圣路易斯脑炎病毒NS2B-NS3蛋白酶的原核表达及其抑制剂的筛选

【目的】圣路易斯脑炎病毒(St. Louis encephalitis virus,SLEV)属于黄病毒科,是一种单股正链RNA病毒。黄病毒编码的非结构蛋白NS3在病毒复制以及多聚蛋白加工过程中起着重要作用,NS2B是其发挥作用的重要辅助因子。因此,NS2B-NS3蛋白酶复合物是抗病毒药物的重要靶标。本研究旨在构建SLEV NS2B-NS3蛋白酶的原核表达系统并建立其抑制剂的高通量筛选方法,从而发现其小分子抑制剂。【方法】通过PCR扩增SLEVNS2B-NS3蛋白的编码区,构建原核表达质粒;在大肠杆菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-thiogalactoside)诱导得到可溶性的NS2B-NS3蛋白,并用镍亲和层析方法进行纯化;基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer)技术检测NS2B-NS3蛋白酶活性,建立其抑制剂的高通量筛选平台。【结果】SLEV NS2B-NS3蛋白酶纯化程度高达95%以上,基于酶活测定的抑制剂筛选平台准确可行。对700多个上市药物进行筛选后,发现原花青素对SLEVNS2B-NS3蛋白酶具有明显的抑制活性。【结论】本研究为SLEVNS2B-NS3蛋白酶抑制剂提供了一种操作方便、高通量的筛选方法,并首次发现了原花青素具有抑制SLEV NS2B-NS3蛋白酶活性的功能,可以作为治疗SLEV感染的潜在靶向药物。     

云南阿昌族的红细胞血型分布

调查了１０２名云南阿昌族的ＡＢＯ,ＮＮＳｓ,Ｒｈ和Ｐ系统的红细胞血型,结果表明,阿昌族的基因频率ｐ（０．３８７４）是迄今国内调查过人群中的最高值,Ｅ（０．２４５９）和ＣＤｅ（０．６９３６）基因或染色体频率较高,而Ｓ（０．０６８６）和Ｐ１（０．１０８９）频率较低;Ｍｓ（０．５９５０）连锁率高于Ｎｓ（０．３３５３）;未发现ＳＳ和Ｒｈ（－Ｄ）阴性表现型。     

The discovery of anthranilic acid-based MMP inhibitors. Part 3: incorporation of basic amines.

Anthranilic acid derivatives bearing basic amines were prepared and evaluated in vitro and in vivo as inhibitors of MMP-1, MMP-9, MMP-13, and TACE. Piperazine 4u has been identified as a potent, selective, orally active inhibitor of MMP-9 and MMP-13.     

PLZF-RARα融合基因的生物学功能研究

构建了8个PLZF-RARα融合基因突变体.用“滞后”胶实验证实PLZF-RARα与PML-RARα一样,亦能以同二聚体的形式结合到维甲酸反应元件(RARE)上,且PLZF的POZ结构域介导PLZF-RARα同二聚体的形成和稳定.但两者与RARE的结合类型存在差异,在DR5G,PML-RARα的结合强度大于PLZF-RARα;而在DR5T,则是PLZF-RARα强于PML-RARα.进一步工作证实PLZF-RARα能与RXR形成异二聚体,并产生4种复合物.用免疫沉淀法发现PLZF-RARα亦能与PLZF形成异二聚体,而且也是通过POZ结构域介导PLZF-RARα和PLZF异二聚体的形成.同PML-RARα一样,PLZF-RARα对RARE的结合反应亦受维甲酸调控.     

Antiviral flavonoids from the root bark of Morus alba L

A prenylated flavonoid, moralbanone, along with seven known compounds kuwanon S, mulberroside C, cyclomorusin, eudraflavone B hydroperoxide, oxydihydromorusin, leachianone G and alpha-acetyl-amyrin were isolated from the root bark of Morus alba L. Leachianone G showed potent antiviral activity (IC(50) = 1.6 microg/ml), whereas mulberroside C showed weak activity (IC(50) = 75.4 microg/ml) against herpes simplex type 1 virus (HSV-1). Their structures were elucidated by spectroscopic methods.     

