通过DNA改组技术获得高活性β-葡萄糖苷酸酶

β 葡萄糖苷酸酶是在植物转基因中广泛应用的报告基因 .以质粒pBI12 1中的GUS基因为基础 ,利用DNA改组方法 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR对GUS基因进行了突变和改组 ,然后将改组的GUS基因连接到原核表达载体pG2 5 1中 ,构建了库容为 10 8的突变体库 .经过活性的筛选 ,得到活性提高的克隆 ,再以此为基础 ,经过新的改组、筛选得到活性大幅度提高的克隆GUS2 4 .基因测序显示 ,GUS2 4与GUS基因之间的同源性为 99 7% ,共有 6个核苷酸位点发生了改变 ,分别是 :379位的A突变为G ,396位的T突变为C ,711位的G突变为A ,95 8位T突变为C ,990位的T突变为C ,1649位的A突变为G .核苷酸序列推导的氨基酸序列显示 ,3个氨基酸发生了突变 ,12 7位的Ser突变为Gly ,32 0位的Trp突变为Arg ,5 5 0位的Asn突变为Ser.X gluc染色检测和荧光测活结果显示GUS2 4基因表达的 β 葡萄糖苷酸酶基较GUS基因表达产物活性提高 3倍     

猪1号染色体微卫星多态性研究及遗传连锁图谱的构建

微卫星具有多态性高、保守性好等优点。本研究选取以20cM左右的间距均匀分布于1号染色体的8个多态微卫星基因座构建猪1号染色体的遗传连锁图谱,为进一步进行重要经济性状基因座的定位打下基础。试验结果表明,8个基因座等位基因数目2~5个,各个基因座等位基因频率在0.015~0.75之间,杂合度为0.39705~0.67675,多态信息含量为0.32925~0.59316。构建的资源家系遗传连锁图谱总长181.5cM,与USDA结果基本一致,可进一步用于猪数量性状基因座定位的研究。 The Microsatellite Polymorphism Research on Porcine Chromosome 1 and the Construction of Its Genetic Map QU Yan-chun,DENG Chang-yan,XIONG Yuan-zhu,SU Yu-hong,ZHENG Rong,LIU Gui-lan The Key Laboratory of Pig Breeding and Genetics,The Ministry of Agriculture, Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China Abstract:As a molecular marker,microsatellite has many advantages such as high polymorphism and good conservativeness in animal genetic research.The study chose 8 microsatellite markers that evenly distributed on chromosome 1 with a distance about 20 cM to build the genetic map of porcine chromosome 1.The results of our experiment are as follows:the number of alleles for 8 markers is 2 to 5,their gene frequency is from 0.015 to 0.75,the heterozygosity is from 0.39705 to 0.67675 and the polymorphic information content is from 0.32925 to 0.59316.The map we built is basically in consistent with the result of USDA and can be used in searching quantitative traits loci in pigs. Key words：porcine; microsatellite; heterozygosity; polymorphic information content; genetic map     

鄱阳湖渔业资源现状及其环境监测

1997－1999年对鄱阳湖区渔业资源与环境进行了动态监测,统计渔获物2778kg,生物学测定1627尾,采集到鱼类122种,隶属于12目21科77属,其中鲤科鱼类种类最多,计65种,占53．3％,湖区渔获物个体偏小,以1－2龄鱼为主,鲤、鲫基本上是当年鱼,鄱阳湖现有鲤,鲫产卵场33处,主要分布在湖区东,南,西部,年均有效产卵面积616．66km^2,年均产卵量56．85亿,鄱阳湖区湖口,蛤蟆石,星子,康山水域湖水的pH,COD,Cr^ 6,Cd,Zn,Cu,Pb,总磷,氨氮,总汞均未超过渔业水质标准,鄱阳湖区水质良好。     

FGF对周围神经损伤后脊髓前角运动神经元的保护作用

目的：研究周围神经损伤后,局应用碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor ,bFGF）对脊髓前角运动神经元的保护作用。方法：切为SD大鼠右侧坐骨神经,近端套接单盲硅胶管后,管内立好注入20μlbFGF（浓度为4000u/ml）或等量生理盐水,术后2周,观察L3－L5脊央前角外侧群大、中小型神经元乙酰胆碱酯酶（acetyl cholinesterase,AChE）,酸性磷酸酶（acid phosphatas,Acp)和一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS)的阳性细胞数、反应强度和平均灰度。结果：坐骨神经损伤后,脊髓腰节段运动神经元因受损伤的影响发明明显改变。表现为AChE降低,Acp,NOS活性升高,局部应用bFGF后,大型运动神经元(α运动神经元）阳性细胞数,反应强度和平均灰度接近正常侧,与对照组比较具有显性意义（P＜0．01）。结论：bFGF可以有效地防止周围神经损伤引起的脊髓前角α运动神经元退变,促进其恢复。     

