枳PPF-1同源基因的克隆及分析

以枳[Poncirus trifoliata(L.)Raf.]实生苗为材料,采用RT-PCR及RACE技术,获得了PPF-1(开花、衰老相关基因)同源基因的cDNA全长序列PtPPF-1,该cDNA全长1 493 bp,编码452个氨基酸,与豌豆PPF-1、拟南芥ALB3、水稻PPF-1及葡萄一未命名基因的氨基酸序列同源性较高,说明PPF-1基因在进化过程中可能变异较小。半定量RT-PCR分析表明PtPPF-1在叶片中表达量最高,顶芽和茎中相似,在根中未检测到,表明该基因功能与叶绿体有关。     

安徽滁州琅琊山下奥陶统弗洛阶(红花园组上部)的苔藓动物

寒武纪没有化石苔藓动物的任何记录.最老的、毫无疑问的、真正的苔藓动物,发现于我国峡东地区的下奥陶统特马豆克阶地层中.这类苔藓动物以丰富但多样性低的变口目和少量的隐口目为代表.弗洛期的一些苔藓动物,在北美,英国和波罗的海地区(俄罗斯西北部)已相继发现,这时以Ceramopora?unapensis为代表的泡孔目苔藓动物开始出现,有一定的多样性.中奥陶世初期,苔藓动物迅速崛起,古生代狭唇纲的四个目--变口目、隐口目、泡孔目和管孔目(=环口目)苔藓动物都已经有了代表.由于奥陶纪是苔藓动物发生、演化发展和辐射的重要时期,因此,奥陶纪,特别是早奥陶世苔藓动物的任何新的发现,都有重要的意义.本文描述和解释的一个新的苔藓动物群,发现于安徽滁州琅琊山弗洛阶的红花园组上部.这个苔藓动物群由变口目爱沙尼亚苔虫亚目的两个种:Dianulites hexaporites(Pander),Orbiramus grandis sp.nov.和隐口目翼网苔虫亚目的一个种:Prophyllodi-ctya putilovensis Lavrentjeva组成.尽管这个苔藓动物群在局部地区可能还是低多样性的,但就整个世界范围而言,有一定的多样性,类似于同样以变口目苔藓动物占优势的比林根苔藓动物群,后一苔藓动物群产于波罗的海以东地区(俄罗斯西北部)同时代的地层中.     

五倍子小鼠肝脏毒性的基因表达谱分析

昆明种小鼠（雄性,体重20±2g）随机分为正常对照组和五倍子给药组。给药组每日灌胃五倍子提取物（0．2mL／10g体重,相当于8g五倍子生药／1kg体重）一次,连续给药30天。对照组灌胃等量生理盐水。之后分别提取两组小鼠的肝组织总mRNA,经反转录分别用Cy3,Cy5荧光标记．制备用于芯片杂交的cDNA探针。两种探针等量混合后与小鼠全基因组寡核苷酸芯片杂交．杂交信号经芯片扫描仪获取并用GenePix Pro4．0软件分析。结果表明,五倍子给药组中有461条基因差异表达,其中上调基因267条,下调基因194条,功能已知基因373条,功能未知基因88条。通过对这些差异表达基因的生物学功能及生物通路分析,它们主要涉及代谢、DNA结合与转录、蛋白质合成与修饰、细胞骨架及黏附因子、细胞周期与分化、离子通道与受体、信号转导、免疫、细胞凋亡等。上述研究结果对分析五倍子肝损伤机制可能具有十分重要的作用。     

外源ABA和GA3对红肉脐橙果皮主要色素含量变化的影响

测定了红肉脐橙果实发育期间果皮叶绿素和总类胡萝卜素含量的变化动态,并在果实转色前用不同浓度的外源ABA和GA₃处理后测定果皮色素含量的变化动态。结果表明,红肉脐橙果皮叶绿素总量于9月20日出现最大值(0.1469mg/gfw),总类胡萝卜素含量于12月20日达到最大值(0.0321mg/gfw);转色前用ABA处理后加速果皮叶绿素的降解,但抑制果皮类胡萝卜素的积累;转色前用GA₃处理后延缓果皮叶绿素的降解,并同样抑制果皮类胡萝卜素的积累,严重阻碍了果皮类胡萝卜素的合成。     

复合PCR鉴定胸膜肺炎放线杆菌方法的建立及初步应用

根据胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)apxIVA毒素基因序列和16SrRNA序列分别设计了一对特异性引物P1P4和一对通用引物S7S10,建立了检测App全部15个血清型的复合PCR方法。对App的15个血清型国际参考株和国内的11个App菌株进行检测,都能得到363bp和692bp的两个扩增片段。而放线杆菌等13株参考菌株只能得到692bp的扩增片段。该方法能将15个血清型的App菌株鉴定到种。检测的灵敏度达9pgDNA1300CFU。用建立的方法检测临床分离的302株可疑菌株,阳性4株,与其它鉴定方法相符。结果表明复合PCR可用于App菌株的鉴定。     