重组毕赤酵母高密度发酵生产碱性果胶酶的策略

重组Pichia pastoris GS115表达碱性果胶酶的诱导阶段, 最佳初始菌体浓度和甲醇诱导浓度分别为122 g/L和20 g/L, 两者之间最佳比值范围是0.16~0.20 g/g (甲醇/菌体浓度). 在此基础上通过生长阶段甘油的指数流加, 以及诱导阶段基于甲醇比消耗速率和溶氧等参数进行甲醇流加的方式, 将甲醇与菌体浓度比例控制在0.171~0.195 g/g之间. 此时, 酶活达到430 u/mL, 生产强度为4.34 u/mL/h, 实现了碱性果胶酶高效生产。     

Comparison of mammalian VIP bioactivities in dispersed acini from guinea pig pancreas

Mammalian VIP is identical in pig, cow, human, rat, dog and goat but differs in the guinea pig (GP) in positions 5, 9, 19, and 26. We now demonstrate that GP, goat, rat and synthetic mammalian VIP are indistinguishable in their inhibition of binding of 125I-labelled synthetic VIP to dispersed acini from GP pancreas and that GP, pig, dog, goat and synthetic VIP are also similar in their efficacy and potency in stimulating amylase release from these acini. Thus in spite of the differences in amino acid sequence, GP VIP appears to have full biologic potency in its action on dispersed acini from GP pancreas.     

血红细胞超氧化物歧化酶(SOD)制备工艺的研究初报

本文报告了本实验室设计的由血红细胞自溶液60℃热变性, 乙醇——氯仿法除血红蛋白,旋转蒸发法减压浓缩抽去氯仿、乙醇,硫酸铵分级盐析法沉降SOD,Sepbadex G-75层析提纯SOD等步骤构成的一条成本低、设计合理、简便实用的分离纯化SOD的工艺路线。     

涡度相关观测的能量闭合状况及其对农田蒸散测定的影响

涡度相关法被认为是测定农田蒸散量的标准方法。然而,能量不闭合现象在涡度相关测量中普遍存在。分析能量不闭合对涡度相关观测的影响,对于提高涡度相关观测精度具有重要意义。以蒸渗仪法为参照,探讨涡度相关观测的能量闭合状况对农田蒸散测定的影响,在导致涡度相关观测能量不闭合的诸多因素中,寻找对蒸散测定有影响的因素。结果表明:涡度相关观测的白天能量平衡比率(EBR)呈秋冬高、春夏低的变化特征,麦季日均EBR范围在0.26—2.84之间,平均1.15;玉米季日均EBR范围在0.19—2.59之间,平均0.78。无论麦季或玉米季,涡度相关法测定的平均蒸散量(ETec)均明显低于蒸渗仪法观测值(ETL),但两者显著相关(P<0.01),并有相似的季节变化。平均蒸散比(ETec/ETL)麦季约为0.61,玉米季约为0.50。在冬小麦田和夏玉米田,ETec/ETL均与EBR显著相关(P<0.01)。麦田种植密度大,下垫面较均匀,蒸散比与EBR成正比(P<0.01),且不受叶面积指数(LAI)大小影响;反之,玉米田种植密度小,只有当LAI>1,下垫面变得较均匀后,蒸散比与EBR的关系才变得显著(P<0.01)。风速小时ETec/ETL与EBR显著相关,风速增加时二者相关性减弱。尤其在玉米田,当摩擦风速(u*)大于0.3 m/s时,ETec/ETL与EBR的相关性不再显著。风速小时,大气湍流微弱,湍流的涡旋较大。在有限的观测时段(0.5h)内,涡度相关仪的传感器难以捕捉足够的湍涡能量,所测湍流能量偏低,导致能量不闭合。以上结果为应用能量平衡比率校正农田蒸散提供了可能途径。     

阿尔采末病与免疫炎症反应的相关性

阿尔采末病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＡＤ）可能是中枢神经系统内免疫活性细胞过程激活而导致的免疫炎症反应,其病灶周围存在大量激活的小胶质细胞和星形细胞,可产生大量补体,炎性细胞因子,急性期反应物等导致神经细胞损伤,破坏和死亡。同时体内寂体调节剂和抑制性细胞因子的水平明显长高,虽然不足以保护神经元免遭破坏,但却提示抑制或阻断中枢神经系统的免疫炎症反应的药物可能在ＡＤ的防治中具有重要作用。