基因前定点敲入FLAG标签表达的FLAG-SND1蛋白参与胞内应激颗粒的形成

CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9 nuclease) 基因编辑技术是近年来新兴的一种可以实现基因特异性敲除和敲入的技术。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑系统,将3×FLAG标签定点敲入HeLa细胞SND1基因前方,使细胞内源性表达的SND1蛋白带有3×FLAG标签,并观察SND1与应激颗粒及加工体的定位情况。设计针对SND1基因起始密码子ATG附近的sgRNA,以px459为表达载体,构建出重组真核表达质粒。设计含有3×FLAG及待插入位置上下游150 bp同源臂的序列,经公司合成获得重组质粒。将2个质粒共同转染HeLa细胞,使用嘌呤霉素筛选阳性细胞,挑取单克隆后培养。Western 印迹表明,细胞表达3×FLAG-SND1融合蛋白质。提取细胞基因组DNA进行测序。测序无误获得稳定株后,用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,发现与WT细胞相比无显著性差异。同时,使用0.5 mmol/L亚砷酸钠处理,细胞发生氧化应激,eIF2α蛋白磷酸化增加,胞浆中出现应激颗粒,SND1与应激颗粒标志蛋白TIAR存在共定位现象,但不存在与加工体蛋白DCP1α的共定位。     

Chemical Constituents of the Branches and Leaves of Picrasma chinensis P.Y. Chen and Tyrosinase Inhibiting Activity

One new alkaloid, picrasine A, two new quassinoids, picralactones A−B, together with eleven known compounds were isolated from Picrasma chinensis P.Y. Chen. The structures of these compounds were determined using 1D and 2D NMR, HR-ESI-MS, and IR spectroscopic data, and by comparison with published data. Some compounds were tested for tyrosinase inhibiting activity, however, none of them exhibited strong inhibitory effects.     

综述——纳米材料与药物输递：基于介孔二氧化硅的多功能纳米药物输送体系研究进展

介孔二氧化硅因具有有序介孔结构、比表面积大、生物相容性好及表面易于修饰等特点, 在生物医药等领域显示出了极大的应用前景, 目前, 基于介孔二氧化硅的纳米药物输送体系已成为众多科研工作者研究的热点. 本文讨论了靶向修饰及成像等多功能化的介孔二氧化硅药物输送体系的研究进展, 同时详细介绍了一系列具有特定形态结构（如中空/摇铃状、纳米管等）的介孔二氧化硅基载药体系的制备、表面修饰及在其在药物输送、释放等领域的应用研究. 最后, 对目前介孔二氧化硅基药物输送体系（主要包括具有特定形态结构的介孔二氧化硅药物载体、多功能复合药物载体及可生物降解的介孔二氧化硅药物输送体系等）在实际应用中存在的问题进行了分析并对其未来的发展前景进行了展望.     

肺腺癌A549/DDP细胞周期变化及其多药耐药性

用Fura-2/AM标记药物敏感的肺腺癌细胞A₅₄₉和抗顺铂药物的肺腺癌细胞A₅₄₉/DDP两种细胞胞内游离Ca²⁺,用碘化丙锭(PI)标记细胞DNA,检测其胞内Ca²⁺的变化及两种细胞增殖能力和细胞周期.实验结果表明,抗药性细胞株A₅₄₉/DDP胞浆内游离Ca²⁺的浓度仅为药物敏感细胞株A₅₄₉的1/3左右,同时前者的细胞增殖能力较后者明显增强,而且细胞周期也明显缩短.当用BAPTA-AM和EGTA或A₂₃₁₈₇和Thapsigargin处理细胞以降低或升高其胞内自由Ca²⁺浓度时可改变细胞的生长周期,二者也呈现明显差别.这些结果表明,对顺铂产生耐药性的人肺腺癌A₅₄₉/DDP细胞胞内Ca²⁺浓度的降低,可能影响细胞的增殖,缩短细胞的生长周期,特别是影响起决定作用的G1期,从而有利于肿瘤细胞多药耐药特性的维持.     

