溶瘤腺病毒靶向杀灭葡萄膜黑色素瘤的实验研究

葡萄膜黑色素瘤是成人最严重的原发性恶性肿瘤之一.传统的治疗方法,包括手术、放射治疗和化学治疗效果都不是很理想.溶瘤腺病毒H101,能够特异性地在p53突变的肿瘤细胞中复制并杀伤肿瘤细胞,同时对正常细胞影响较少,且已由中国国家食品药品监督管理总局批准上市.为了研究H101对葡萄膜黑色素瘤的治疗效果,通过体外感染葡萄膜黑色素瘤细胞,发现H101能够显著抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡,抑制细胞周期,而对正常的ARPE-19细胞没有影响.在体内实验中,建立了SP6.5细胞的荷瘤小鼠模型,在H101治疗后抑制了肿瘤的生长,延长了动物寿命.上述结果表明,溶瘤腺病毒H101治疗葡萄膜黑色素瘤是一种可行的方法.     

动物组织蛋白酶L=like基因家族的进化分析

目的：组织蛋白酶L-like家族是在溶酶体中发现的一类非常重要的半胱氨酸组织蛋白酶。其主要功能为催化各种蛋白质的水解,并通过水解蛋白质参与到许多的生理调节过程当中。根据序列比对分析和传统的功能分类,在动物中,组织蛋白酶L．1ike家族成员包括组织蛋白酶L、V、S、K、H和F。但是这些家族成员之间的进化关系仍然没有详细研究分析清楚。本课题主要研究组织蛋白酶L-like家族成员之间的进化关系。方法：本研究通过搜集整理22个物种的177条组织蛋白酶L-1ike家族蛋白的序列,并构建系统发育进化树来分析组织蛋白酶L-like家族各成员之间的进化关系。结果：序列数据结果显示,串联重复在组织蛋白酶L-1ike家族的进化过程中发生。斑马鱼的组织蛋白酶L,爪蟾的组织蛋白酶S和K,大鼠和小鼠的组织蛋白酶L都发生过明显的串联重复事件。进化树结果显示了组织蛋白酶H、S和K、L和V之间的进化关系,组织蛋白酶S和K在脊椎动物出现的进化过程中,从组织蛋白酶L中分化出来,与他们在脊椎动物体内的特异性功能,以及脊椎动物在进化过程中分化产生的特异性功能相对应。结论：在物种进化的过程中,组织蛋白酶L-1ike家族成员F、H、S和K、L和V按时间顺序分化,这表明组织蛋白酶L-1ike基因家族结构和功能的分化与新的物种和新的功能出现密切相关。     

α-硫辛酸对2型糖尿病早期肾病的保护作用研究

目的：探讨注射用α-硫辛酸对2型糖尿病早期肾病（DN）的保护作用。方法：将56例2型糖尿病早期肾病患者随机分为治疗组28例,采用注射α-硫辛酸加常规治疗;对照组28例,仅给予常规治疗。治疗前后测定尿微量白蛋白排泄率（UAER）、超氧化物歧化酶（SOD）、／丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）水平。结果：与治疗前比较,治疗组UAER及MDA均显著降低（P〈0．05）,SCr、SOD及NO显著升高（P〈0．05）。对照组SCr、UAER、SOD、MDA及NO与治疗前比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：注射用α-硫辛酸能减少2型糖尿病肾病患者尿微量白蛋白的排泄,对早期肾病具有保护作用。     

集成干扰素突变体IIFN/165S的构建及其生物学评价

目的:通过定点突变,构建集成干扰素(IIFN/165S),以期获得高效的新型药物分子.方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素IIFN基因的第165位密码子由CGT突变为AGT.扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).在LB培养基中培养,经IPTG诱导表达的IIFN/165S经包涵体变性、复性以及层析纯化后,经SDS-PAGE、Western blot和MALDI-TOF-MS分析,用WISH-VSV系统进行抗病毒活性测定同时应用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:IIFN/165S以包涵体形式表达.纯化后,IIFN/165S的纯度大于95％,分子量为18172,比活性(7.63±0.22)×108 IU/mg,诱导细胞凋亡率呈剂量依赖.结论:构建了IIFN/165S的表达载体,并成功地在大肠杆菌中表达,获得了高纯度高活性突变分子IIFN/165S.     