醋酸菌对甲醇的净化及细菌纤维素合成研究

介绍了巴氏醋酸杆菌以甲醇为唯一碳源,通过合成细菌纤维素而将含甲醇的废水中的甲醇净化,在试验条件下,适宜的培养条件为：培养基初始pH值5.0-6.0,接种量为5%,发酵培养温度为30℃,振瓶转速100r/min,巴氏醋酸杆菌对甲醇的最大净化浓度为3.8%,培养4d时的最大净化率达96%以上。     

温度、GA3和乙烯对中国水仙休眠的解除

自然条件下,4月至7月下旬期间,中国水仙鳞茎的呼吸速率逐渐下降,7月底至8月底开始上升之后又下降。30℃高温下的鳞茎发芽延缓,发芽率下降;15℃低温有利于打破休眠,7月下旬前的鳞茎,其休眠解除所需的低温处理时间长,GA3不能破除,还延缓其休眠时间,萌发率也下降;而7月下旬后的鳞茎,短时间低温或施用GA3均能破除其休眠,提高鳞茎的发芽率和发芽整齐度;乙烯在任何阶段都有助于水仙鳞茎休眠的解除。自然条件下7月下旬前水仙鳞茎可能是内生休眠,其休眠较难打破,需要长时间的低温或施用适当浓度的乙烯,7月下旬后可能是环境休眠,短时间的低温、GA3或乙烯都能破除其休眠。     

巨峰葡萄查尔酮异构酶基因克隆及表达分析

从一年生'巨峰'扦插苗中克隆了CHI基因,并采用半定量RT-PCR技术,以actin基因为内参,分析了CHI基因在'巨峰'葡萄果实不同发育阶段及组织的表达.序列分析表明:CHI基因序列中含有3个内含子,4个外显子.信息学分析显示,CHI基因编码的多肽链既没有信号肽,也不存在跨膜结构域,且亚细胞定位于细胞质中.半定量RT-PCR分析结果表明,CHI基因在果皮、果肉、种子及幼叶和幼根中都表达,但不同的组织中表达方式不同.CHI基因在花后30 d和90 d的果皮中强烈表达;但在果肉中,CHI基因在花后90 d表达强烈,而在种子中于花后45 d表达强烈,随果实发育,其表达逐渐下降.在上述实验的同时,高温处理抑制CHI基因在一年生盆栽'巨峰'葡萄幼叶中的表达,随处理时间延长,其表达又有所恢复;高温诱导CHI基因在幼根的表达.     

干细胞治疗：从研发到应用

干细胞治疗的应用既离不开基础研究的发展和技术的不断进步,也离不开科技政策的支持、生产工艺的进步、临床研究的发展,以及企业对干细胞相关产品的开发。本文从管理政策、生产技术、临床研究、产品开发等多个角度,就与干细胞治疗相关的研究现状和前景进行评述。     

钙离子激动钾通道在大鼠逼尿肌不稳定膀胱中的表达及变化

目的:探讨钙离子激动钾通道与逼尿肌功能变化之间的关系.方法:根据膀胱压力容积测定结果将动物分为稳定组(29只)和不稳定组(9只),其中稳定组分为BOO(11只)、SCI模型(9只)和时照组(9只),通过RT-PCR技术测定逼尿肌中各型钙离子激动钾通道表达及变化.结果:正常大鼠中逼尿肌不稳定发生率为24.3%.钙离子激动钾通道BKCa和SKCa亚型在各组模型大鼠逼尿肌中均有表达.钙离子激动钾通道BKCa亚型在IDI组、BOO和SCI组逼尿肌中的表达低于正常对照组.结论:钙离子激动钾通道的表达异常引起平滑肌细胞静息电位降低、兴奋性增高可能是引起逼尿肌不稳定的原因之一.     

邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对大鼠认知功能的影响

目的:观察邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对大鼠认知功能的影响.方法:15月成熟雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组(n=10)、对照组(C组)、DBP暴露组(E组)、药物预防组(P组)、药物治疗组(T组).E组食用经DBP浸泡后的食物3个月、P组食用经DBP浸泡后的食物3个月,期间每天注射抗小胶质细胞活化药物吲哚美辛(按照2.5mg/kg,2次/天,腹腔注射),T组食用经DBP浸泡后的食物3个月后使用吲哚美辛治疗(按照2.5mg/kg,2次/天,腹腔注射1周),N组给予同剂量的生理盐水腹腔注射.各组于停药后1d使用Morris水迷宫实验,末次水迷宫测试结束后1h处死大鼠,取海马组织进行化学比色法检测其海马组织内AChE活性.结果:E、P、T组与对照组组比较,大鼠学习记忆能力均明显降低(P＜0.001),AChE活性明显增加(P＜0.001);P、T组与E组,P组与T组相比,大鼠学习能力及记忆能力无显著性差异(P＞0.05),AChE活性无显著性变化(P＞0.05).结论:DBP可引起正常大鼠认知功能障碍,其机制可能与大鼠海马组织AChE活性增加有关.