牛呼吸道合胞体病毒G蛋白的截短表达与鉴定

经生物学软件DNA Star分析,将牛呼吸道合胞体病毒G基因截短成2个片段G1和G2。然后用人工合成的牛呼吸道合胞体病毒G基因为模板,用PCR分别扩增G1和G2基因片段,其大小分别为570 bp和308 bp。将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导后G1和G2基因片段都获得了表达,且都为可溶性表达。用Ni柱亲和层析法在非变性条件下纯化重组蛋白,经免疫印迹试验鉴定证明纯化的重组蛋白G1具有良好的抗原性和特异性,而重组蛋白G2无反应性。应用纯化的重组蛋白G1进行的间接ELISA与免疫印迹试验在国内牛血清中检测到了BRSV血清抗体。本研究所表达的重组蛋白G1为基于牛呼吸道合胞体病毒G蛋白的血清学诊断方法的建立与牛呼吸道合胞体病毒G蛋白生物学功能的研究奠定了基础。     

地高辛标记探针检测重组定点突变巴曲酶蛋白宿主DNA残留量的研究

目的 建立检测重组定点突变巴曲酶原液中外源性DNA残留量的方法.方法 从重组定点突变巴曲酶酵母工程菌提取基因组DNA作为模板,制备地高辛标记探针.此探针与样品进行点样杂交,并进行显色反应.结果 3批重组定点突变巴曲酶原液中,每人份剂量的宿主DNA残留量均＜10 ng.结论 该方法检测灵敏度较好,特异性较强,可用于重组定点突变巴曲酶的检测.     

Production of biologically active Bacillus anthracis edema factor in Escherichia coli

Anthrax is caused by the gram-positive spore-forming bacterium Bacillus anthracis. The anthrax toxin consists of three proteins, protective antigen (PA), lethal factor (LF), and edema factor (EF). PA facilitates the translocation of LF and EF into the cytosol of mammalian cells. LF is thought to be a zinc-dependent metalloprotease that results in death. EF is a calmodulin- and calcium-dependent adenylate cyclase that causes edema upon entrance into the cytosol by elevating the cAMP levels in cells. Previous efforts to produce recombinant EF (rEF) in Escherichia coli yielded only 2.5 mg of rEF per liter of culture. In this work, we produced soluble rEF in large quantities in both the periplasm and cytoplasm of E. coli from shake flasks and fermentors. The rEF protein was purified by standard chromatography and yielded >97% pure, biologically active rEF. Yields of purified rEF from medium cell density fermentations resulted in up to 2.38 g/L of highly pure, biologically active rEF protein. These results exhibit the ability to generate gram quantities of active rEF from E. coli.     

不同密度大叶相思林的竞争效应

对不同密度4年生大叶相思Acacia auriculiformis林分的竞争指数进行研究,以便为合理管理和利用大叶相思人工林提供理论依据。结果表明,随着密度的降低,大叶相思林的各器官竞争指数呈减小趋势。在同一密度条件下,地上竞争指数明显大于地下竞争指数。由于地下生长与地上生长的相互作用,各竞争指数之间具有明显的相关性。通径分析表明,地上竞争对总竞争的直接作用明显大于地下竞争对总竞争的直接作用。     

水稻、大麦幼苗胚乳中的苯丙氨酸解氨酶调节因子(PAL-R)

从萌发的水稻、大麦胚乳中,通过85％硫酸铵盐析、DE52纤维素和Sephadex G100柱层析,获得部分纯化的苯丙氨酸解氨酶调节因子(PAL—R),研究其基本性质,及体外PAL-R对PAL和PAL-I的影响,表明它们之间存在着相互作用。     