HbA1c和FPG水平与2型糖尿病患者视网膜病变的相关性分析

目的：探讨糖化血红蛋（HbA1c）、空腹血糖（FPG）与2型糖尿病患者视网膜病变（DR）的相关性。方法：对我院2010年1月-2012年12月住院或门诊的336例2型糖尿病（T2DM）患者进行眼底检查或眼底血管荧光素造影检测,按有无视网膜病变分为视网膜病变（DR）组和无视网膜病变（NDR）组,并对HbA1c、FBG水平进行检测。结果：DR组较NDR组HbA1c水平高,差异有统计学意义（P〈0．05）,HbA1c水平和DR分期呈正相关（I=0．526,P〈0．001）,而DR组和NDR组FPG水平差异无无统计学意义（P〉0．05）。结论：可将HbA1c作为2型糖尿病患者视网膜病变发生和发展的监测指标之一。     

呼吸内科病原菌的分布及耐药情况

目的：对十堰市人民医院2011年呼吸内科病原菌的分布及耐药情况进行研究,为临床合理使用抗菌药物及控制医院感染提供依据。方法：采用临床流行病学调查方法回顾性收集分析2011年1月-2011年12月呼吸内科病原菌分布及主要病原菌耐药率,对分离鉴定出的病原菌选用常用抗生素进行药敏实验,实验采用K-B法按NCCLS标准进行。结果：病原菌以革兰阴性杆菌为主,其中又以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌为主,革兰阳性球菌以金黄色葡萄球菌为主。产酶和不产酶肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌耐药率有明显差异。铜绿假单胞菌对头孢噻肟、氨曲南耐药率较高。结论：应根据药敏结果合理使用抗生素,以提高治疗效果,减少耐药菌株产生,预防医院内感染。     

早期胃腺癌原代细胞适配子的筛选与鉴定

胃腺癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一,由于没有针对早期胃腺癌有效的诊断方法,目前胃腺癌手术治疗还主要针对中晚期患者,预后差. 本文应用cell-SELEX技术,筛选早期胃腺癌原代细胞的适配子,为早期胃腺癌的诊断提供新的思路. 从早期胃腺癌组织中分离得到早期胃腺癌原代细胞,应用体外合成全长88 bp中间含52 bp随机序列的单链DNA文库,通过对PCR扩增条件的优化,借助生物素-链霉亲和素磁珠系统,经cell-SELEX反复筛选,可获得针对早期胃腺癌原代细胞的特异性适配子.经12轮cell-SELEX筛选,ssDNA文库与早期胃腺癌原代细胞的亲和力由1 560上升到4 336,表明亲和力较高的适配子得到逐步富集. 经克隆和测序,应用软件分析可知,30个克隆子中编号为C17和C27的2个序列完全一致,具同源性,二级结构预测可知单链DNA形成不同的茎环结构可能是适配子与早期胃腺癌原代细胞作用的结构基础. 特异性分析显示,胃腺癌原代细胞组与正常胃粘膜上皮细胞、空白对照组之间荧光强度值差异非常显著（P＜001）;正常胃粘膜上皮细胞组与空白对照组之间差异不显著（P＞005）. 经亲和力测定,各适配子与早期胃腺癌原代细胞的解离系数达到nmol/L,具有很高的亲和力.利用cell-SELEX技术成功筛选到早期胃腺癌原代细胞的适配子,为胃腺癌的早期诊断与治疗药物靶点方面的研究奠定了实验基础.     

人耳聋相关基因GJB3的结构特征及生物信息学分析

目的：对问隙连接蛋白Cx31编码基因GJB3的编码区进行生物信息学预测和分析。方法：利用C1ustalW2、MEGA5．05和VMDl．9等生物信息学软件对GJB3的保守性、系统进化、三维空间结构和错义突变角度进行分子结构预测和功能分析。结果：系统进化树的构建验证了脊椎动物各纲亲缘关系远近;保守性分析为GJB3致病性突变少于GJB2提供了可能的原因;三维结构预测和错义突变分析解释了GJB3突变的致病性机制。结论：对GJB3基因及其蛋白结构和功能的分析将为后续实验研究奠定基础。     

FoxO1在病毒感染和炎症发生中的作用

FoxO1是Foxs家族的成员,该家族大多数为转录因子.FoxO1作为Foxs家族的重要转录因子之一,它不仅具有调控转录的作用,也参与许多生理过程,例如糖代谢、细胞凋亡、脂肪代谢、肌细胞的分化、生殖和肿瘤的发生等.近些年,也有越来越多的研究证实FoxO1在病毒感染和炎症发生等过程也具有重要作用,但其中机制还不清楚.本文主要讲述了几种病毒感染及炎症发生期间,FoxO1在其中发挥的重要作用.