Acidiphilium cryptum DX1-1 CO2固定相关基因的克隆及在不同营养方式下的差异表达研究

目的：研究Acidiphilium cryptum DX1-1 CO2固定相关基因的克隆及在不同营养方式下的差异表达。方法：以Acidiphilium cryptum DX1-1（CCTCCM208056）的DNA为模板,基于A．cryptum JF-5同源功能基因序列（JGI,http：／／genome．oml．gov／cgi-bin／JGI_microbial／keggcategories．cgi）设计引物,对菌株DX1-1中的CO2固定相关基因Acry_0824,Acry_082,Acry_1067,Acry_1272,Acry_0022和Acry_0827进行了克隆和序列比对分析;并对它们在不同营养条件下的基因差异表达进行了分析。结果：从菌株DX1—1成功克隆了所选择的CO2固定相关基因,其序列与菌株JF的同源功能基因序列一致性分别达到了99．8％,99．6％,99．6％,99．5％,99．3％和99．8％;Acry_0824,Acry_1272和Acry_0827三个基因在各种混合养条件下表达均上调,说明它们在DX1—1 CO2固定中起较关键的作用。在加入0．1％的葡萄糖混合养条件下,DX1—1细胞明显利用空气中的CO2来生长和累积PHB。结论：限制性葡萄糖可以促进细胞自养生长和累积PHB。     

小鼠神经生长因子直接竞争酶联免疫检测方法的建立

目的:利用小鼠神经生长因子(mNGF)和纯化的兔抗mNGF IgG,建立mNGF直接竞争酶联免疫检测方法。方法:以亲和纯化兔抗mNGF IgG作为包被抗体,封闭、洗涤后加入用稀释液稀释的不同浓度的标准mNGF或样品液和生物素标记的mNGF混合液,于37℃孵育80 min或室温孵育120 min,洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素,洗涤后加入显色液显色,测定D450nm值,通过标准曲线计算待测样品中mNGF含量。结果与结论:建立了mNGF直接竞争酶联免疫检测方法;该方法的灵敏度约20 ng,变异系数为批内≤10%、批间≤15%,回收率为85%～115%;利用该方法检测了3批样品中mNGF的含量。     

血浆IIA 分泌型磷脂酶A2 水平与冠脉支架术后再狭窄关系

目的:测定稳定型冠心病患者支架植入术(percutanous coronary intervention,PCI)前血浆IIA分泌型磷脂酶A2(group IIAsecretory phospholipase A2,ⅡA-sPLA2)的水平,以探讨该酶与冠脉支架术后再狭窄的可能关系。方法:稳定型冠心病行PCI患者63例,非冠心病患者39例,健康正常对照组42例,分别取外周静脉血测定血浆ⅡA-sPLA2酶浓度。PCI患者6个月后复查造影。结果:PCI患者术前该酶浓度显著高于正常对照组(P<0.05),支架内再狭窄率34.9%,再狭窄(restenosis,RS)患者支架术前该酶水平与无再狭窄患者该酶水平无统计学差异(P>0.05)。结论:PCI患者术前血浆ⅡA-sPLA2酶浓度显著高于正常对照组,但可能与支架术后再狭窄无关。     

鼠伤寒沙门氏菌群体感应复苏oxyR基因缺失引起的VBNC状态

探讨鼠伤寒沙门氏菌oxyR基因缺失株引起的VBNC状态及其与群体感应的关系。运用同源重组的方法构建oxyR基因无痕缺失的鼠伤寒沙门氏菌并检测该菌株对H_2O_2的敏感性;将oxyR基因缺失株和亲本株(WT)涂布或滴于LB固体培养基,观察其是否生长及其浓度依赖性生长情况;用swimming和swarming平板检测oxyR基因缺失株和WT的运动能力;检测固体培养基和液体培养基中沙门氏菌分解H_2O_2的能力。成功构建了oxyR无痕缺失菌株;oxyR基因缺失株在0.1 mmol/L H_2O_2的LB平板上形成的菌苔发生了变形,在1 mmol/L H_2O_2的LB平板上不能生长,而WT均能生长;6×10~6和6×10~5 cfu/mL的WT涂布于LB平板上能长满菌苔,而等量的oxyR缺失株不能生长菌落;不同浓度的WT滴于LB平板均能形成菌苔,而oxyR缺失株仅在OD_(600)≥10~(-1)浓度时才能形成菌苔;oxyR缺失株泳动距离无显著性变化,而群集运动距离显著性大于WT;固体培养的沙门氏菌比液体培养的沙门氏菌有更强的分解H_2O_2的能力。鼠伤寒沙门氏菌的群体感应系统通过调控其群集运动和H_2O_2分解能力来复苏由oxyR基因缺失引起的VBNC状态。     

酵母表达质粒pGBKT7-hPROKR2-Ct的构建及hPROKR2C端蛋白的自激活鉴定

目的:检测Y2HGold酵母株中表达的h PROKR2 C端蛋白是否有毒性及自激活,为后期利用酵母双杂交技术研究h PROKR2 C端相互作用蛋白奠定基础。方法:构建酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct质粒,将其转入酵母感受态中验证其是否表达并计算转化率;通过观察SD/-Trp平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白的毒性检测;通过观察SD/-Trp、SDO/-Trp/X、SDO/-Trp/X/Aba平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白自活性检测。结果:构建了酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct,将其转入酵母感受态中,转化率为8.5×104cfu/μg;毒性及自活性检测均显示h PROKR2 C端蛋白对酵母菌株无毒性、不具有自活性。结论:可以利用酵母双杂交系统研究hPROKR2 C端相互作用蛋白。