野油菜黄单胞菌原质体分泌黄原胶的电镜观察

经透射电镜观察首次发现野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris）原生质体在以蔗糖为底物的高渗营养液中,能合成并分泌丝状黄原胶。     

环状RNA在慢性病发病中作用机制的研究进展

环状RNA作为一种对基因表达进行精细调节的重要非编码RNA,不仅增加了非编码RNA介导的基因调控网络的复杂度,也加深了疾病发病机制研究的深度。虽然近年来环状RNA的功能研究有了长足的进步,确定了其作为ceRNA能够特异性吸附miRNA,解除相应miRNA对下游靶mRNA的抑制作用,此类研究也表明核外环状RNA介导的凋亡活化,增殖抑制和细胞与细胞间的交流在疾病发生发展过程中是至关重要的,但我们对环状RNA的了解还只是冰山一角,特别是病理状态下其作用的具体机制仍然需要我们不断探索。在此,本综述的主要目的是回顾目前关于环状RNA在心血管疾病、中枢神经系统疾病和癌症等慢性病领域的研究,探讨以上慢性病发病过程中环状RNA所起的作用以及展望未来环状RNA在疾病发病机制领域的研究。     

采后ABA、GA_3对芒果细胞壁降解酶、类胡萝卜素含量的作用

芒果后熟初期上部和内部ＰＧ活性高于下部和外部。后熟期ＰＧ活性上升至高峰后下降,ＰＭＥ活性则不断下降。ＡＢＡ能使ＰＧ活性增高,ＧＡ３则抑制了ＰＧ活性,并推迟了ＰＧ活性的高峰期。不过,ＧＡ３或ＡＢＡ处理对后熟期ＰＭＥ活性都没有一致的影响。芒果后熟期α－胡萝卜素、α－胡萝卜素和叶黄素含量不断升高,ＧＡ３能使三者上升速度减缓;ＡＢＡ则显著加快β－胡萝卜素和叶黄素的上升。从外源β－胡萝卜素引起ＰＧ活性上升的结果,讨论了后熟期类胡萝卜素与ＰＧ活性的间接关系。     

Principal expression of two mRNA isoforms (ABCB 5alpha and ABCB 5beta ) of the ATP-binding cassette transporter gene ABCB 5 in melanoma cells and melanocytes

ATP-binding cassette (ABC) transporters play a pivotal role in physiology and pathology. We identified and cloned two novel mRNA isoforms (ABCB 5alpha and ABCB 5beta) of the ABC transporter ABCB 5 in human melanoma cells. The deduced ABCB 5alpha protein appears to be an altered splice variant containing only a putative ABC, whereas the ABCB 5beta isoform shares approximately 70% similarity with ABCB1 (MDR1) and has a deduced topological arrangement similar to that of the whole carboxyl terminal half of the ABCB1 gene product, P-glycoprotein, including an intact ABC. Northern blot, real-time PCR, and conventional RT-PCR were used to verify the expression profiles of ABCB 5alpha/beta. We found that the melanomas included among the NCI-60 panel of cell lines preferentially expressed both ABCB 5alpha and ABCB 5beta. However, ABCB 5alpha/beta expression was undetectable in two amelanotic melanomas (M14 and LOX-IMVI). The expression profile of ABCB 5alpha/beta in all of the other melanomas of the panel was confirmed both by RT-PCR and by sequencing. Neither ABCB 5alpha nor ABCB 5beta expression was found in normal tissues such as liver, spleen, thymus, kidney, lung, colon, small intestines or placenta. ABCB 5alpha/beta mRNAs were also expressed in normal melanocytes and in retinal pigment epithelial cells, suggesting that ABCB 5alpha/beta expression is pigment cell-specific and might be involved in melanogenesis. Our findings indicate that expression of ABCB 5alpha/beta might possibly provide two novel molecular markers for differential diagnosis of melanomas and constitute potential molecular targets for therapy of melanomas.     

基于低拷贝核基因GBBSI的禺毛茛复合体系统进化研究

禺毛茛多倍体复合体及其近缘种系统进化关系复杂,杂交与多倍化现象同时存在。该复合体内高倍性植物的形成及扩散过程仍需进一步研究。首次克隆了毛茛属植物低拷贝核基因颗粒结合型淀粉合成酶 I (GBBSI )基因,并利用其构建禺毛茛多倍体复合体及其近缘种的系统进化树和网状进化关系,进而证明其适合于研究毛茛属植物种下系统发育研究。结果表明：匍枝毛茛与多倍体复合体关系密切,参与了该多倍体复合体的起源和进化;禺毛茛起源于茴茴蒜和卷喙毛茛,扬子毛茛起源于茴茴蒜和匍枝毛茛;在该类群中茴茴蒜是个关键种,它在多倍体复合体中可能起着枢纽基因组的重要作用。