼠开腹后游离左侧肾蒂血管,不夹闭,观察60 min关闭腹部。I/R组大鼠开腹后切除右肾,左肾蒂血管分离,观察15 min后用无损伤动脉夹持续夹闭左肾蒂血管45 min后,关闭腹部,恢复左肾血流。实验组开腹后切除切除右肾,左肾蒂血管分离,行4个循环夹闭左肾蒂血管1 min/再灌注4 min预处理后,无损伤动脉持续夹闭45 min,关闭腹部,恢复左肾血流。比较各组大鼠术后尿素氮值(Burea nitrogen,BUN)与肌酐值(Serum creatinine,SCR)水平,肾组织病理学评分及微管相关蛋白轻链3(Microtubule-associated protein l light chain 3,LC3)和自噬基因Beclin-1的表达。结果:所有大鼠在实验过程无死亡。I/R组、实验组再灌注后4 h、24 h的BUN与SCr值显著高于Sham组(P0.05),肾脏组织病理学评分显著高于Sham组(P0.05),实验组以上指标均显著低于I/R组(P0.05);I/R组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1相对表达量显著高于Sham组(P0.05),实验组以上指标均显著低于I/R组(P0.05)。实验组大鼠再灌注后24h LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1相对表达量与肾组织病理学评分、BUN、SCr值呈显著相关性(P0.05)。结论:缺血预处理可能通过激活自噬,减轻缺血-再灌注所致急性肾损伤,并改善肾功能。     

五加生化胶囊对药物流产出血模型大鼠的影响及机制研究

目的:观察五加生化胶囊对药物(米非司酮配伍米索前列醇)致流产出血大鼠模型的保护作用,并探讨其作用机制。方法:建立大鼠药物流产出血模型,分为正常组(K)、受孕对照组(KY)、模型组(M)和给药(G)组,观测大鼠子宫出血时间、出血量、子宫指数、子宫形态和血液流变学改变,采用放射免疫法、ELISA法、免疫组织化学法和IPP6.0图像分析系统对比观察了大鼠血清雌二醇(E2)、血浆层粘连蛋白(LM)和纤维连接蛋白(FN)含量变化,以及子宫组织中FN、LM和雌、孕激素受体(ER、PR)表达的变化。结果:与M组比较,G组药物流产出血大鼠子宫血量由0.40±0.15**mL减少到0.22±0.16#m L,出血时间由124.4±22.0**h减少到71.3±10.4##h,血清E2含量在第14天由22.47±6.37pg/mL到39.57±5.19##pg/mL,子宫ERα表达OD值由0.036±0.025**升高到0.208±0.072##和PR的表达OD值由0.043±0.023*升高到0.095±0.035#,血浆和子宫组织LM和FN水平降低,血液流变性得以改善。结论:五加生化胶囊具有减少药物流产出血大鼠子宫出血量和出血时间的作用,其作用机制主要为降低了血浆和子宫组织FN的含量,起到使残留的蜕膜组织顺利排出的目的,减少了残留蜕膜对子宫的刺激;提高血清中E2含量和子宫组织中ERα和PR的表达,同时改善了血液流变性,使受损子宫组织局部血液循环得到改善加速了受损子宫的恢复速度。     

食品级乳酸乳球菌pNZ8149-luc质粒的构建及表达

目的:构建能够稳定表达萤火虫荧光素酶报告基因(luc)的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis, L.lactis)食品级表达系统,以便后续研究对目的基因进行示踪。方法:从pGL4.10质粒中PCR扩增萤火虫荧光素酶报告基因,测序,克隆至载体pNZ8149,构建pNZ8149-luc表达质粒;电击转化宿主乳酸乳球菌NZ3900,采用乳糖筛选法获得重组的乳酸乳球菌,Nisin诱导,采用微孔板发光检测仪检测荧光素酶的存在,Western Blot检测目标蛋白luc的表达。结果:PCR扩增的荧光素酶报告基因成功克隆至pNZ8149质粒,并电击转化宿主乳酸乳球菌NZ3900,得到乳酸乳球菌表达系统NZ3900/pNZ8149-luc。Nisin诱导后,检测到荧光素酶随诱导时间的延长活性逐渐增强,时间超过24 h之后荧光素酶活性逐渐下降。Western Blot检测到目标蛋白luc在胞内表达。结论:成功构建了p NZ8149-luc表达载体,并能够在乳酸乳球菌体内稳定表达。     

氢化泼尼松联合泵注甲氧明预防老年患者髋关节置换术骨水泥反应的临床效果观察

目的:观察氢化泼尼松联合泵注甲氧明预防老年患者髋关节置换术骨水泥反应的临床效果。方法:将腰硬联合麻醉下行髋关节置换术的60例老年患者随机分为观察组(A组)与对照组(B组),观察组在骨水泥植入前静脉给予氢化泼尼松0.5 mg/kg,并以3μg·kg-1·min-1持续泵注甲氧明,对照组在相同时点给予地塞米松0.1 mg/kg。记录和比较两组患者骨水泥植入前(T0)、植入时(T1)、植入后3分钟(T2)、植入后5分钟(T3)、植入后10分钟(T4)及植入后30分钟(T5)时的动脉收缩压(SBP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)、血氧饱和度(SPO_2)及中心静脉压(CVP)、动脉血PH值、动脉氧分压(PO_2)、动脉二氧化碳分压(PCO_2)及血乳酸(Lac)水平的变化。结果:与T0时比较,对照组T2、T3时SBP、MAP及PO_2明显下降,HR显著上升,而同时点观察组SBP、MAP及PO_2较对照组明显升高,HR较对照组显著降低(P0.05),观察组各时点SBP、MAP及HR比较差异无统计学意义(P0.05)。与T0时比较,对照组T3、T4时血清Lac水平显著升高(P0.05),同时点观察组与之比较明显降低(P0.05)。观察组各时点pH、PO_2、Lac及PCO_2均无明显变化(P0.05)。结论:老年患者行髋关节置换术在骨水泥植入前预防性给予氢化泼尼松及泵注甲氧明能使患者血流动力学平稳,改善机体微循环及组织氧供。