中国历年H3N2亚型人流行性感冒病毒血凝素基因的序列测定及分析

测定了27株中国1968～2000年的人H3N2亚型流行性感冒(流感)病毒分离株HA1基因的核苷酸全序列,其中包括7株流行代表株:A3/Beijing/1/68、A3/Guangdong/243/72、A3/Beijing/39/75、A3/Guangdong/38/77、A3/Beijing/266/85、A3/Beijing/30/95、A3/Shanghai/1/98.阐明了这些流感病毒分离株的基因结构、变异本质、进化发展过程以及这些毒株与其它分离株之间的遗传进化亲缘关系,为应用生物信息学研究流感病毒基因组变异规律等打下了基础.初步的进化分析表明,历年来的人流感病毒H3N2亚型的起源和进化分为两个分支谱系,并在1984/1985年进行了交替转换;且有一部分人的H3N2亚型分离株其HA1核苷酸序列与猪分离株的进化亲缘关系最为接近.     

幼猫单眼视剥夺和反缝过程中显示的双眼竞争机制

本研究以光栅为刺激所同时产生的图形视觉诱发电位和图形视网膜电图为指标,测定了单眼视剥夺和缝的新生幼猫个体在发育不同阶段的空间频率调谐曲线,并与同龃正常猫,成年正常猫进行了比较研究。结果显示,在０．１２－１．５ｃ／ｄ空间频率范围内,正常幼猫单独刺激其左眼和右眼所驱动的Ｐ－ＶＥＰ振幅相近,但都明显地比双眼驱动的为小。在单眼剥夺的幼猫,由剥夺眼所驱动的Ｐ－ＶＥＰ振幅大幅度下降,健康眼所驱动的Ｐ－ＶＥＰ则     

植物根际促生菌（PGPR）的研究与应用前景

植物土传病害难以防治,植物根际促生菌(plant growth—promoting rhizobacteria,PGPR)的深入研究和发展为解决这一难题展现了诱人的前景．PGPR能够高密度地在植物根际定殖,兼有抑制植物病原菌、根际有害微生物,以及促进植物生长并增加作物产量的作用,更重要的是有些PGPR能够诱导植物产生系统抗性(induced systemic resistance,ISR),从而提高植物整体的抗病能力．近20年来,国外这一领域的研究十分活跃,已有很多成功应用的PGPR产品,国内应大力加强基础与应用的研究,并推进其产业化的发展．     

辐照外源DNA导入番茄研究——D1、D2代分析

辐照外源DNA导入番茄后,供体叶形不但在D1代上得到表达,而且能遗传到D2代。并且在D1代,其果形、果实大小以及Vc含量等都有明显变化。为验证该技术的效果和重复性,又进行了第二期辐照外源DNA导入番茄试验,发现在D1代幼苗中,供体的显性基因正常叶形,仍有一定的几率在受体中得到表达。结果与第一期试验相同。野生种番茄DNA龙辐照作供体导入后,也获得了野生种叶形在受体中得到表达的D1代植株,说明辐照外源DNA导入番茄技术效果好,重复性好,便于进行远缘杂交。     

保守GTP酶ObgE的分子伴侣活性研究

分子伴侣(molecular chaperone)能够帮助新生多肽链或错误折叠的蛋白质形成天然构象,但本身又不是成熟蛋白质的组成成分。蛋白质需要分子伴侣的帮助,才能够从核糖体合成的新生肽链折叠成有生物活性的大分子。E.coli的ObgE蛋白是保守的GTP酶,ObgE蛋白参与信号转导、蛋白运输和细胞周期调控,并与E.coli在氨基酸饥饿下的应激反应有关。本实验通过分子克隆,将E.coli ObgE蛋白的基因克隆到表达载体pET-28a中,转化到E.coli BL21进行蛋白表达纯化。纯化后的ObgE蛋白通过柠檬酸合成酶变复性实验、α-葡萄糖苷酶变复性实验、牛碳酸酐酶变复性实验,检测ObgE蛋白的分子伴侣活性,发现ObgE具有一定的分子伴侣活性,为该蛋白的研究应用奠定了基础。