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891.
多重RT-PCR一步法技术同时检测猪瘟病毒和蓝耳病病毒方法的建立以及初步应用 总被引:6,自引:0,他引:6
猪瘟病毒和蓝耳病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大。根据猪瘟病毒(CSFV)和猪蓝耳病(PRRS)的基因保守序列设计了2对针对这2种病毒的特异引物,并建立了多重RT-PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明能同时扩增得到2条与试验设计相符的167bp(CSFV)和320bp(PRRS)特异性条带,同时具有较好的特异性;敏感性检测结果表明,临床阳性的样品提取的核酸稀释1000倍后仍能检测出CSFV和PRRSV。本方法的建立对于这2种病毒病的早期快速检测具有十分重要的意义。 相似文献
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Hisashi Mizutani Hideaki Sugawara Ashley M. Buckle Takeshi Sangawa Ken-ichi Miyazono Jun Ohtsuka Koji Nagata Tomoki Shojima Shohei Nosaki Yuqun Xu Delong Wang Xiao Hu Masaru Tanokura Kei Yura 《BMC structural biology》2017,17(1):4
Background
More than 7000 papers related to “protein refolding” have been published to date, with approximately 300 reports each year during the last decade. Whilst some of these papers provide experimental protocols for protein refolding, a survey in the structural life science communities showed a necessity for a comprehensive database for refolding techniques. We therefore have developed a new resource – “REFOLDdb” that collects refolding techniques into a single, searchable repository to help researchers develop refolding protocols for proteins of interest.Results
We based our resource on the existing REFOLD database, which has not been updated since 2009. We redesigned the data format to be more concise, allowing consistent representations among data entries compared with the original REFOLD database. The remodeled data architecture enhances the search efficiency and improves the sustainability of the database. After an exhaustive literature search we added experimental refolding protocols from reports published 2009 to early 2017. In addition to this new data, we fully converted and integrated existing REFOLD data into our new resource. REFOLDdb contains 1877 entries as of March 17th, 2017, and is freely available at http://p4d-info.nig.ac.jp/refolddb/.Conclusion
REFOLDdb is a unique database for the life sciences research community, providing annotated information for designing new refolding protocols and customizing existing methodologies. We envisage that this resource will find wide utility across broad disciplines that rely on the production of pure, active, recombinant proteins. Furthermore, the database also provides a useful overview of the recent trends and statistics in refolding technology development.896.
L-精氨酸是一种半必需氨基酸,广泛应用于食品、制药、饲料等行业。【目的】当前对L-精氨酸生产菌株的研究,极少涉及离子转运领域。在本研究中,发现在发酵时适量添加外源K~+有利于促进钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum) SYPA5-5合成L-精氨酸。【方法】在C. crenatum SYPA5-5发酵培养基外源添加0.5 g/L和2.5 g/L的K_3PO_4,取对数期发酵样品进行转录组数据分析,挖掘出K~+转运相关的阳离子转运ATP酶CTAP1以及单价阳离子/H~+逆转运蛋白Mrp1A,研究其在C. crenatum SYPA5-5快速合成L-精氨酸阶段,对菌株生长及L-精氨酸合成的影响。【结果】对基因ctap1和mrp1分别进行敲除和过表达,深入研究突变株对L-精氨酸合成的影响。研究发现同时过表达离子转运蛋白CTAP1和Mrp1A更有利于胞内离子、pH稳态和渗透压调节,最终提高L-精氨酸的产量。在补料分批发酵中分别过表达Mrp1A、CTAP1以及同时过表达Mrp1A和CTAP1的菌株L-精氨酸产量分别达到61.4 g/L、63.9 g/L和65.3 g/L,产率分别为0.383 g/g、0.392 g/g和0.395 g/g,比C. crenatum SYPA5-5分别提高了34.9%、38.0%和39.1%。【结论】CTAP1是特异性的K~+转运ATP酶,可以将培养基中的K~+运输到胞内。同时Mrp1A可将胞内K~+和Na~+等单价阳离子运输到胞外,将胞外H~+运输至胞内,中和胞内L-精氨酸所导致的碱性环境,从而维持胞内pH稳定。CTAP1和Mrp1A的研究为解析离子转运机制和L-精氨酸合成之间的联系奠定了基础。 相似文献
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从一名国内感染的艾滋病人采血,分离其外周血单核细胞(PMCs)。首先与正常的PMCs共培养,4周后检测其HIV-1p24抗原(ELISA)达到峰值。用此时的细胞及其上清分别感染Jurkat-tat、CEM、MT4细胞,可很快地在这三株细胞中检测到HIV生长,HIV在Jurkat-tat细胞中生长情况最好,同时用病人血清直接感染Jurkat-tat和MT4细胞,4周后检测其细胞上清HIV-1p24抗原(ELISA法)为阳性,但OD值很低(约为PMC共培养组的一半)。用病人的少量全血与正常PMCs共培养,得到的结果与分离病人PMCs法相近。应用间接免疫荧光法(IFA)、免疫酶法(IEA)、蛋白印迹法及HIV-1POl基因和Env基因特异引物的聚合酶链反应(PCR)等证实为HIV-1病毒。分离的HIV在Jurkat-tat细胞中连续传代,细胞被感染后2-3天即出现以大量融合细胞为主的细胞病变,感染后7-10天细胞几乎全部死亡。病毒在连续传代过程中的生长特征及致细胞病变特征不变。此病毒命名为CA-2毒株。 相似文献
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Analysis and comparison of the bacterial community in fermented grains during the fermentation for two different styles of Chinese liquor 总被引:2,自引:0,他引:2
Wang HY Zhang XJ Zhao LP Xu Y 《Journal of industrial microbiology & biotechnology》2008,35(6):603-609
Bacterial populations in fermented grains during fermentation may play important roles in Chinese liquor flavor. PCR-based denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) and 16S rRNA gene library analysis were performed to analyze the bacterial community structure of two styles of liquor. The results of DGGE profiles showed that bacterial diversity decreased with the fermentation process and Lactobacillus acetotolerans became the predominant species at the end of the fermentation. But the obvious differences of bacterial community appeared in the middle stage of two styles of liquor fermentation, in which the different upstream production techniques were used. Moreover, 16S rRNA gene libraries of two styles were constructed. A total of 125 and 107 clones, chosen from two libraries, were grouped into 46 and 49 operational taxonomic units (OTUs) by amplified ribosomal DNA restriction analysis. According to sequencing results of clones, the predominant bacteria in strong aroma style fermented grains were those from the class Bacilli, Bacteroidetes, and Clostridia, whereas the predominant bacteria in fermented grains of roasted sesame aroma style belonged to Bacilli, Flavobacteria, and Gammaproteobacteria. Molecular analysis of the bacterial diversity of the liquor fermentation will benefit the analysis of important microorganisms playing key roles in the formation of liquor flavor components. 相似文献
900.
用Lowry法测定冻干注射用胸腺肽中多肽含量时,由于冻干前所加赋形剂甘露醇的干扰,其测定结果明显偏高(P<0.0005)。本文经试验证明,用等量于检品中的甘露醇作空白对照,可以消除这种干扰。 相似文献