杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与功能分析

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶（NR）基因5′上游序列序列,并对其功能进行分析。方法: 利用BamHI、EcoRI、HindIII、PstI、SalI、Xbal 6种限制性内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建成盐藻基因组步行文库。采用 LA-PCR方法,从上述盐藻步行基因组文库中扩增NR基因5′上游序列序列,测序并进行分析。为检测其表达特性,构建了该片段与GUS 嵌合基因的表达载体pNR-GUS, 通过电击法将所构建的重组表达载体转化盐藻,组织化学染色法观察GUS的表达。结果: 从盐藻基因组步行文库中扩增出约1200bp特异片段,序列分析表明5′上游序列含有启动子的特征性序列。GUS瞬时表达染色结果显示,该DNA 片段具有硝酸盐诱导和铵抑制的启动子活性。结论：所克隆的盐藻的5′上游序列可能是一种具有"开关"活性的可控性启动子。     

改变细胞膜的脂肪酸组成可促进乳腺癌细胞凋亡

目的: 研究n-6脂肪酸脱氢酶 fat-1基因在人乳腺癌细胞内的表达,改变细胞膜脂肪酸组成,对乳腺癌细胞的凋亡作用。方法: 构建含有fat-1 基因的重组腺病毒载体 (Ad.GFP.fat-1),通过包装细胞系（293）产生的腺病毒,感染人乳腺癌细胞MCF-7。提取细胞的总RNA,以fat-1的反义mRNA 作探针,用Northern Blot检测fat-1 基因在MCF-7细胞内的表达。MTT法分析fat-1 基因对MCF-7细胞增殖的影响,凋亡染色试剂盒检测细胞的凋亡。气相色谱仪分析对MCF-7细胞的n-6 PUFAs/n-3 PUFAs含量影响。结果: 通过基因重组技术,得到预期的重组病毒;fat-1 基因在人乳腺癌细胞MCF-7 中能有效异源表达,2天后,可检测到fat-1 mRNA的条带。与对照细胞相比,fat-1基因有效地抑制了MCF-7细胞的增殖（23%,p<0.05）,促进了凋亡（增加35%）;同时降低了人乳腺癌细胞MCF-7细胞膜n-6 PUFAs/n-3 PUFAs的比率。结论: 腺病毒介导的fat-1 基因能在人乳腺癌细胞MCF-7内有效异源表达,且抑制了MCF-7细胞的增殖。机理为降低了细胞膜的n-6 PUFAs/n-3 PUFAs的比率。     

Host plant mediation of diapause induction in the cabbage beetle, Colaphellus bowringi Baly （Coleoptera： Chrysomelidae）

The cabbage beetle, Colaphellus bowringiBaly （Coleoptera： Chrysomelidae）, is a serious pest of crucifers in China, undergoing an imaginal summer and winter diapause in the soil. The effects of host plants on diapause incidence were tested in the beetle. The ratio of adults entering diapause was significantly low when they fed on the mature leaves of Chinese cabbage Shanghaiqin （Brassica chinesis var communis） than those feeding on Chinese cabbage Suzhouqin （Brassica chinesis var communis）, radish （Raphanus sativus var longipinnatus） and stem mustard （Brassicajuncea vat tumida） at 25℃ combined with 13：11 （L： D） h. Fewer adults entered diapause on young leaves compared to physiologically aged and mature radish leaves at 25℃ combined with 13：11 （L： D） h. The effect of host plant species on diapause induction was also evident under continuously dark rearing conditions or at different photoperiods. These experimental results demonstrate that host plant mediation of diapause induction exists in the cabbage beetle. However, at temperatures ≤20℃ or photoperiods of 16：8 （L： D） h combined with 25℃, all individuals entered diapause regardless of the host plants, indicating that the effects of host plants on diapause induction could be expressed only within a limited range of temperatures and photoperiods.     

大猿叶虫哈尔滨种群的滞育诱导研究

本文研究了光周期、温度和食料对大猿叶虫Colaphellus bowringi Baly哈尔滨种群滞育诱导的影响。结果表明,在恒温20～30℃范围内,大猿叶虫哈尔滨种群滞育率为91.8%～100%,未见明显的光周期诱导反应,但温度对其滞育诱导具有一定的作用,高温可使少部分大猿叶虫继续发育而不滞育。在平均25℃的温周期与光周期L12∶D12条件下,其滞育诱导差异不显著。大猿叶虫取食白菜、油菜、雪里蕻、萝卜和独荇菜5种食料,在25℃滞育率为89.5%～100%;在28℃滞育率为76.9%～100%,食料种类对大猿叶虫哈尔滨种群滞育诱导差异显著,其中,取食独荇菜滞育率最低,取食萝卜滞育率最高。     

温度对大猿叶虫成虫繁殖和繁殖后滞育的影响

大猿叶虫Colaphellus bowringi Baly是十字花科蔬菜上的重要害虫。在田间,该虫的繁殖期出现在春季和秋季,以成虫在土中越夏和越冬。本试验在光周期L∶D=16∶8条件下,系统调查了不同温度(20、25和28℃)对大猿叶虫非滞育成虫繁殖的影响。结果表明:每雌平均日产卵量在28℃最大(51.24±2.90)粒,显著高于25℃和20℃的(39.57±2.86)粒和(31.53±2.02)粒,但由于28℃下的产卵持续时间明显短,导致了总产卵量在这3种温度间没有显著差异;28℃下的卵孵化率低于20℃和25℃,但没有显著差异;随着温度的升高,成虫寿命逐渐缩短,20℃与28℃间的雌虫寿命存在显著差异,20℃与25℃,28℃的雄虫寿命存在显著差异;在20、25、28℃下,均有30%的个体经历一段时间繁殖后进入滞育,其滞育前的产卵持续时间随着温度的升高而明显缩短,总产卵量也随着温度的升高而下降。     

三种蜂王浆蛋白质的营养评价

采用国际上通用的营养价值评价方法,全面评价了中蜂王浆、意蜂王浆和卡蜂王浆蛋白质的营养价值。三种王浆的必需氨基酸含量分别占其氨基酸总量的42.88%,40.98%和42.72%,含硫氨基酸为第一限制氨基酸。蛋白质的化学评分(CS)、氨基酸评分(AAS)、必需氨基酸指数(EAAI)、生物价(BV)、营养指数(NI)和氨基酸比值系数分(SRCAA)计算结果表明,三种蜂王浆都是良好的蛋白源,但中蜂王浆蛋白质的营养价值高于意蜂王浆和卡蜂王浆,明显与常规品质评价指标10-HDA的含量高低顺序不同。     

酪酸梭菌活菌散在治疗手足口病中的应用

目的观察和评价酪酸梭菌活菌散治疗手足口病的临床疗效。方法将34例手足口病患儿随机分为治疗组和对照组,治疗组18例,对照组16例,2组均给予对症支持治疗。其中治疗组在治疗的同时加用酪酸梭菌活菌散,1周岁以下,0．5g／次,1周岁以上,1g／次,3次／d,温水送服。对照组不用酪酸梭菌活菌散治疗。对两组疱疹、食欲、体温变化情况及腹泻等并发症进行统计分析。结果治疗组起效时间、疱疹消失时间、食欲正常时间和体温恢复正常时间显著短于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05或0．01）。结论酪酸梭菌活菌散治疗手足口病疗效显著,具有积极的临床意义。     

肿瘤坏死因子-α和白介素-2对成骨细胞增殖的影响

成骨细胞在骨组织改建中至关重要。本试验体外培养人骨肉瘤细胞系MG63,MTT方法检测白介素-2(Interleukin-2,IL-2)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对成骨细胞增殖的影响。结果表明,当IL-2的浓度大于100U/mL,其能够促进成骨细胞增殖(P0.05),一定浓度(50～1000U/mL)的TNF-α对成骨细胞的增殖也有促进作用。     

帕金森病患者脑脊液蛋白质组学分析

帕金森病（Parkinson′s disease,PD）是一种中枢神经系统慢性进展性疾病.本研究采用双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）分离脑脊液（cerebrospinal fluid,CSF）蛋白,获得2-DE图谱,通过ImageMaster 2D Elite软件分析寻找两组的差异蛋白点.结果显示,PD患者CSF中有4个蛋白点丰度下降,22个蛋白点丰度上升.还利用电喷雾质谱（electrospray ionization-tandem mass spectrometric,ESI-MS）对差异蛋白点进行鉴定,发现丰度上升的蛋白点有电压依赖性钙通道α2/δ1亚基,结合珠蛋白,β2-微球蛋白和阿朴脂蛋白A-IV前体,丰度下降的蛋白点为转铁蛋白和转甲状腺蛋白.研究发现,PD患者与对照组CSF蛋白质表达有明显差异,对差异蛋白进行质谱鉴定并了解它们的功能,为以后进一步研究他们在PD发病机制和病程进展中的作用奠定基础.     

小鼠P311蛋白与类赖氨酰氧化酶-1相互作用的鉴定

P311是利用抑制差减杂交技术从小鼠肺组织中筛选到的一个肺泡发育上游调节基因.它高水平表达于肺泡发育的相关阶段,而在慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者肺组织中表达水平大大下降.为深入探讨P311蛋白的作用机制,构建pGBKT7-P311诱饵表达载体,利用酵母双杂交技术,从小鼠肺组织cDNA文库中筛选出P311相互作用蛋白类赖氨酰氧化酶-1(lysyl oxidase-like 1,Loxl-1).并通过体内外免疫共沉淀及双分子荧光互补实验进行验证.为进一步研究P311蛋白的生物学功能提供新的思路。